白细胞介素2对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶在肾小管上皮细胞中表达的影响

目的:探讨IL-2对肾小管上皮细胞中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)mRNA及蛋白表达的影响以及Lck在狼疮肾炎中的致病作用。方法:采用BALB/c小鼠及BXSB狼疮小鼠肾小管上皮细胞为实验对象,分别给予IL-2(100U/m l)刺激。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾小管上皮细胞Lck mRNA的表达,免疫印迹法检测Lck蛋白的表达,比较IL-2刺激前后Lck mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:正常BALB/c小鼠及BXSB狼疮小鼠肾小管上皮细胞中仅有微量Lck mRNA及蛋白表达,经IL-2刺激后二者的Lck mRNA及蛋白表达水平均有增加,以狼疮小鼠肾小管上皮细胞增加更为显著。结论:(1)肾小管上皮细胞中有Lck基因的表达。(2)肾小管上皮细胞经IL-2刺激后Lck mRNA及蛋白表达水平增加,提示IL-2可活化肾小管上皮细胞诱导Lck表达,进而可能通过一系列信号传导作用,发挥生物学作用。相对于BALB/c小鼠,狼疮小鼠肾小管上皮细胞在IL-2刺激后Lck表达更明显,提示狼疮小鼠肾小管上皮细胞可能更易激活。(3)由于Lck在狼疮肾炎小鼠肾小管上皮细胞中异常表达,推测Lck可能作为细胞因子或炎症因子的重要信号分子,促进狼疮肾炎的发生。

Lck反义RNA重组腺病毒载体的构建及其对肾小管上皮细胞Lck表达的影响

目的:观察淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)在肾小管上皮细胞中的表达及Lck反义RNA对其表达的影响。方法:采用RT-PCR方法从肾小管上皮细胞中获得Lck目的基因片段,将目的基因片段反向插入pDC316质粒中,构建Lck反义RNA穿梭质粒(pDC316-antisenseLck),经PCR、酶切及测序鉴定正确后,将此穿梭质粒与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Lck基因反义RNA腺病毒载体(Ad-antisenseLck)。用此重组腺病毒感染体外培养的肾小管上皮细胞,Westernblotting方法观测此重组腺病毒载体对IL-2诱导的Lck蛋白表达的影响。结果:构建出Lck反义RNA重组腺病毒载体,此重组腺病毒载体感染培养的肾小管上皮细胞后可明显抑制IL-2诱导的Lck蛋白表达(P<0.05),抑制率可达47%。结论:成功构建出Lck反义RNA重组腺病毒载体,此载体可在肾小管上皮细胞内发挥生物学作用,显著阻抑肾小管上皮细胞的Lck蛋白表达。

Lck在狼疮肾炎肾小管上皮细胞中表达的研究

目的观察狼疮肾炎病理过程中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)在肾小管上皮细胞内的表达及白细胞介素-2(IL-2)对其表达的影响。方法体外培养6周龄BXSB狼疮小鼠的近端肾小管上皮细胞,给予IL-2刺激,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法及免疫印迹法检测肾小管上皮细胞中Lck mRNA和蛋白的表达,观察IL-2对Lck表达水平的影响。同时用免疫组织化学方法观察Lck蛋白在狼疮肾炎小鼠和人类肾脏组织标本肾小管上皮细胞内的表达情况。结果体外培养的6周龄BXSB狼疮小鼠近端肾小管上皮细胞中仅有微量LckmRNA及蛋白的表达,IL-2刺激后表达水平显著增加(P<0.05)。免疫组织化学方法显示:正常BALB/C小鼠、未发病的狼疮小鼠和人类微小病变性肾病肾脏组织的肾小管上皮细胞内均未发现明显的Lck蛋白表达,而已发病的16周龄狼疮肾炎小鼠和人类Ⅳ型狼疮肾炎肾脏组织标本的肾小管上皮细胞内则有明显的Lck蛋白表达。结论IL-2可活化肾小管上皮细胞并诱导Lck表达,Lck可能作为细胞因子或炎症因子的重要信号分子,在小管-间质性炎症及狼疮肾炎病理过程中发挥着重要作用。