腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实转导效率达 10 0 % (MOI为 2 5) ,转导RA538基因后的GLC - 82肿瘤细胞生长受到明显的抑制 ,抑制率为 77 2 %。经流式细胞计数 (FCM)及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,凋亡率为 59 4%。利用Westernblot法检测转导了RA538基因GLC - 82肿瘤细胞中癌基因蛋白发现 ,c -myc基因蛋白表达下调。结果提示 :RA538作为抑癌基因将有可能应用于肿瘤基因治疗。

鳞状上皮细胞分化相关基因及其与肿瘤的关系

角质化细胞包被的组成成分不仅作为结构物质存在和参与上皮细胞的鳞状分化 ,而且可能发挥抑癌基因的作用。本文综述了角质化细胞包被的重要组成involucrin ,loricrin以及SPRR基因家族的结构、功能及其与肿瘤的关系。

食管癌组织多种肿瘤抑制基因微卫星多态位点的杂合丢失和不稳定

目的：研究ｐ５３ ，ｐ１６， Ｒｂ ， Ｄ Ｃ Ｃ， Ａ Ｐ Ｃ 等多种已知抑癌基因在食管癌组织中的缺失及与临床病理的关系。方法：采用 Ｐ Ｃ Ｒ 银染技术，检测高发区３６ 例配对的食管癌标本１４ 个微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点的杂合丢失和不稳定性。结果：分别与ｐ５３ ，ｐ１６ 及 Ｒｂ 连锁的 Ｄ１７ Ｓ２６１ ， Ｄ９ Ｓ１６２ 、 Ｄ９ Ｓ１７１、 Ｉ Ｆ Ｎ Ａ 和 Ｄ１３ Ｓ１７０ 均有高频率的杂合丢失（ ＞ ２５ ％ ） ；两个以上的位点异常者占８６％ ，ｐ Ｔ Ｎ Ｍ Ⅲ期患者微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点异常的频率显著高于Ⅱ期患者（ Ｐ＜ ０．０１） 。结论：同一病例有多个微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点异常提示食管上皮癌变涉及多个抑癌基因的失活。

介导p53基因转移的重组体腺病毒对人肺癌细胞的抑制作用

p53基因突变是肿瘤发生中的多发事件 ,导入野生型p53基因能抑制肿瘤细胞的生长。通过腺病毒载体介导 ,将野生型p53基因转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,证实对肺腺癌细胞生长具有明显的抑制作用 ,抑制率达 6 1%。对GLC - 82细胞系裸鼠皮下移植瘤进行治疗实验结果表明 ,p53能抑制肿瘤细胞体内的生长。流式细胞计数及DNA片段化分析显示 ,p53基因的转导能诱导肺腺癌细胞发生凋亡。研究结果提示 ,腺病毒能介导p53基因对肿瘤进行治疗 ,并可作为肿瘤外科手术、化疗、放疗外的又一治疗方法。

全反式维甲酸激活人肺腺癌细胞系GLC-82中-PIG-B高度同源基因—PIGB1

目的 :探讨全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)诱导肿瘤细胞分化的分子机制。方法 :采用Southern和Northern杂交方法对本室用ATRA诱导人肺腺癌细胞GLC 82 ,经消减杂交所构建的cDNA消减文库进一步鉴定 ;序列分析后用RT PCR方法研究胎儿组织中的表达情况。结果 :分离到一为ATRA激活表达的基因—PIGB1,该基因与人PIG B (phosphatidylinositolglycanofcomplementationclassB)基因高度同源 ,在多种胎儿组织中均有表达。结论

