肿瘤分子细胞遗传学研究方法的最新进展

荧光原位杂交已广泛应用于分子生物学、肿瘤遗传学的研究,在其基础上,又发展了许多新 技术,并已成为极为重要的研究手段。

Id蛋白与肿瘤关系的研究进展

DNA结合和分化抑制剂(inhibitor of DNA binding and differentiation,Id)是螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子亚家族的一个成员,4个Id成员与碱性螺旋-环-螺旋(basichehx-loop-helix,bHLH)蛋白形成二聚体,但缺乏碱性DNA结合结构域,因此,Id-bHLH异源二聚体不能结合DNA,故Id蛋白是bHLH转录因子的显性负调节子.Id蛋白也能与非HLH蛋白相互作用,如Rb、Ets、同源盒家族转录因子Pax、小鼠Id相关蛋白1(MIDA-1),并抑制其活性.现已证实Id在肿瘤细胞中通常过表达,并且与肿瘤细胞增生、分化、凋亡、侵袭等密切相关.

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的： 探讨Ａｓ２ Ｏ３ 对人肺腺癌ＧＬＣ８２ 细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制。方法：通过ＭＴＴ 还原法检测Ａｓ２ Ｏ３ 对该细胞系生长的影响；用光学显微镜、流式细胞仪、ＤＮＡ 凝胶电泳和细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ） 研究Ａｓ２Ｏ３ 诱导细胞凋亡的情况；用ＲＴＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 或Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析Ａｓ２ Ｏ３ 对ｃｍｙｃ、ｐ５３、ｐ１６ 和ｂｃｌＸ 等基因表达的影响。结果：Ａｓ２ Ｏ３ 能抑制ＧＬＣ８２ 细胞的生长。Ａｓ２ Ｏ３ 处理ＧＬＣ８２ 细胞后，光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞，细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰，ＤＮＡ 凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ 有规律断裂形成的梯状图谱，蛋白水平的检测表明Ａｓ２ Ｏ３ 可使细胞ｃｍｙｃ 基因表达下降，ｐ１６ 和ｐ５３ 表达升高。结论：Ａｓ２ Ｏ３ 能显著抑制ＧＬＣ８２ 细胞生长、诱导细胞凋亡，并主要通过调节ｃｍｙｃ，ｐ１６ 和ｐ５３ 等基因的表达来实现。

功能基因组学的研究内容与方法

基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学.综述了功能基因组学研究的内容和方法,主要包括应用微点阵、基因表达系列分析(SAGE)、蛋白质组、生物信息学等方法来研究基因组表达概况、基因组多样性。

蛋白质泛素化降解途径与肿瘤发生的关系

泛素是在真核生物中普遍存在,具有很高的保守性的一种蛋白质.泛素化是细胞维持对那些受组成型调节和环境刺激产生的蛋白质水平的基本调节方式.泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质质控系统,参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化,以及信号传导等多种细胞生理过程,因此细胞内蛋白质泛素化降解是蛋白质重要的转录后修饰方式之一.泛素化底物及其随后的降解过程贯穿于整个细胞的质膜系统,从细胞膜、内质网到核膜等等.泛素化系统的作用位点主要位于细胞膜表面、内质网和细胞核.细胞泛素化与去泛素化过程的改变与肿瘤的发生密切相关.认识细胞内蛋白质泛素化降解过程,对治疗由泛素系统紊乱而引起的各种疾病,尤其是恶性肿瘤具有重要意义.

Gadd45a在抑制细胞转化和肿瘤恶性进展中的作用

Gadd45a,一个受p53和BRCA1调节的生长阻滞和DNA损伤基因,在抑制细胞转化和肿瘤恶性进展中扮演重要的角色.Gadd45a可以通过抑制细胞生长以及促进DNA损伤修复等间接或者直接方式维持基因组稳定性,从而抑制细胞转化和肿瘤的恶性进展.此外,Gadd45a还可通过对一些信号传导通路的调节,参与肿瘤发生发展的抑制.

