封闭群树鼩的微卫星遗传特性分析

目的比较分析远交繁殖的I^IV代次的滇西亚种树鼩群体的遗传差异和分化程度,为培育封闭群树鼩种群提供遗传学依据。方法提取I^IV四个代次共49只滇西亚种树鼩的全血基因组DNA,选取树鼩的18个微卫星位点,结合荧光标记(FAM)PCR扩增技术,通过毛细管电泳技术检测扩增产物,并利用POPGENE、FSTAT等软件比较各代次树鼩的遗传相关指标。结果四个代次的树鼩群体共检测到等位基因(Na)89个,平均有效等位基因数(Ne)为3.779,平均观察杂合度(Ho)为0.523,平均期望杂合度(He)为0.613,平均多态信息含量(PIC)为0.558,平均Shannon信息指数(I)为1.277,平均等位基因丰富度(AR)为2.938,遗传分化系数(Fst)平均值为0.046;其遗传距离及无偏遗传距离分别为0.049~0.159和0.022~0.109。结论培育的树鼩群体的遗传多样性较丰富,且不存在较大的遗传差异和分化程度。

肠道菌群对疫苗有效性影响的研究进展

机体与肠道菌群间的共生关系对于维持机体健康包括对免疫系统发育、增强上皮屏障和营养的吸收功能至关重要。越来越多的研究表明,肠道菌群影响机体免疫系统的发生与发展。这些发现表明肠道菌群的结构组成最终可能影响疫苗的有效性。虽然目前关于表明肠道菌群改变疫苗有效性的证据比较少,但是进一步了解机体免疫系统与肠道菌群的相互作用有助于开发佐剂及疫苗,从而用于疾病预防与治疗。本文对近年来国内外关于肠道菌群对免疫系统的作用、肠道菌群和益生菌对疫苗免疫应答的影响进行概述,以期为疫苗的研究提供更多的理论参考。

Ⅲ型登革病毒D9964株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究

选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细胞,反复传代直至病毒能在细胞中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞,取第3～7d细胞提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞中的增殖动态。结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5～6d为病毒在细胞内的增殖高峰期。

轮状病毒动物感染模型研究进展

建立动物模型对于疾病致病机理、疫苗研制、药物筛选都具有重要意义。疾病动物模型的建立不仅与病原体的特性有关,还涉及到动物的种类。至今,用于轮状病毒感染的动物模型尚且不多,具有敏感性又适用于大多数毒株的,能完全模拟人的致病过程的实验动物还不确定,给轮状病毒疫苗及治疗药物的研发带来了很大的不便。为推进寻求理想的轮状病毒实验动物模型,查阅近几年国内外关于轮状病毒感染动物模型种类、利用轮状病毒感染动物模型进行的相关实验研究进展以及相关的文献报道,并对其进行了总结分析,为将来可能的优化、选择轮状病毒感染动物模型提供理论参考依据。

3种ELISA方法与微量细胞中和试验检测SARS-CoV-2抗体滴度的相关性分析

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度,并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%,抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)与微量细胞中和试验检测结果的相关系数(r)分别为0.494、0.371和0.181。结论检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。

ECHO20病毒株KM／EV20／2010的分离鉴定及其VP1基因序列特征分析

目的分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20（Echovirus20，ECHO20）KM／EV20／2010病毒株，分析其VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离；采用微量细胞病变法，经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定；采用RT—PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定，并运用Mega4．0等软件进行分析处理。结果分离毒株经微量中和试验鉴定为ECH020血清型，编号为KM／EV20／2010；经RT—PCR法扩增获得为867bp的VP1基因，与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79．5％～91．7％和98．9％～99．6％，与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80．2％～83．2％和96．4％～99．6％；在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支。结论KM／EV20／2010分离株为肠道病毒ECH020型病毒，可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖。