EAE大鼠中枢神经系统与外周免疫器官细胞凋亡的研究

目的 比较实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中枢神经系统 ( CNS)与外周免疫器官中细胞的凋亡情况。方法 建立 EAE大鼠模型 ,于病程不同阶段取脊髓与外周免疫器官通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 ( TUNEL)技术检测细胞凋亡情况。结果 脊髓中细胞凋亡现象具有明显的时程特异性 ,凋亡细胞主要为淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞 ;脾和淋巴结中TUNEL阳性细胞数目均较少 ,且组内与组间差异均无显著性。结论 EAE外周免疫器官与

EAE大鼠外周免疫器官细胞凋亡的研究

目的:研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周免疫器官中细胞凋亡的情况。方法:应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术和流式细胞仪定量分析动态检测EAE病程不同阶段大鼠外周免疫器官中细胞凋亡的变化情况。结果:实验组脾和淋巴结中细胞凋亡率很低,组间及组内均无显著差异。结论:外周免疫器官在EAE凋亡中不起主要作用。

抗原穴位注射增强机体免疫功能的神经免疫调节作用

目的 探讨神经免疫调节在抗原穴位注射增强机体免疫功能中的作用。方法 采用免疫组化、免疫荧光标记和 RT-PCR定量分析技术，观察了不同途径免疫的大鼠中枢神经的下丘脑外侧区（ LH）和杏仁核区（ AA）中 IL-1β、 IL-6的表达与脾脏单个核细胞的 IL-1β、 IL-2和 IFN-γ变化的关系。结果 抗原穴位注射组大鼠 LH和 AA脑区 IL-1β、 IL-6的表达明显高于皮下注射组 ,但阳性细胞表达的高峰时间相似。免疫荧光标记结果显示细胞因子阳性细胞为神经元。穴位免疫组脾脏单个核细胞 IL-2和 IFN-γ的表达明显高于皮下免疫组， IL-1β的表达无差异。 结论 结果提示抗原经不同注射途径 (皮下、穴位 )免疫动物 ,动物中枢神经系统的神经免疫调节功能活动的作用时程是相似的 ,仅表现为神经免疫调节的作用强度不同 ; LH和 AA脑区 IL-1β、 IL-6介导的神经免疫调节功能与机体的免疫功能状态呈正相关；神经元是神经免疫调质 /递质的来源。抗原经穴位注射增强机体免疫功能的作用机制可能为穴位免疫可更有效的动员中枢神经系统的免疫相关脑区的神经免疫调节功能 ,参与对免疫系统的功能调节。

阿斯匹林对喉癌细胞系Hep-2生长抑制作用的实验研究

目的 通过体外实验研究阿斯匹林对人喉癌细胞系的抑制咋用,探讨阿斯匹林对喉癌细胞的抑制作用机理。方法 MTT法、3H-胸腺嘧啶(3H-TDR)掺入法、流式细胞仪测试不同浓度下阿斯匹林抑制喉癌细胞株Hep-2的增殖的程度和对细胞周期的变化,采用PI和H033342双染荧光显微镜下观测细胞的凋亡状况。结果 阿斯匹林浓度越高对细胞的增殖抑制就越大,滞留于G0/G1期的细胞数越多。结论 阿斯匹林对Hep-2细胞具有抑制增殖的作用,主要是通过细胞毒及阻止细胞进入S期来作用,其诱导凋亡的作用较小。意义 为临床上使用非甾体类药物作为头颈部肿瘤预防用药提供实验室依据。

脑出血患者内源性β内啡肽对免疫系统功能的影响(英文)