转染人肿瘤坏死因子-α、白介素-2基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响

目的 研究转染人体肿瘤坏死因子 α(huTNF α)、白介素 2 (hIL 2 )基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响 ,探讨基因治疗逆转肺癌多药耐药的可行性。方法 通过阳离子脂质体将克隆的huTNF α和hIL 2基因导入肺癌细胞系A5 49、GLC 82、H44 6、H460 ,经筛选阳性单克隆 ,用半定量RT PCR方法检测转染目的基因前后肺癌细胞系MDR1、LRP基因在mRNA水平的表达情况。结果 MDR1在A5 49、GLC 82、H44 6、H460 ,LRP在A5 49、GLC 82、H 460中均呈阳性表达 ;转染huTNF α目的基因后各肺癌细胞系MDR1、LRP基因的表达无影响 ,而转染hIL 2目的基因能够明显抑制A5 49、H44 6、H 460细胞系MDR1的表达。结论 MDR1、LRP基因在肺癌细胞系中的阳性表达与肺癌的固有耐药性有关 ;huTNF α、hIL 2目的基因能够在被转染细胞中获得表达 ,而且转染hIL 2目的基因能够明显抑制MDR1在A5 49、H44 6、H460的表达。该结果不仅为探讨肺癌多药耐药性的病理机制提供了一个新的线索 ,而且为基因治疗逆转肺癌的多药耐药性提供了一个新的实验依据。

肿瘤基因识别与肿瘤蛋白标志物的统一

当今人类的社会生活中健康已成为第一需求,由于疫苗和抗生素的发现,人类的寿命不断延长,由此带来了肿瘤的高发病率。人类为征服癌症努力了近一个世纪,通过对癌症的研究人类在生命科学上有了显著的进步,最大的受益是对机体的生长发育、遗传与进化、免疫防御、衰老死亡等生命现象有了突破性的进展。虽然人类在病毒与肿瘤、细胞分化与肿瘤、细胞周期与肿瘤、癌基因、抑癌基因、信号传导与肿瘤和血管生长与转移等方面取得进展,实际上我们对肿瘤的认识非常有限。我们有足够的理由相信人类征服肿瘤的前途是光明的,同时也要清醒的认识到新陈代谢和生长发育、衰老死亡是生命的基本特征。人类征服癌症应遵循自然规律的法则,我们应采取这样的科学观点和方法。 随着社会的发展和科技的进步,人类对肿瘤的认识逐步深入。特别是边缘学科和新技术的出现与整合给生命科学注入了无限的活力。基因组、蛋白组学和生物信息学,与之伴行发展起来的生物芯片技术为人类认识细胞癌变和肿瘤发生发展的规律提供了新的途径。疾病基因识别、功能基因学、蛋白组学、生物信息学的统一之日,可能是机体内外环境平衡调节的细胞、分子机制阐明之时。本期论坛针对目前肿瘤研究的前沿和重要科学问题。

表面增强激光解吸电离质谱芯片在蛋白质组学研究中的应用

蛋白质组学是当今生命科学研究中最活跃的前沿领域。其主要技术手段是双向凝胶电泳、质谱技术和生物信息学,但各有其局限性。芯片技术和质谱技术相结合产生的表面增强激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术,将蛋白质样品的制备、生化反应到检测分析的整个过程集成在芯片上进行,实现了新型、高效、快速、高通量的检测,不仅促进了蛋白质组学研究的迅速发展,而且为阐明生命活动的规律和疾病的发病机理以及寻找合适的医药提供提供了有力的工具。

重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

背景与目的:研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法:用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒(rAAV)载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostatin。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果:C57BL/6小鼠肌肉注射1011TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色素瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1%,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7%。结论:重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。

荧光原位杂交及其在泌尿男生殖系肿瘤中的应用

本文主要阐述了荧光原位杂交原理，比较基因组杂交，多色多靶荧光原位杂交技术以及与其它细胞分子生物学方法的比较，并对其在男生殖系肿瘤中的应用进行了文献综述。

食管鳞状上皮癌中表达失调蛋白的研究

背景与目的:食管鳞状上皮癌(esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)是一种具有高发性和高死亡率疾病,本研究应用蛋白质组学方法分析ESCC中异常表达的蛋白。方法:对ESCC/癌旁组织标本的冰冻切片进行显微切割,分别分离肿瘤细胞和癌旁上皮细胞,提取细胞总蛋白,通过双相电泳得到ESCC及癌旁上皮的蛋白表达谱,采用质谱技术鉴定肿瘤表达异常的蛋白。结果:比较7对食管癌/癌旁组织的蛋白表达谱,并对差异的蛋白进行质谱分析发现:11个蛋白在食管癌中表达明显异常,其中热休克蛋白27(HSP27)在3例ESCC中表达上调,钙依赖磷脂结合蛋白ANNEXINI在正常食管粘膜存在分子量基本相同、等电点彼此相差约为1的3种变体(isoforms),3种ANNEXINI变体均在5例食管癌中表达下调。结论:双相电泳连接质谱的蛋白质组学方法是快速筛选肿瘤异常表达蛋白的有效手段,HSP27和ANNEXINI的表达失调是食管癌发生过程中的频发事件。

