细胞表面分子在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的表达

目的研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)在诱导条件下定向分化为成骨细胞过程中,细胞表面分子的表达及变化特征。方法从人骨髓中分离有核细胞,在含有15%胎牛血清、维生素C和β-甘油磷酸钠的α-MEM培养基中培养。在培养早期加入10-8mol/L地塞米松(实验组)或保持基础培养状态(对照组1),同时部分细胞仅培养于α-MEM培养基中(对照组2)。于培养第7、12、17天分别收集实验组和各对照组细胞,用流式细胞方法观察细胞表面分子CD45、CD34、CD117、CD90和人白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达,并定量对比分析。结果成人骨髓MSCs在体外诱导条件下分化为具有成骨细胞特征的成熟细胞。培养第7天实验组、对照组1和对照组2均少量表达CD45,第12、17天CD45表达转为阴性。各组各时间点CD34、CD117表达均为阴性。培养第12天,实验组和各对照组细胞CD90表达均较第7天升高,以对照组升高明显。实验组细胞HLA-DR表达随着成骨细胞分化成熟逐渐上升,而对照组细胞HLA-DR表达下降。结论MSCs在诱导条件下可以向成骨细胞分化。细胞表面分子的表达在细胞分化过程中呈特征性改变,是成骨细胞分化早期的一个重要标志。

1557株酵母菌的鉴定及其药敏试验分析

目的 研究临床分离的酵母菌种类及其对药物的敏感性。方法 采用API 20C、显色培养基对2004-2005年北京协和医院细菌室分离到的1557株念珠菌进行菌株鉴定，并对2005年收集的酵母菌采用ATB FUNGUS 2对氟康唑，伊曲康唑，两性霉素B，5-氟胞嘧啶进行药物敏感性试验；并以whonet 5．3软件进行结果分析。结果 在1557株酵母菌中自念珠菌为57．5％，热带念珠菌为17．0％，光滑念珠菌为14．8％，克柔念珠菌为2．8％，近平滑念珠菌为2．3％，葡萄牙念珠菌为0．9％，新生隐球菌为0．7％，季也蒙念珠菌0．4％，其他菌株共为3．6％。药敏结果显示：近平滑念珠菌、白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌对氟康唑的敏感率分别为100％、97．6％、94．5％、81．1％、9．1％和75．0％；对5-氟胞嘧啶的敏感率分别为100％、98．0％、98．0％、99．0％、9．5％和88．0％。伊曲康唑对克柔念珠菌和未鉴定到种的念珠菌的MIC90为1μg／ml，光滑念珠菌为4μg／ml，热带念珠菌为0．5μg／ml，白念珠菌和近平滑念珠菌均为0．125μg／ml；两性霉素B对所有念珠菌的MIC50和MIC90均为0．5μg／ml。结论 白念珠菌比例最高，其次为热带念珠菌及光滑念珠菌。5-氟胞嘧啶和氟康唑对除克柔念珠菌之外的所有念珠菌敏感度都很高，两性霉素B对所有念珠菌的MIC90都很低，伊曲康唑对除克柔念珠菌和光滑念珠菌之外的其他菌株的MIC90较低。

地塞米松对骨髓基质干细胞体外增殖的影响

目的观察地塞米松对小鼠骨髓基质干细胞体外增殖的作用。方法取雄性6周龄ICR小鼠股骨骨髓基质细胞进行体外培养,在细胞培养不同时间点加入10-8mol/L地塞米松(实验组)或保持基础培养条件(对照组),用CellTiter方法分别检测两组的细胞增殖情况,并予比较。结果在细胞培养不同阶段开始应用地塞米松的实验组中,细胞增殖能力较对照组降低,随着培养时间延长实验组细胞数量明显少于对照组。实验组中细胞形态较对照组更趋成熟。结论地塞米松在促进骨髓干细胞定向分化早期抑制骨髓基质干细胞体外增殖。

温育条件对ELISA定性测定HBsAg结果的影响

目的 确定定性酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定中温育温度、时间和方式对测定结果的影响程度。方法 温育温度分别设为 3 7℃、43℃和室温 ,温育时间分别为 45分钟、60分钟、75分钟、90分钟和 2小时。其中室温温育又分别采用振荡和静置两种条件 ,温育时间分别为 45分钟、1小时、2小时和 4小时。检测阴性血清和 0 .2、0 .5、1、2、5ng/mlHBsAg系列定值血清 ,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异。结果 在同一温育温度下 ,所有血清的S/CO比值均随着测定温育时间的延长而增大 ,浓度越低表现越为明显 ,从 0 .2ng/ml到 5ng/ml的样本 ,温育 2小时的S/CO比值与温育 1小时相比 ,均有明显的增加 ,0 .2ng/ml的样本由按CUT OFF值判断为阴性而转为阳性。而同时阴性血清的S/CO比值则变化不大。在振动状态下反应较之静止状态下的反应 ,S/CO比值均有明显增加。结论 温育条件对ELISA测定结果有很大影响 ,尤其是弱阳性标本。