背景:脑出血是中枢神经系统非病原微生物感染机制致病的极严重的损伤事件,神经-内分泌-免疫系统调节网络的功能活动必然十分明显,内啡肽是调节网络中重要的系统间调节信号,通过探讨疾病过程中内源性β内啡肽水平的变化与免疫系统功能的关系,以及外源性β内啡肽对体外培养的免疫活性细胞功能的影响,能够进一步了解神经内分泌免疫调节网络的作用机制,为可能进行的临床干预治疗及康复措施介入提供实验依据。目的:探讨脑出血患者免疫系统功能的变化及内源性β内啡肽与疾病的关系。设计:病例-对照研究。单位:首都医科大学附属复兴医院神经内科,北京市红十字会急救中心,中国协和医科大学的基础医学研究所免疫室。对象:2001-12/2002-06北京复兴医院和红十字急救中心就诊的部分脑出血患者28例(脑出血组)。2002-02/06北京复兴医院住院的部分恢复期脑缺血患者28例(脑缺血对照组)。2002-02/06北京协和医院正常体检人群28例(正常对照组)。方法:应用放射免疫分析法检测外周血β内啡肽含量;用RT-PCR半定量分析方法检测了外周血单个核细胞白细胞介素(IL)-1β,IL-2,IL-8和一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达;β内啡肽对体外培养的脑出血患者外周血单个核细胞的IL-1β,IL-2,IL-8和iNOS表达的影响。

稳定表达的人GDNF基因对PC12细胞的分化作用研究

目的 利用自行构建的 BHK- h GDNF基因工程细胞 ,研究 GDNF是否具有促进大鼠嗜铬细胞瘤细胞系 PC12细胞分化的作用。 方法 从人胎儿脑组织中提取总 RNA,用 RT- PCR的方法克隆人 GDNF基因 ;利用L ipofecam ine将构建的真核表达载体 p TARGET/ h GDNF(± )转染 BHK- 2 1细胞 ,在含有 G418的选择培养基中筛选出稳定表达人 GDNF的 BHK- h GDNF基因工程细胞。用免疫组织化学的方法检测 BHK- h GDNF基因工程细胞中人 GDNF的表达。并且用 BHK- h GDNF基因工程细胞培养的上清液培养 PC12细胞 ,观察 GDNF是否具有促进大鼠嗜铬细胞瘤细胞系 PC12细胞分化作用。 结果 构建的正向和反向真核表达载体 p TARGET/ h GDNF(± )的酶解消化和测序结果正确 ;用正向真核表达载体 p TARGET/ h GDNF(+)转染 BHK- 2 1细胞后免疫组织化学的结果证明 BHK- h GDNF细胞能够表达人 GDNF;BHK- h GDNF基因工程细胞培养上清液可以促进 PC12细胞分化。 结论 构建的 BHK- h GDNF基因工程细胞中表达的人 GDNF可以促进

环孢素A联合雷公藤单体T_4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成及Ⅳ型胶原α1、转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的探讨环孢素Ａ（ＣsＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独或联合使用对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量，用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲαＮＡ（Ｃｏｌｌα１（Ⅳ）ｍＲＮＡ）、转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果ＣｓＡ可双向调节人系膜细胞Ⅳ型胶原的合成，ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ为促进作用，ＣｓＡ０．０１～０．１ｕｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。两药联合应用具有协同效应，小剂量ＣｓＡ和Ｔ４联合在获得较强免疫抑制作用的同时促胶原生成作用较弱。ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ和Ｔ４１０ｎｇ／ｍｌ均可上调人系膜细胞Ｃｏｌｌβ１（Ⅳ）、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达，两者变化趋势基本一致。结论ＣｓＡ和Ｔ４均参与调节基质合成，两药小剂量联合促胶原生成作用减轻，这一作用可能由ＴＧＦβ１介导发生于转录水平。