维甲酸信号通路的生物学进展

本文阐述了受维甲酸信号调控的基因表达多样性的分子机制 ,描述了维甲酸受体的特征、维甲酸反应元件的多态性、转录中介因子包括辅活化因子和辅抑制因子在维甲酸受体介导的转录调控中的作用 。

携带基质金属蛋白酶组织抑制因子的重组腺病毒对宫颈癌细胞生物学效应的影响

目的探讨携带基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)基因的重组腺病毒(Ad-TIMP-3)对宫颈癌细胞生物学效应的影响。方法将Ad-TIMP-3感染CaSKi和HeLa细胞,采用RT-PCR方法检测感染细胞内TIMP-3mRNA的表达,Western blot方法检测感染细胞TIMP-3和p53的表达。分别采用4'6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色、MTT法、细胞黏附性及侵袭性实验检测Ad-TIMP-3对细胞凋亡、存活率、黏附性和侵袭能力的影响。结果感染Ad-TIMP-3的CaSKi细胞中TIMP-3mRNA及蛋白质的表达量均呈时间依赖性增加。TIMP-3表达上调可诱导CaSKi和HeLa细胞表达p53。Ad-TIMP-3体外感染可显著促进细胞凋亡、降低细胞的存活率(P<0.001),并存在旁观者效应;使细胞的侵袭能力及黏附能力下降(P<0.01)。感染Ad-TIMP-3的CaSKi和HeLa细胞的存活率显著低于感染Ad-p53的细胞(P<0.05,P<0.01)。结论体外感染Ad-TIMP-3抑制肿瘤效果显著,为体内宫颈癌基因治疗研究奠定了基础。

维甲酸诱发人食管癌细胞分化与凋亡的分子基础探讨

利用10^(-5_mol/L全反式维甲酸处理人食管癌细胞系EC109与EC8712细胞,以探讨维甲酸诱发人食管癌细胞终末分化与凋亡过程中的分子事件。经North-ern分析发现在凋亡过程中c-myc基因表达降低,被膜素(involucrin)与TGF-β基因表达增加。分离到的维甲酸特异激活的eDNA——RA538被激活并开始表达,p53基因表达没有明显改变。对这些基因表达的变化在细胞终末分化与凋亡过程中的作用以及维甲酸作用的分子机制进行了分析。

食管癌相关基因研究进展

食管癌的发生发展涉及多个基因的改变 ,本文就近年来在细胞周期、信号传导、凋亡等过程中的有关基因及新发现的肿瘤相关基因在食管癌中发生的变化做了简要阐述。

Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的研究

目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用，通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验，观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下，Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞，对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强，表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合，可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。

人Sep15的基因克隆和功能的初步研究

背景与目的:Sep15是1998年发现的一种新的硒蛋白。文献报道Sep15可能与肿瘤的发生有关,并参与二硫键的还原。但迄今为止,Sep15的确切功能还不清楚。本实验拟对Sep15与肿瘤的关系及其抗氧化功能进行初步研究。方法:应用RT-PCR方法获得人Sep15的全长cDNA基因,并重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,将重组质粒pcDNA3.1-Sep15转染到人肝癌细胞株BEL-7402,得到Sep15高表达的细胞株BEL-7402-Sep15,然后通过一系列体内和体外实验研究Sep15与肝癌细胞的关系及其抗氧化作用。结果:转染Sep15基因不影响肝癌细胞株BEL-7402的细胞形态、生长速率、克隆形成能力和裸鼠体内肿瘤生长速率;检测不同浓度外源性H2O2氧应激处理后3种细胞BEL-7402-Sep15、BEL-7402-pcDNA3.1和BEL-7402的细胞存活率,结果显示BEL-7402-Sep15的细胞存活率明显高于BEL-7402-pcDNA3.1和BEL-7402(P<0.05)。结论:转染Sep15基因的肝癌细胞株BEL-7402具有抗氧化的生物学活性。