念珠菌DNA同源性研究的方法及应用

念珠菌感染在临床的患病率和致死率都很高,研究念珠菌同源性有利于了解念珠菌的流行病学特点,为临床诊断和治疗提供帮助,本文就研究念珠菌同源性常用的方法:随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD),脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE),聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR single-strand conformational pol-ymorphism,PCR-SSCP),聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的原理、应用作一综述。

幼年起病的2例晚发型糖原贮积症Ⅱ型/Pompe病临床和基因分析

目的对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ,Pompe 病)患者进行临床和基因突变分析。方法对2例幼年起病的 Pompe 病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血 DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄糖苷酶的19个外显子,测序,进行突变检测。同时对50例健康对照100个等位基因进行15号外显子的 PCR 扩增,测序,确定突变特征。结果 1例临床表现为进行性近端肌肉无力,肌张力低下;1例表现为肌容积减少,呼吸肌受累;2例均有肌酸磷酸肌酶升高,肌电图提示肌源性损害,肌活检呈空泡性改变,皮肤成纤维细胞α-1,4-葡萄糖苷酶活性测定明显低下。突变检测:测序发现4个杂合错义突变,例1为 c796 C>T,p.266Pro>Ser;c2105 G>A,p.702Arg>His;例2为 c2132 C>G,p.711Thr>Arg;c2167 G>A,p.723Val>Met。其中后3个为新突变,50例健康对照100个等位基因测序未发现同样突变。结论幼年起病的 Pompe 病患儿临床表现存在差异,呼吸肌受累情况影响其预后;检测到3个错义新突变,可能为致病突变。

血清蛋白质指纹图谱模型在肾癌诊断中的应用

目的探讨肾癌早期诊断的新方法。方法血清标本66份,其中肾癌患者34份,健康对照组32份,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱,采用Biomarker PatternsTM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血清标志物诊断模型。结果在相对分子质量1000—50 000范围内共检测到101个蛋白峰,其中7个有统计学意义(P< 0．01)。所建立肾癌诊断模型敏感性为88％(30／34),特异性为91％(29／32)。采用此模型盲法分析42份未知血清标本,敏感性为80％(16／20),特异性为82％(18／22)。结论用SELDI—TOF—MS技术平台和生物信息学技术建立的诊断模型为肾癌早期诊断提供了新途径。

口腔鳞状细胞癌中蛋白酪氨酸磷酸酶基因的突变与表达

目的探讨抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）的突变和基因表达水平变化在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应（PCR）、基因测序方法检测42例口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中VITEN第3、5、6、8外显子有无突变。应用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测上述病例癌组织及癌旁组织中PTENmRNA的表达。结果发现2例口腔鳞状细胞癌组织中PTEN第5外显子发生点突变。42例口腔鳞状细胞癌和癌旁正常组织中均有PTENmRNA表达，口腔鳞状细胞癌组织中PTENmRNA表达量[PTEN／磷酸甘油醛脱氢酶（glyeeraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH）]为（0．36±0．12），低于相应癌旁正常组织（0．64±0．09），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PTENmRNA表达水平降低与口腔鳞状细胞癌的发生有一定关系。

成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞的冻存与复苏研究

目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%胎牛血清(FBS)和10%二甲亚砜(DMSO)(A组)、10%FBS、30%甘油和60%培养基(B组)和10%FBS、10%DMSO和80%威斯康星器官保存液(UW液)(C组)中。冻存4周后复苏细胞,测定各组细胞存活率及白蛋白合成情况。结果成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞经冻存复苏后可恢复功能细胞形态,A、B和C组冻存液中细胞复苏后细胞存活率分别为(60·0±3·3)%、(91·0±2·6)%和(89·0±1·4)%,培养24h后检测上清液白蛋白浓度分别为(0·210±0·005)g/L、(0·340±0·020)g/L和(0·330±0·030)g/L。结论成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞冻存复苏后仍保持较高的细胞存活率和功能,可作为临床肝细胞移植及生物人工肝的重要肝细胞来源。

一种新的BBL Mycotube方法对酵母菌鉴定能力的评估

目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API20CAUX和Vitek2CompactYBC方法。其中色原底物显色鉴定法操作最简单，但是能够鉴定的菌株范围有限，API20CAUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂，BBLMycotube方法操作比API20CAUX方法简单，与色原底物显色鉴定法相比耗时相似，菌种鉴定范围更广。本试验以API20CAUX方法为标准，色原底物显色鉴定法和Vitek2CompactYBC方法作为补充方法，探讨BBLMycotube方法是否适用于临床酵母样真菌的鉴定。BBLMycotube是一种包含了8种反应底物，可以读取10种生化反应结果，各个成分互相间隔塑料管。采用封入套管内的金属接种针，挑取一个或多个纯菌落，将待测菌株一步接种到8种反应底物中。孵育48～72h后，读取结果，记录所有阳性和阴性反应。与结果比色板的颜色反应表进行比对，计算阳性编码。通过查询编码表，鉴定出受试菌株（鉴定率≥80％）。如果表中列出多种菌株名（鉴定率〈80％），可使用列出的补充试验进一步鉴定。