全反式维甲酸激活的人肺腺癌细胞基因的筛选

目的：筛选人肺腺癌细胞中全反式维甲酸（ａｌｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＡＴＲＡ）激活表达的基因。方法：以我室构建的ＡＴＲＡ诱导前后人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的ｃＤＮＡ削减文库各克隆作为探针，与ＡＴＲＡ处理前后ＧＬＣ－８２的ｃＤＮＡ文库Ｌｉｂ．ＧＬＣ－８２，Ｌｉｂ，ＧＬＣ－８２．ＲＡ１，Ｌｉｂ．ＧＬＣ－８２．ＲＡ４进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，以筛选在ＡＴＲＡ处理后ＧＬＣ－８２ｃＤＮＡ文库中特异存在的ｃＤＮＡ片段。以筛选出的特异存在于ＡＴＲＡ处理后ＧＬＣ－８２ｃＤＮＡ文库中的ｃＤＮＡ片段作为探针，与胎儿各组织总ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒ杂交，以检测其在胎儿各组织中的表达情况。结果：其中一克隆ＲＡ９７特异存在于ＡＴＲＡ诱导１天ｃＤＮＡ文库，核酸序列同源分析表明，ＲＡ９７与人２２号染色体长臂１３区－ＰＡＣ克隆ＰＡＣ４０８Ｎ２３同源性很强，其中一段（约６００ｂｐ）与ＰＡＣ４０８Ｎ２３几乎完全同源；此片段与可能的肿瘤抑制基因ＳＮＣ６同源性也相当强，其中一段（约３５０ｂｐ）与ＳＮＣ６几乎完全同源。ＲＡ９７在多种胎儿组织中均有表达，转录本有两个，分别为４．３ｋｂ和４．８ｋｂ。结论：获得一特异存在与ＡＴＲＡ诱导１天ＧＬ?

野生型p53基因重组体腺病毒介导的肿瘤抑制作用

采用同源重组方法构建了野生型p53全长cDNA的重组体腺病毒.通过转导人卵巢癌细胞系SK-OV-3和黑色素瘤细胞系WM-983A,证实腺病毒能介导p53基因进行有效转移;并能显著抑制这两种肿瘤细胞的生长和集落形成能力,生长抑制率分别达到93％和86％.对两种肿瘤细胞裸鼠皮下移植瘤的治疗实验表明,p53能明显抑制肿瘤的生长.流式细胞计数、DNA片段化及TUNEL分析证实,p53可诱导肿瘤细胞凋亡和G1期阻滞.结果显示p53重组体腺病毒是一种有良好前景的肿瘤基因治疗药物.

维甲酸激活表达的人肺腺癌细胞分化相关基因的筛选

通过对维甲酸诱导的人肺腺癌细胞系GLC-82 cDNA消减文库的筛选,获得2个特异存在于维甲酸诱导1天cDNA文库中的cDNA片段RA97及RA107,测序后与最新GenBank提供的序列比较,RA97与人22号染色体长臂13区PAC408N23同源性很强,其中一段(约600bp)与PACA08N23完全同源,此片段与可能的肿瘤抑制基因SNC6同源性也相当强,其中一段(约350bp)与SNC6完全同源,提示这一cDNA片段可能与肿瘤发生有一定关系。RA107与多种基因部分同源,可能是某一基因超家族的一员。

抑癌基因 RB 对小鼠乳腺上皮恶性转化细胞系 11A1 的表型逆转作用

为验证抑癌基因ＲＢ的抑癌作用及进一步探讨其抑癌机理，我们用带有人ＲＢ基因ｃＤＮＡ的真核细胞表达质粒转染小鼠乳腺上皮恶性转化细胞系１１Ａ１，得到４个稳定的逆转细胞系１１Ａ１－Ｒ１～Ｒ４。逆转细胞在形态、核质比例上接近正常细胞，在琼脂表面生长能力下降，裸鼠体内致瘤力下降。ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示逆转细胞中ＲＢ基因表达增高，ｃ－ｍｙｃ基因表达水平下降。本实验证明了ＲＢ基因的抑癌作用并建立了一个良好的上皮型细胞表型逆转的模型。

