RNA干扰C-erbB-2对肺腺癌细胞calu-3增殖的影响

背景与目的:C-erbB-2基因在人乳腺癌、卵巢癌、肺癌中扩增及过量表达,与肿瘤恶性程度增高、转移能力增强、化疗抵抗密切相关,且与预后不良有关。RNA干扰(RNA interfering,RNAi)是一种新的基因治疗技术,能有效、特异性地抑制细胞内基因表达。本实验研究靶向C-erbB-2基因的siRNA(small interferingRNA)对C-erbB-2过表达的肺腺癌细胞calu-3增殖的影响。方法:化学合成的靶向C-erbB-2基因siRNA在脂质体的介导下转染calu-3细胞,观察转染前后细胞表型的改变;通过逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和流式细胞术检测转染前后细胞中C-erbB-2mRNA和蛋白水平的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价对calu-3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期的变化和细胞凋亡情况。结果:靶向C-erbB-2基因siRNA降低了calu-3细胞中C-erbB-2mRNA和蛋白的表达,转染C-erbB-2siRNA48h后calu-3细胞出现C-erbB-2蛋白表达下调。C-erbB-2蛋白阳性率为(25.04±1.56)%,与未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组比较[(98.24±2.23)%、(95.67±1.98)%和(94.79±0.87)%]有显著性差异(P<0.01)。同时C-erbB-2siRNA对calu细胞增殖有抑制作用,使细胞周期阻滞于G0/G1期[C-erbB-2siRNA组(56.6±3.6)%,未转染对照组(45.5±3.2)%,P<0.01],并能诱导细胞凋亡。结论:化学合成的靶向C-erbB-2基因siRNA能有效抑制C-erbB-2基因在calu-3细胞中的表达,并对calu-3细胞增殖有抑制作用。

RNAi对骨肉瘤MG-63细胞survivin基因表达抑制作用

背景与目的:骨肉瘤是青少年中最常见的恶性肿瘤,它恶性程度高,预后差。survivin基因是作用最强的凋亡抑制因子,其表达与肿瘤的恶性程度及患者预后密切相关。本实验应用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术研究特异性survivin-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞survivin基因表达的干扰作用,并对RNAi技术在骨肉瘤基因治疗领域中应用的可能性进行初步分析。方法:将化学合成的特异性survivin-siRNA1和特异性survivin-siRNA2在脂质体的介导下转染骨肉瘤MG-63细胞,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术检测转染前后MG-63细胞中survivin-mRNA和蛋白水平,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来评估特异性survivin-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞的抗增殖作用,观察MG-63细胞生物学特性的改变。结果:特异性survivin-siRNA降低了骨肉瘤MG-63细胞survivin mRNA和蛋白的表达水平,干涉后细胞的增殖受到抑制。结论:化学合成的survivin-siRNA能有效抑制survivin基因在骨肉瘤MG-63细胞中的表达,并对骨肉瘤MG-63细胞增殖有抑制作用。

抗c-erbB-2 p185蛋白胞内区多肽单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的 研制抗c erbB 2胞内区多肽单克隆抗体 ,用于乳腺癌等c erbB 2过量表达的诊断及指导治疗。方法 合成p185蛋白胞内区多肽作为抗原 ,免疫BALB/C小鼠建立了一组分泌抗该多肽的特异性高亲和力单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,并对该单抗的生化特性及其免疫学反应性进行了研究和测定 ,并与美国食品药品管理局 (FDA)批准的抗c erbB 2多克隆抗体进行了比较。结果 共获得3株稳定分泌抗p185胞内区单抗的杂交瘤细胞株。其中 0 35 E6 1株单抗经对 39例 (T1 2 N0 M0 )乳腺癌患者组织病理切片进行免疫组织化学染色 ,c erbB 2过量表达阳性率为 2 6 % ,而乳腺纤维腺瘤组织切片没有非特异染色 ;流产正常胎儿器官组织切片除甲状腺、肾上腺和肾小管上皮表达外 ,其余均不表达。与FDA批准的DAKO公司多抗的阳性染色符合率为 74%。结论 0 35 E6 1单抗可特异识别乳腺癌细胞内p185胞内区抗原。对判断乳腺癌预后及指导治疗可能具有应用价值。

靶向Her2/neu基因小干扰RNA对肺腺癌Calu-3细胞株药物敏感性的影响

目的探讨转染靶向Her2/neu基因小干扰RNA(sm all interfering RNA,siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株药物敏感性的影响。方法实验分4组,未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组、Her2/neu siRNA组,实验重复5次。即用Her2/neu基因的特异性siRNA和非特异性siRNA通过阳离子脂质体L ipofectAM INE 2000分别转染Calu-3细胞。采用流式细胞仪(FCM)检测各组Calu-3细胞Her2/neu蛋白和P糖蛋白(P-gp)的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测顺铂(DDP)对转染siRNA的癌细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(AnnexinⅤ-FITC)凋亡试剂盒检测各组Calu-3细胞的凋亡水平。结果Her2/neu siRNA组Calu-3细胞Her2/neu蛋白表达的阳性率为(25.04±1.56)%、P-gp蛋白表达阳性率为(4.24±1.01)%,而未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组Her2/neu蛋白表达的阳性率分别为(98.24±2.23)%、(95.67±1.98)%、(94.79±0.87)%;P-gp蛋白表达阳性率分别为(5.11±2.98)%、(6.98±2.47)%、(5.59±3.66)%。Her2/neu siRNA组Calu-3细胞Her2/neu蛋白表达受到明显抑制(F=112,P<0.05);而P-gp的表达水平各组差异无统计学意义(F=2.45,P>0.05);Her2/neu siRNA联合DDP作用的细胞抑制率达(67.1±2.3)%,而未转染对照组、空载体组及非特异性siRNA组联合DDP细胞抑制率分别为(48.1±3.5)%、(46.3±5.9)%及(50.2±2.9)%,3组间抑制率差异无统计学意义(F=8.68,P>0.05),3组分别与Her2/neu siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01);FCM分析显示靶向Her2/neu基因特异性siRNA组Calu-3细胞的DDP诱导凋亡率为(35.6±3.4)%,明显高于未转染对照组的(8.8±0.5)%、空载体组的(9.6±1.7)%及非特异性siRNA组的(11.3±1.8)%,差异有统计学意义(F=10.68,P<0.01)。结论靶向Her2/neu基因siRNA能增强肺腺癌Calu-3细胞株对顺铂的敏感性。

Survivin-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞株增殖抑制的影响

我们应用化学合成的特异性Survivis-siRNA在脂质体的介导下转染骨肉瘤MG-63细胞，观察其对骨肉瘤细胞增殖抑制的影响。