EGF结构与功能研究

表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)在1962年首次由Cohen报道发现,其后的三十余年,对这一小分子蛋白进行了广泛而深入的研究.人和小鼠的EGF由53个氨基酸组成的、分子量为6KDa,有三对保守的二硫键,没有糖基化位点,二级结构中没有α-螺旋.

Sirtuin:依赖NAD^+的去乙酰化酶

组蛋白的乙酰化-去乙酰化修饰在基因表达调控中起重要作用。参与去乙酰化的酶除了经典的Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC),还有比较特殊的III类HDAC———Sirtuin,其活性依赖于NAD+。酵母的Sirtuin———Sir2在交配型基因沉默、端粒区基因沉默、rDNA沉默中起重要作用,还可能参与长寿与衰老的调节。在人类,Sirtuin的底物是组蛋白、各种转录因子如p53、FOXO、NF-κB、乙酰化酶如p300和其他的各种功能蛋白质。根据底物特点推测,人类Sirtuin蛋白的生理功能可能一方面是参与调节细胞在应激条件下的存活与死亡的平衡,另一方面是参与代谢的调节。

SUMO:一种新发现的翻译后修饰蛋白

靶蛋白被小泛蛋白样修饰蛋白 (smallubiquitin likemodifier,SUMO)修饰属于真核基因表达的翻译后加工 ,这一过程与细胞核内的一系列生理过程中有关 ,包括 :核运输、信号传递、维持复杂基因组的复制忠实性 。

v-fos转化效应因子是CD2胞内区新的结合蛋白

在以前的研究中,本实验室采用酵母双杂交技术,从人KT3T淋巴细胞cDNA文库中筛选到一个与CD2胞内区结合的新的蛋白分子,称为v-fos转化效因子(v-fostransformationeffector,Fte-1).本研究进一步分析鉴定了Fte-1与CD2相互作用的分子机制和Fte-1的生物学功能.应用研究生物大分子相互作用的生物传感器分析了CD2胞内区与Fte-1结合特性和亲和力,表明二者确为特异性结合,其解离常数KD值为10?7mol/L;分子缺失突变和体外磷酸化实验结果表明,Fte-1可被蛋白激酶C(PKC)磷酸化,其磷酸化位点为Ser238;基因表达研究显示,在JurkatT淋巴细胞白血病细胞中Fte-1呈簇集性分布;CD2单克隆抗体T11刺激JurkatT淋巴细胞后,Fte-1这种簇集性分布特征消失,而趋向细胞膜,并与CD2共定位于细胞膜区域;Fte-1的PKC磷酸化位点Ser238突变为Gly238后,其与CD2分子的共定位能力丧失,表明Fte-1的Ser238的PKC磷酸化对Fte-1和CD2在T淋巴细胞内的结合起关键作用;使用Fte-1干扰RNA技术抑制Fte-1在JurkatT淋巴细胞中的表达,可抑制佛波酯(PMA)和离子霉素(ionomycin)引起的JurkatT淋巴细胞激活后凋亡,提示Fte-1参与了CD2对T淋巴细胞凋亡的调节.上述结果进一步确证Fte-1是CD2胞内区的特异结合蛋白,并可能参与了CD2介导的细胞凋亡信号传递.