比较基因组杂交检测实体瘤细胞染色体异常及其临床意义

本文综述了比较基因组杂交技术（ＣＧＨ）检测多种恶性实体肿瘤的研究结果，分析了染色体ＤＮＡ拷贝数异常（ＣＮＡ）与恶性肿瘤类型、病理分期的关系，以及应用ＣＧＨ辅助临床判断复发及转移。

比较基因组杂交中的自动图像分析关键技术

比较基因组杂交是细胞遗传学中的一种新方法 ,用于实体肿瘤染色体研究。图像分析是比较基因组杂交的重要部分 ,旨在从实验测得的荧光图像中 ,分析得到待测肿瘤组织拷贝数的情况 ,从而做出病情诊断 ,或用于肿瘤遗传学研究。本文综述了比较基因组杂交中的图像分析中的关键技术 ,着重于本底校正、染色体分割、求染色体中轴、核型分析和求比率曲线这几个关键步骤 。

Rb、p16、细胞周期素D1蛋白在食管癌中的表达及其意义

细胞周期素Ｄ１促进Ｇ１期细胞进程是通过刺激细胞周期依赖激酶（ＣＤＫｓ）介导的Ｒｂ蛋白的磷酸化作用而实现。细胞周期素Ｄ１被认为是一种癌基因。ＣＤＫ４的酶活性又受一些抑制蛋白如ｐ１６的限制，后者是存在于染色体９ｐ２１上的ＣＤＫＮ２基因的产物，在多种肿瘤细胞系和原发肿瘤中频发缺失和突变，被认为是抑癌基因。为了解它们在食管癌发生发展中作用，用免疫组织化学及原位杂交方法，在４１例原发食管癌中检测了Ｒｂ、ｐ１６、细胞周期素Ｄ１的蛋白表达及部分肿瘤中细胞周期素Ｄ１和ｐ１６基因的存在状态。２６／４１例（６３．４％）显示细胞周期素Ｄ１过度表达，１０例在对应的癌旁增生上皮也显示细胞周期素Ｄ１的过度表达。１３／４１例ｐ１６表达阴性，４例呈弱阳性。２４例Ｒｂ阳性的标本中，１７例显示ｐ１６不表达或低水平表达，而９例Ｒｂ表达阴性的标本均显示ｐ１６表达增高。结果提示，在食管癌形成过程中，细胞周期素Ｄ１是一常见的分子异常，并且可能是一早期分子事件，随即而来的分子改变可以是Ｒｂ的失活或／和ｐ１６的失活；Ｒｂ的失活与细胞周期素Ｄ１激活在食管癌中可共同存在；Ｒｂ失活与ｐ１６表达之间存在负相关关系；食管癌的分子发病机制可能涉及ＣＤＫ４／细胞周期素?

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性cDNA消减文库的建立和鉴定

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性ｃＤＮＡ消减文库的建立和鉴定黎伯铨张雪艳蔡岩王秀琴毛宝龄吴采用诱导分化与ｃＤＮＡ文库消减杂交（ｃＤＮＡｌｉ－ｂｒａｒｙｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）相结合的策略，建立了人肺腺癌细胞系全反式维甲酸（ＲＡ）...

两个人食管癌细胞系的建立及染色体分析

目的结合传统细胞遗传学和新近发展起来的分子细胞遗传学方法，对１９８７年我室建立的两例食管癌细胞系ＥＣ８７１２和ＥＣ８７３３进行细胞遗传学分析。方法采用组织块培养法，用１．５％牛血清的１９９培养液，成功地建立了这两个细胞系，做了初步的生物学鉴定，并采用染色体Ｇ显带、染色体荧光原位杂交和比较基因组杂交等方法进行了细胞遗传学和分子遗传学的检测。结果发现两个细胞系经异种接种均形成移植性肿瘤，染色体为非整倍体，他们均有Ｙ染色体丢失、１ｐ缺失、２ｑ易位、５ｐ扩增，ＥＣ８７３３有８ｑ、１３ｑ扩增，ＥＣ８７１２有１７ｐ缺失。结论提示检出的这些畸变可能与肿瘤的发生、发展有关。

荧光原位杂交在间期细胞染色体检测中的应用

荧光原位杂交在间期细胞染色体检测中的应用王明荣王秀琴吴ＢｅｒｎａｒｄＰéｒｉｓｓｅｌＰａｕｌＭａｌｅｔ为探讨间期核荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）在医学上的应用，我们应用生物素标记的染色体特异探针，对未培养的羊水细胞、外周血细胞、膀胱癌手术标本、膀胱洗液、...

角质细胞生长因子

角质细胞生长因子(KGF)是由成纤维细胞及其他间质细胞分泌的生长因子。按照氨基酸序列的同源性,KGF属于成纤维细胞生长因子(FGF)家族,又称FGF-7。与其他FGF不同,KGF特异地调节上皮源性细胞的生长和发育,这是由于KGF受体主要存在于上皮细胞的缘故。KGF的这一独特性质,使得它被认为在间质-上皮相互作用过程中起一种副泌介质的角色。

消化道肿瘤的基因诊断

消化道肿瘤的基因诊断李申德消化道肿瘤包括几种我国很常见的恶性肿瘤，如食管癌、胃癌及大肠癌等。近年来尽管各国学者在诊断和治疗方面进行了大量的研究，但尚未取得突破性的进展，其５年治疗率仍徘徊在３０％～４０％之间。要想大幅度地降低疾病的死亡率，必须抓住关键...

腺病毒E1和E4区基因共存的细胞系的建立

腺病毒载体相对安全,能有效地将外源基因转导到培养细胞或动物细胞中,但仍存在装载容量不够理想和免疫原性两个缺点.尤其是后一缺点,已成为制约其应用于临床基因治疗的主要因素.据认为,E4区基因在免疫原性中起着关键作用.因此人们希望通过发展E4区和Ela共缺陷的腺病毒载体,以降低或消除腺病毒载体免疫原性.这首先需要建立E4和E1区共存的包装细胞系,以互补腺病毒载体上E4和E1区功能的缺失,完成腺病毒载体的复制和包装.但有文献认为E4区和E1a不能稳定地存在于同一细胞中.我们成功地将腺病毒的E4区(pJM17的9724bp EcoRⅠ—XbaⅠ片段)插入AAV(Adeno-associated virus,腺辅助病毒)载体pAAV/neo中,并转导进293细胞(来自腺病毒E1区转化的人胚肾细胞,含有E1a区)中,得到了E1和E4区稳定共存的G418抗性细胞系.结果说明,E1和E4区可以稳定地共存于同一细胞,有可能建立无或低免疫原性,外源基因装载量由8kb扩大到17kb的新一代腺病毒载体系统.另外也表明,AAV载体介导的外源基因大小至少可达12kb左右(E4区9.7kb+neo基因2.7kb=12.4kb).

食管癌组织染色体位点特异性的杂合性丢失和微卫星DNA序列不稳定

为了寻找在食管癌中发生缺失的染色体位点，根据以往细胞遗传学的工作基础，选取２４个分别位于１、２、３、５、７、９、１１、１７号染色体的食管癌染色体畸变＂热点＂及已知基因的位点，以微卫星序列－ＰＣＲ法检测这些位点处的杂合性丢失和微卫星序列不稳定。对３６对来自北京和山西阳泉的散发食管癌标本和相应正常组织的检测结果显示：在对应于９ｐ２２－２３、３ｐ１４．２、２ｐ２２、３ｐ２４－２６、１１ｑ１３．１、３ｐ２３、３ｐ２１．３、７ｑ３５、３ｑ２１－２２等染色体位点处存在较高频率（＞２０％）的杂合性丢失。同时，发现了染色体位点特异的微卫星ＤＮＡ不稳定。杂合性丢失和微卫星ＤＮＡ序列不稳定可能与食管癌的发生、发展过程有关。