质粒辅助重组腺病毒相关病毒的制备和纯化

目的 探讨制备、纯化 2型重组腺病毒相关病毒 (rAAV2 )载体的简便、高效的方法。方法 采用磷酸钙方法将质粒辅助腺病毒相关病毒重组系统转染HEK2 93T细胞 ,重组rAAV ,通过氯仿 PEG80 0 0 /NaCl 氯仿法结合超滤纯化rAAV病毒。采用蛋白电泳和Western印迹检测病毒外壳蛋白 ,斑点杂交和病毒转染检测病毒的物理和感染滴度。结果 rAAV物理滴度为 2× 10 13 /ml,感染滴度为 5× 10 11/ml。结论 本实验方法简便、高效 ,不需要特殊的仪器设备 ,在普通实验室均可完成 ,制备的病毒纯度和滴度均可以满足动物实验需要。

脑梗死后自体神经干细胞原位增殖与分化的实验研究

目的 研究成年大鼠脑梗死后自体神经干细胞的原位增殖和分化。方法 雄性Wistar大鼠共 112只 ,分对照组 (12只 )、脑梗死后 1d组 (2 0只 )、脑梗死后 3d组 (2 0只 )、脑梗死后 7d组 (2 0只 )、脑梗死后 14d组 (2 0只 )、脑梗死后 2 8d组 (2 0只 )。大鼠于不同的时间处死 ,并取出大脑 ,处死前均注射 5 溴胱氧腺苷嘧啶 (BrdU)。用免疫组织化学方法动态检测BrdU、Musashil、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经元核性蛋白 (NeuN)的表达。BrdU、Musashil确定神经干细胞的增殖 ,GFAP、NeuN确定神经干细胞的分化。结果 与对照组相比 ,大鼠海马BrdU+ 细胞和BrdU+ /Musashil+ 细胞数在脑梗死后 1d组开始增加 ,7d组达到高峰 ,2 8d组接近正常水平 ;BrdU+ /GFAP+细胞数无明显变化 ;BrdU+ /NeuN+ 细胞数在脑梗死后 14d组开始增加 ,2 8d组最多。结论 大鼠脑梗死激活自体神经干细胞原位增殖 ,并且大多数增殖的神经干细胞分化成神经元。