腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实转导效率达 10 0 % (MOI为 2 5) ,转导RA538基因后的GLC - 82肿瘤细胞生长受到明显的抑制 ,抑制率为 77 2 %。经流式细胞计数 (FCM)及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,凋亡率为 59 4%。利用Westernblot法检测转导了RA538基因GLC - 82肿瘤细胞中癌基因蛋白发现 ,c -myc基因蛋白表达下调。结果提示 :RA538作为抑癌基因将有可能应用于肿瘤基因治疗。

鳞状上皮细胞分化相关基因及其与肿瘤的关系

角质化细胞包被的组成成分不仅作为结构物质存在和参与上皮细胞的鳞状分化 ,而且可能发挥抑癌基因的作用。本文综述了角质化细胞包被的重要组成involucrin ,loricrin以及SPRR基因家族的结构、功能及其与肿瘤的关系。

野生型p53基因重组体腺病毒介导的肿瘤抑制作用

采用同源重组方法构建了野生型p53全长cDNA的重组体腺病毒.通过转导人卵巢癌细胞系SK-OV-3和黑色素瘤细胞系WM-983A,证实腺病毒能介导p53基因进行有效转移;并能显著抑制这两种肿瘤细胞的生长和集落形成能力,生长抑制率分别达到93％和86％.对两种肿瘤细胞裸鼠皮下移植瘤的治疗实验表明,p53能明显抑制肿瘤的生长.流式细胞计数、DNA片段化及TUNEL分析证实,p53可诱导肿瘤细胞凋亡和G1期阻滞.结果显示p53重组体腺病毒是一种有良好前景的肿瘤基因治疗药物.

全反式维甲酸激活人肺腺癌细胞系GLC-82中-PIG-B高度同源基因—PIGB1

目的 :探讨全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)诱导肿瘤细胞分化的分子机制。方法 :采用Southern和Northern杂交方法对本室用ATRA诱导人肺腺癌细胞GLC 82 ,经消减杂交所构建的cDNA消减文库进一步鉴定 ;序列分析后用RT PCR方法研究胎儿组织中的表达情况。结果 :分离到一为ATRA激活表达的基因—PIGB1,该基因与人PIG B (phosphatidylinositolglycanofcomplementationclassB)基因高度同源 ,在多种胎儿组织中均有表达。结论

维甲酸激活表达的人肺腺癌细胞分化相关基因的筛选

通过对维甲酸诱导的人肺腺癌细胞系GLC-82 cDNA消减文库的筛选,获得2个特异存在于维甲酸诱导1天cDNA文库中的cDNA片段RA97及RA107,测序后与最新GenBank提供的序列比较,RA97与人22号染色体长臂13区PAC408N23同源性很强,其中一段(约600bp)与PACA08N23完全同源,此片段与可能的肿瘤抑制基因SNC6同源性也相当强,其中一段(约350bp)与SNC6完全同源,提示这一cDNA片段可能与肿瘤发生有一定关系。RA107与多种基因部分同源,可能是某一基因超家族的一员。

比较基因组杂交中的自动图像分析关键技术

比较基因组杂交是细胞遗传学中的一种新方法 ,用于实体肿瘤染色体研究。图像分析是比较基因组杂交的重要部分 ,旨在从实验测得的荧光图像中 ,分析得到待测肿瘤组织拷贝数的情况 ,从而做出病情诊断 ,或用于肿瘤遗传学研究。本文综述了比较基因组杂交中的图像分析中的关键技术 ,着重于本底校正、染色体分割、求染色体中轴、核型分析和求比率曲线这几个关键步骤 。

两个人食管癌细胞系的建立及染色体分析

目的结合传统细胞遗传学和新近发展起来的分子细胞遗传学方法，对１９８７年我室建立的两例食管癌细胞系ＥＣ８７１２和ＥＣ８７３３进行细胞遗传学分析。方法采用组织块培养法，用１．５％牛血清的１９９培养液，成功地建立了这两个细胞系，做了初步的生物学鉴定，并采用染色体Ｇ显带、染色体荧光原位杂交和比较基因组杂交等方法进行了细胞遗传学和分子遗传学的检测。结果发现两个细胞系经异种接种均形成移植性肿瘤，染色体为非整倍体，他们均有Ｙ染色体丢失、１ｐ缺失、２ｑ易位、５ｐ扩增，ＥＣ８７３３有８ｑ、１３ｑ扩增，ＥＣ８７１２有１７ｐ缺失。结论提示检出的这些畸变可能与肿瘤的发生、发展有关。

荧光原位杂交在间期细胞染色体检测中的应用

荧光原位杂交在间期细胞染色体检测中的应用王明荣王秀琴吴ＢｅｒｎａｒｄＰéｒｉｓｓｅｌＰａｕｌＭａｌｅｔ为探讨间期核荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）在医学上的应用，我们应用生物素标记的染色体特异探针，对未培养的羊水细胞、外周血细胞、膀胱癌手术标本、膀胱洗液、...

腺病毒E1和E4区基因共存的细胞系的建立

腺病毒载体相对安全,能有效地将外源基因转导到培养细胞或动物细胞中,但仍存在装载容量不够理想和免疫原性两个缺点.尤其是后一缺点,已成为制约其应用于临床基因治疗的主要因素.据认为,E4区基因在免疫原性中起着关键作用.因此人们希望通过发展E4区和Ela共缺陷的腺病毒载体,以降低或消除腺病毒载体免疫原性.这首先需要建立E4和E1区共存的包装细胞系,以互补腺病毒载体上E4和E1区功能的缺失,完成腺病毒载体的复制和包装.但有文献认为E4区和E1a不能稳定地存在于同一细胞中.我们成功地将腺病毒的E4区(pJM17的9724bp EcoRⅠ—XbaⅠ片段)插入AAV(Adeno-associated virus,腺辅助病毒)载体pAAV/neo中,并转导进293细胞(来自腺病毒E1区转化的人胚肾细胞,含有E1a区)中,得到了E1和E4区稳定共存的G418抗性细胞系.结果说明,E1和E4区可以稳定地共存于同一细胞,有可能建立无或低免疫原性,外源基因装载量由8kb扩大到17kb的新一代腺病毒载体系统.另外也表明,AAV载体介导的外源基因大小至少可达12kb左右(E4区9.7kb+neo基因2.7kb=12.4kb).

RAI──一候选的人肺腺癌分化相关基因

通过进一步分析采用全反式维甲酸（ａｌｌ ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ， ＡＴＲＡ）诱导人肺腺癌 ＧＬＣ－８２细胞，经ｃＤＮＡ文库消减杂交构建的ｃＤＮＡ消减文库，得到一在ＡＴＲＡ诱导 ＧＬＣ－８２细胞分化过程中激活表达（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｄｕｃｅｄ， ＲＡＩ）的基因的 ｃＤＮＡ片段，应 用菌落原位杂交技术在胎脑ｃＤＮＡ文库中进行筛选，克隆ＲＡＩ的全长ｃＤＮＡ序列并测 序．ＲＴ－ＰＣＲ分析表明，ＲＡＩ在多种胎儿组织中表达．结果表明，ＲＡＩ可能与细胞分化有 关，并在细胞基本生命活动中发挥重要作用．