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白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究
1
作者
杨璐
段志敏
+4 位作者
何艳艳
王嘉宁
陈青
陈旭
李岷
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期301-308,共8页
目的探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响。方法通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数(MOI)=50,下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,...
目的探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响。方法通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数(MOI)=50,下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型(WT)BMDM及GSDMD敲除(KO)BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶(LDH)释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β+白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高(t=13.02、17.51,P=或<0.001),而IL-18 mRNA表达水平无明显变化(P=0.486),且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高(H=12.90,P=0.012),而IL-18的分泌水平无明显变化(F=0.48,P=0.753),且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组(F=24.22,P=0.008)。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM[(50.3±1.10)%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[(58.53±1.19)%,t=5.09,P=0.007];白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率(38.40%±0.50%)高于WT组BMDM(34.37%±0.52%),t=4.72,P=0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率(22.52%±0.18%)高于WT BMDM(12.48%±0.15%),t=42.36,P<0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低(均P<0.001)。结论白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。
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关键词
白色念珠菌
巨噬细胞
焦亡
白细胞介素1Β
白细胞介素18
Gasdermin
D
原文传递
白念珠菌对棘白菌素类药物耐药机制的研究进展
2
作者
杨璐
段志敏
李岷
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1114-1117,共4页
随着棘白菌素类抗真菌药物的应用,对其耐药的白念珠菌菌株越来越多。已发现白念珠菌对棘白菌素类药物耐药主要与FKS突变、MSH2突变、ERG3突变及生物膜形成、细胞自身应激反应、几丁质含量增高、膜鞘脂合成等相关。本文综述白念珠菌相关...
随着棘白菌素类抗真菌药物的应用,对其耐药的白念珠菌菌株越来越多。已发现白念珠菌对棘白菌素类药物耐药主要与FKS突变、MSH2突变、ERG3突变及生物膜形成、细胞自身应激反应、几丁质含量增高、膜鞘脂合成等相关。本文综述白念珠菌相关耐药基因及可能的耐药调控机制,有助于临床克服和预防棘白菌素耐药,探索治疗白念珠菌感染的新靶点,开发新药物。
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关键词
白色念珠菌
抗药性
真菌
棘白菌素类
点突变
FKS
原文传递
西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响
3
作者
张云
杨晓雯
+8 位作者
徐倩倩
施辛
陈旭
李莉
徐松
黄丹
鞠梅
陈崑
顾恒
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期776-780,共5页
目的:探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组(单纯DMEM培养基处理)、二甲基亚砜(DMSO)组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫...
目的:探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组(单纯DMEM培养基处理)、二甲基亚砜(DMSO)组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液(EBSS)组。作用4 h后,Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B(LC3A/B)、重组人γ-氨基丁酸受体相关蛋白(GABARAP)的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示,对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值差异无统计学意义(P〉0.05);20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值较对照组均明显升高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示,HeLa细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达呈正相关(r=0.869,95%CI:0.807~0.999,P=0.051),LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关(r=-0.742,95%CI:-0.982~0.406,P=0.042);A431细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关(r=0.837,95%CI:-0.173~0.989,P=0.037),LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关(r=-0.684,95%CI:-0.977~0.500,P=0.047)。吖啶橙染色显示,A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组(23.750%±0.260%)与EBSS组(32.450%±0.488%)同样高于对照组(15.987%±0.242%,均P 〈0.05);HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组(33.307%±0.715%)和EBSS组(66.097%±1.141%)高于对照组(14.117%±0.295%,均P〈0.05)。结论经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平,GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。
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关键词
自噬
细胞系
肿瘤
HELA细胞
西罗莫司
饥饿
A431细胞
GABARAP
原文传递
题名
白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究
1
作者
杨璐
段志敏
何艳艳
王嘉宁
陈青
陈旭
李岷
机构
中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室
南京医科大学全球健康中心
南京大学
医学院
附属鼓楼医院输血科
出处
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期301-308,共8页
基金
国家自然科学基金(82103749、82173432)
江苏省自然科学基金(BK20190144)
南京市国家级临床医学中心培育计划项目(2019060001)。
文摘