2型糖尿病KKA^y模型小鼠肾脏中TGF-β及其受体和细胞外基质蛋白表达的关系

探讨 2型糖尿病动物模型KKAy 小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF β及其受体的关系。 15只KKAy 小鼠和 18只C5 7BL J小鼠 ,分成 3组 ,分别于 16、2 0和 2 4周处死动物 ,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白 ,取肾皮质常规切片、染色 ,观察肾脏病理改变。用免疫组化和免疫印迹法检测不同周龄的KKAy 小鼠及参照组C5 7BL J小鼠肾皮质TGF β1及TGF βⅠ、Ⅱ型受体的表达 ,并用RT PCR方法检测肾皮质细胞外基质Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)mRNA水平。KKAy 小鼠 16周龄以后便开始出现明显的肥胖、高血糖、高胰岛素血症和蛋白尿 ,符合2型糖尿病早期肾病特点。其FN和Ⅳ型胶原mRNA表达都比同龄参照组C5 7BL J小鼠高 2～ 4倍 ,其中以 16周时最为显著 ,FN为 1 5 3± 0 4 6比较 0 6 3± 0 16 (P <0 0 0 1) ;Ⅳ型胶原为 5 0 8± 1 92比较 1 2 1± 0 2 5 (P <0 0 1)。KKAy 小鼠肾小球内TGF β1及TGF βⅠ型受体的水平明显低于C5 7BL J小鼠 ,而Ⅱ型受体表达却高于C5 7BL J小鼠。2型糖尿病KKAy 小鼠早期肾病时 ,肾皮质细胞外基质合成增加 ,与TGF βⅡ型受体表达增加有关。

阿尔茨海默病患者血清中巨噬细胞集落刺激因子

目的寻找阿尔茨海默病(Alzheimersdisease,AD)患者早期诊断和监视病情动态变化的血清检测指标。方法检测70例AD患者、52例年龄匹配的健康人(对照组)和22例血管性痴呆(VAD)对照患者血清中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的水平,以及32例AD患者和20例年龄匹配的健康人(对照组)血清中IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并结合AD患者的病情进行分析对比。结果AD患者组血清中M-CSF水平显著高于对照组(P<0.01)和VAD患者组(P<0.05);血清M-CSF水平主要在AD早期(轻、中度痴呆阶段)升高,在AD晚期(重度痴呆)则处于正常水平。AD患者组血清中IL-1β水平明显高于对照组(P<0.05),但血清中TNF-α和IL-6处于正常水平。结论血清M-CSF水平的检测是一种方便、敏感的方法,可望作为AD患者早期诊断的生物学标志。

洛伐他汀对高糖和低密度脂蛋白所致肾小管上皮细胞外基质蓄积的改善作用

为探讨洛伐他汀对高糖环境和低密度脂蛋白（LDL）刺激下人肾小管上皮细胞外基质（ECM）蓄积的作用。经体外培养人肾脏近端小管上皮细胞(HKC)，分别用LDL和/或高糖刺激HKC细胞，并与洛伐他汀共孵育。采用3H－脯氨酸参入法测定总胶原合成，ELISA方法测定细胞培养上清中IV型胶原和板层素浓度，RT－PCR技术观察HKC细胞中IV型胶原及纤维连接蛋白(FN) mRNA表达。结果表明高糖和LDL均可增加HKC细胞培养上清中的IV型胶原和板层素水平，并能上调IV型胶原和FN mRNA 的表达，洛伐他汀可以部分或全部逆转高糖和LDL的作用。说明高糖和LDL均可促使HKC细胞合成细胞外基质，洛伐他汀可以逆转它们的作用。

口服髓鞘素对EAE的防治作用

目的:研究口服髓鞘素对EAE的防治作用。方法:在建立Wistar大鼠EAE动物模型的基础上,观察灌服髓鞘素对其临床表现及病理改变的影响。结果:口服组发病延迟,症状及病理改变均明显轻于对照组。结论:口服髓鞘素可诱导免疫耐受,对EAE的发生、发展具有一定的缓解作用。

趋化因子在系统性红斑狼疮发病中的作用

趋化因子 (chemokine)是一类一级结构相似 ,主要对白细胞具有化学趋化作用等多种生物学效应的小分子蛋白 ,在机体的防御和炎症反应等方面起着重要的调节作用。由于其广泛的细胞来源和生物学效应 ,趋化因子及其受体可能在多种疾病的发生和发展中起着重要的作用。在包括系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)在内的自身免疫性疾病、HIV感染、心血管疾病、过敏性疾病、神经系统炎性疾病、肿瘤等方面的作用越来越引起关注。本文着重对趋化因子在SLE发生发展中的作用作一综述。

