抗VEGF嵌合抗体的生物学特性分析

目的 分析抗人血管内皮生长因子 (VEGF)嵌合抗体VcD11的各种生物学特性 ,确定其人源性、特异性 ,中和VEGF的中和活性以及体内抑制肿瘤生长转移的抗肿瘤活性。方法 采用纯化的VcD 11进行ELISA和Westermblot实验 ,分析其人源性、特异性 ;采用抑制由VEGF刺激引起的内皮细胞增殖实验分析VcD11的中和活性 ;采用近交系小鼠T 739的小鼠肺腺癌LA795实验动物肿瘤模型分析VcD 11的抗肿瘤活性。结果 VcD 11在ELISA和Westernblot实验中均呈阳性结果 ,并可抑制由VcD 11的刺激引起的内皮细胞增殖 ,虽未能明显抑制小鼠肺腺癌LA795原发瘤的生长 ,但可显著抑制其肺转移灶的形成和生长。结论 抗VEGF嵌合抗体VcD11具有人抗体的恒定区 ,可与人VEGF特异地结合 ,并具有良好的中和活性和抗肿瘤转移的活性。它可能在临床治疗肿瘤中有着重要。

抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达

目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。

抗人血管内皮生长因子嵌合抗体在真核细胞中的高效表达

目的：在中国仓鼠卵巢（ Chinese hamster ovary, CHO）细胞中高效表达有活性的抗人血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）嵌合抗体，并探索获得最佳表达的途径。方法：采用一种新型的基因工程抗体真核高效表达载体系统，将抗 VEGF嵌合抗体轻、重链基因导入二氢叶酸还原酶缺陷型 CHO细胞，筛选表达抗 VEGF嵌合抗体的克隆，再进行递增浓度的氨甲喋呤 (methotrexate, MTX)加压扩增表达。采用 ELISA检测所表达的嵌合抗体的生物学特性和产量。结果：采用三种不同的筛选加压扩增表达方法获得的结果有差异，其中采用每轮加压扩增表达后进行亚克隆的方法获得了高表达产量的克隆，产量可达 28μ g/ml。 ELISA结果证实所表达的抗体为特异地与 VEGF结合的、含人抗体恒定区的抗 VEGF嵌合抗体。结论：成功地在真核细胞中高效表达了有活性的抗 VEGF嵌合抗体，为下一步该嵌合抗体的临床试用奠定了重要的基础，并探索出该表达系统最佳的筛选加压扩增表达方法。

卵巢癌自身抗体谱研究及应用

目的肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体。因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱。本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原,为卵巢癌的免疫治疗提供候选靶抗原。方法用卵巢癌组织建立了库容量达1.82×106pfu的cDNA表达文库,用卵巢癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获了阳性抗原克隆,进一步分析了其中5个克隆与48例卵巢癌48例正常人血清的反应情况。结果获得的67个阳性克隆中,5个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外49个克隆与已知基因高度同源。BHLHB2等5个抗原克隆与卵巢癌患者和正常人血清反应阳性率分别为41.6%(14.6%)、29.2%(6.25%)、29.2%(12.5%)、31%(18.7%)、31%(6.2%)。联合5个克隆诊断卵巢癌的敏感性为81%,特异性75%。结论本研究发现的45个卵巢癌抗原可能作为卵巢癌诊断新的候选血清学标志物和免疫治疗潜在分子靶点。BHLHB2等5个克隆与卵巢癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,5个克隆联合诊断卵巢癌有较好的敏感性和特异性,其相关自身抗体可作为卵巢癌诊断的血清标志物。

NY-ESO-1基因在人食管癌中的表达及其基因克隆

背景与目的:NY-ESO-1是从食管癌cDNA文库中筛选到的肿瘤抗原,但是该基因在食管癌组织中的表达情况尚未见报道。本文研究NY-ESO-1基因在食管癌中的表达率,以便于确定食管癌患者是否可以使用以NY-ESO-1抗原为基础的疫苗治疗。方法:采用RT-PCR方法检测了NY-ESO-1基因在30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达;采用分子克隆的方法从食管癌组织中克隆了NY-ESO-1cDNA。结果:NY-ESO-1基因在食管癌组织中的表达率为50%(15/30),在30例相应癌旁正常组织中未见表达;克隆的NY-ESO-1cDNA序列与GenBank报道一致。结论:NY-ESO-1基因在食管癌中高频率表达,NY-ESO-1抗原可以被具有HLA-I类分子限制性CTL识别。

抗CEA抗体可变区基因的克隆及其嵌合抗体的表达

目的 在真核细胞中表达抗癌胚抗原 (carcinoembryonic antigen,CEA)人 -鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗 CEA鼠单抗 C5 0的杂交瘤细胞中扩增、克隆可变区基因。测序鉴定后连入真核表达载体 ,导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢 (dihydrofolate reductase- deficient Chinese ham ster ovary,CHO- dhfr- )细胞进行表达。采用间接和竞争抑制 EL ISA检测表达产物的人源性和抗原结合特异性。结果 序列测定初步确定所克隆的是功能性抗体可变区基因。在转染细胞上清中测到抗 CEA嵌合抗体的表达。EL ISA试验证实该嵌合抗体具有人的恒定区 ,并与原鼠单抗 C5 0有相同的抗原结合特异性。结论 成功地在真核细胞中表达了抗 CEA人 -鼠嵌合抗体。