目的探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响。方法通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数(MOI)=50,下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型(WT)BMDM及GSDMD敲除(KO)BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶(LDH)释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β+白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高(t=13.02、17.51,P=或<0.001),而IL-18 mRNA表达水平无明显变化(P=0.486),且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高(H=12.90,P=0.012),而IL-18的分泌水平无明显变化(F=0.48,P=0.753),且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组(F=24.22,P=0.008)。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM[(50.3±1.10)%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[(58.53±1.19)%,t=5.09,P=0.007];白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率(38.40%±0.50%)高于WT组BMDM(34.37%±0.52%),t=4.72,P=0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率(22.52%±0.18%)高于WT BMDM(12.48%±0.15%),t=42.36,P<0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低(均P<0.001)。结论白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。
关键词
白色念珠菌
巨噬细胞
焦亡
白细胞介素1Β
白细胞介素18
Gasdermin
D
Keywords
Candida albicans
Macrophages
Pyroptosis
Interleukin-1beta
Interleukin-18
GSDMD
分类号
R519.3 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
白念珠菌对棘白菌素类药物耐药机制的研究进展
2
作者
杨璐
段志敏
李岷
机构
中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室
出处
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1114-1117,共4页
基金
国家自然科学基金(81773338)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2017-I2M-1-017)
南京市国家级临床医学中心培育计划项目(2019060001)。
文摘
随着棘白菌素类抗真菌药物的应用,对其耐药的白念珠菌菌株越来越多。已发现白念珠菌对棘白菌素类药物耐药主要与FKS突变、MSH2突变、ERG3突变及生物膜形成、细胞自身应激反应、几丁质含量增高、膜鞘脂合成等相关。本文综述白念珠菌相关耐药基因及可能的耐药调控机制,有助于临床克服和预防棘白菌素耐药,探索治疗白念珠菌感染的新靶点,开发新药物。
关键词
白色念珠菌
抗药性
真菌
棘白菌素类
点突变
FKS
Keywords
Candida albicans
Drug resistance,fungal
Echinocandin
Point mutations
FKS
分类号
R379.4 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响
3
作者
张云
杨晓雯
徐倩倩
施辛
陈旭
李莉
徐松
黄丹
鞠梅
陈崑
顾恒
机构
苏州大学附属第二医院
皮肤
科
中国医学科学院
、北京协和医学院
、
皮肤病
研究所
、江苏省
皮肤病
与性病
分子生物学
重点
实验室
、理疗科
出处
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期776-780,共5页
基金
国家自然科学基金(81371755、81171513)
江苏省自然科学基金(BK20131064)
+1 种基金
高等学校博士学科点专项科研基金(20131106120046)
北京协和医学院协和青年基金(3332014008)
文摘
目的:探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组(单纯DMEM培养基处理)、二甲基亚砜(DMSO)组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液(EBSS)组。作用4 h后,Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B(LC3A/B)、重组人γ-氨基丁酸受体相关蛋白(GABARAP)的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示,对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值差异无统计学意义(P〉0.05);20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值较对照组均明显升高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示,HeLa细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达呈正相关(r=0.869,95%CI:0.807~0.999,P=0.051),LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关(r=-0.742,95%CI:-0.982~0.406,P=0.042);A431细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关(r=0.837,95%CI:-0.173~0.989,P=0.037),LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关(r=-0.684,95%CI:-0.977~0.500,P=0.047)。吖啶橙染色显示,A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组(23.750%±0.260%)与EBSS组(32.450%±0.488%)同样高于对照组(15.987%±0.242%,均P 〈0.05);HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组(33.307%±0.715%)和EBSS组(66.097%±1.141%)高于对照组(14.117%±0.295%,均P〈0.05)。结论经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平,GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。
关键词
自噬
细胞系
肿瘤
HELA细胞
西罗莫司
饥饿
A431细胞
GABARAP
Keywords
Autophagy
Cell line, tumor
HeLa cells
Sirolimus
Hunger
A431 cells
GABARAP
分类号
R739.5 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究
杨璐
段志敏
何艳艳
王嘉宁
陈青
陈旭
李岷
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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2
白念珠菌对棘白菌素类药物耐药机制的研究进展
杨璐
段志敏
李岷
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
原文传递
3
西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响
张云
杨晓雯
徐倩倩
施辛
陈旭
李莉
徐松
黄丹
鞠梅
陈崑
顾恒
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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