灰鼠耳蜗损伤对耳蜗核微管蛋白的影响

研究卡铂损伤灰鼠 (Chinchilla)耳蜗内毛细胞 (Innerhaircell,IHC)后 ,耳蜗核 (CochlearNucleus,CN)神经元出现的变化及可能涉及的环节。采取腹腔内给药 ,1月后取出用药组、对照组动物耳蜗 ,观察毛细胞 ,绘制耳蜗图 ,对耳蜗核以冠位连续切片 (10 μm) ,利用原位杂交的方法 ,以编码微管蛋白的cDNA片段为探针 ,进行检测。发现与耳蜗图所示全长内毛细胞破坏对应 ,伴随耳蜗核神经元体积缩小 ,耳蜗核内表达微管蛋白的细胞数减少。提示随着耳蜗内毛细胞的损伤、破坏 ,耳蜗核的传入神经冲动刺激被去除 ,影响了耳蜗核团细胞的信号系统的某些环节 ,从而导致细胞体积减少、细胞功能损伤等一系列变化。

巨噬细胞集落刺激因子在PDAPP^(V717I)转基因小鼠脑组织中的表达

目的鉴定巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)在阿尔茨海默病(AD)模型PDAPPV717I转基因小鼠脑组织中表达与分布情况。方法通过原位杂交和免疫组织化学套染技术检测PDAPPV717I转基因小鼠脑组织中M-CSFmRNA的表达与分布情况。结果PDAPPV717I转基因小鼠脑组织中M-CSFmRNA的表达水平显著高于年龄匹配的非转基因小鼠(P<0.01),而且M-CSFmRNA主要由活化的反应性星形胶质细胞产生。结论星形胶质细胞在AD的神经病理发生发展过程中发挥重要作用。

MICA反应性Vδ1γδT细胞对上皮肿瘤细胞的细胞毒作用

目的研究人类MHCⅠ类链相关基因A(MICA)是否可以在体外诱导Vδ1γδT细胞的扩增,并且对MICA反应性Vδ1γδT细胞的细胞毒作用进行初步研究。方法采用分子克隆技术原核表达并纯化MICA蛋白,使用重组MICA蛋白在体外诱导肿瘤组织中的Vδ1γδ肿瘤浸润T淋巴细胞(TILs),3-(4,5-二甲基噻唑-乙-YL)-2,5-二甲基-四唑溴盐(MTT)法检测MICA反应性Vδ1γδTILs的细胞毒活性。结果原核表达系统pET30表达并纯化了MICA;固相化的MICA蛋白可以诱导肿瘤组织中的Vδ1γδTILs在体外扩增,同时Vδ1γδTILs对MICA+的肿瘤细胞具有明显杀伤活性。结论MICA反应性Vδ1γδT细胞可能是肿瘤过继免疫治疗的新的候选效应细胞。

小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果 对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

胶质细胞源性神经营养因子的生物学活性与信号转导途径

神经营养因子是由神经元和神经元支配的靶器官或胶质细胞产生,在神经系统的发育、分化等生理过程中发挥重要的作用[1～3].由于神经营养因子具有维持神经元存活、促进神经元突起延伸等生理活性,并且可以在神经轴突中进行顺行、逆行性转运[4,5].因此在许多以神经元死亡或萎缩为特点的神经退行性疾病中,如老年性痴呆(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophiclateral sclerosis)等,应用神经营养因子作为治疗药物有广阔的应用前景[6].

SmD1重组蛋白及抗原表位肽段在系统性红斑狼疮中的临床意义

系统性红斑狼疮（SLE）是自身免疫介导的，以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。抗Sm抗体由于其在SEE诊断中具有高度特异性被认为是疾病的标志性抗体。目前研究认为，SmD1是其中最主要的抗原分子。本研究通过构建表达载体进行重组SmD1蛋白的表达和纯化的方法获取纯度较高的抗原，并通过生物学软件设计并化学合成SmD1抗原表位肽段，用ELISA法分别检测其在SLE中的临床意义。