小型猪外周血内皮祖细胞的体外培养与分化研究

目的:研究小型猪外周血内皮祖细胞(EPC)的体外分离和定向分化、扩增培养方法,为EPC移植应用于临床提供实验依据。方法:密度梯度离心法从小型猪200mL新鲜全血中分离单个核细胞,用含血管内皮生长因子等各种添加剂的内皮细胞系列专用培养液,分别在包被与不包被的培养皿中进行贴壁培养,诱导其向内皮细胞分化,观察经过不同时间培养后的细胞生长情况并进行诱导分化后的生物学鉴定,包括细胞表型鉴定、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取试验、超微结构鉴定、体外血管生成实验。结果:包被了贴壁因子的培养皿细胞贴壁及增殖均多于未包被组。前者第3-4d可观察到梭形贴壁细胞,10d后出现多个细胞簇,14d左右可观察到条索状、网状血管样结构,原代细胞培养21d左右接近融合并且呈典型的鹅卵石样排列。第7-14d有大于98%的细胞Flk-1、vWF、CD31表达阳性,CD34+细胞为(26.01±2.82)%,有大于95%的细胞DiI-acLDL摄取试验阳性,透射电镜可见特征性的Weible-Palade小体存在,在血管生成实验中,血管内皮生长因子显著促进EPC形成小管的数量与复杂程度,呈一定的量效关系。结论:密度梯度离心法结合贴壁筛选培养法可以用于体外分离外周血中EPC进行实验研究,EPC在一定的诱导培养条件下能分化成为血管内皮细胞,贴壁因子、血管内皮生长因子等对于体外培养EPC有很重要的作用。

IC53基因在血管及动脉粥样硬化斑块中的表达谱分析

目的IC53基因是我室1998年从成人主动脉文库克隆到的新基因,前期研究发现该基因与心衰发展相关。为进一步分析IC53基因与血管性疾病的关系,我们分析了IC53基因在人血管及动脉粥样硬化斑块中的表达。方法利用本实验室自备的IC53单克隆抗体,通过免疫组化分析IC53基因的表达情况。结果IC53基因主要在血管内皮表达,在平滑肌中未检测到信号,在外膜低表达。在动脉粥样硬化斑块中,IC53基因在巨噬细胞中表达。结论IC53基因可能通过内皮细胞及巨噬细胞在心血管疾病中发挥作用。

家族性混合型高脂血症临床诊断标准及遗传流行病学研究进展

家族性混合型高脂血症 (familialcombinedhyperlipidaemia ,FCHL)是具有复杂数量性状由遗传和环境因素共同决定的多基因病[1] 。FCHL常合并高血压、糖尿病并导致动脉粥样硬化及早发冠心病 ,是较常见的高脂血症[1～ 3]。遗传异质性、不完全显性、基因之间以及基因与环境间的相互作用共同决定FCHL的发生、发展。本文就FCHL的临床诊断标准、遗传流行病学、低密度脂蛋白颗粒的理化特征及其易感基因研究进展进行综述。

冠心病危险因素与血管紧张素Ⅱ-1型受体基因多态性的相关性分析

目的研究中原地区人群血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166/C多态性分布特点及与冠心病和冠脉病变严重程度的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术检测120例冠心病患者和80例健康对照者AT1R基因多态性。设计调查表调查冠心病危险因素。结果检测出AA和AC型2种基因型,在冠心病组AC基因型频率及C等位基因频率与对照组比较差异无显著性(P>0.05),分别为13.3%、7%和10%、5%,血压、血糖、体重指数等常规危险因素在AT1R两种基因型间差异均无显著性(P<0.05)。但AC基因型有与多个传统危险因素协同作用的趋势。结论AT1R-1166C等位基因由于在中国人中频率太低,可能不是冠心病的危险因素,但可能与多个危险因素协同作用增加冠心病的发病危险。

病毒性心肌炎有效单体药物研究进展

病毒性心肌炎是心血管系统的常见病与多发病 ,也是扩张型心肌病、心力衰竭和猝死的重要诱因之一 ,严重威胁人类健康。目前尚无针对病毒性心肌炎具有独特疗效的新药。本文参考近年来相关文献和实验结果 ,总结了病毒性心肌炎治疗及新药研究方面的发展动态 ,旨在为读者阐明病毒性心肌炎药物治疗的总体情况 ,提供可供参考的研究靶点。

影响结肠癌与血管生成的细胞因子

血管生成对肿瘤的形成和转移至关重要。在正常情况下,血管内皮与周围基质以及影响血管生成的各种细胞因子和生长因子之间的相互作用受到严格的时空调控,然而在肿瘤发生发展过程中,病理性的血管发生却脱离了正常的调控系统,无限制的异常持续。本综述主要介绍了一些在结肠癌和血管生成过程中共同起作用的细胞因子包括血管内皮生长因子(VEGF),Angiopoietin,整合素(Integrin),β-Catenin等。

9-顺维甲酸对肺癌细胞生长特性的影响

目的 观察 9 cis RA对肺腺癌细胞株PG和A5 49生长抑制、诱导分化和凋亡的作用。方法 将两株细胞分为 1μM、 5 μM 9 cis RA组和对照组 ,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数 ,苏木精—伊红染色观察细胞分化情况 ,流式细胞仪分析检测细胞凋亡。结果 (1)加入 9 cis RA 12h后 ,PG细胞生长受抑程度显著高于对照组 (p <0 0 1) ,且 5 μM组较 1μM组受抑程度更高 ,而A54 9细胞变化不明显。 (2 )加入 9 cis RA 2 4h后观察到PG细胞出现明显的分化特征 ,A54 9分化征象不明显 ,仅见分裂象减少。 (3)加入 9 cis RA 2 4h后PG细胞 1μM组和 5 μM组凋亡率均显著高于对照组 (p <0 0 1) ,且5 μM组凋亡率亦明显高于 1μM组 (p <0 0 1) ,A54 9细胞 5 μM组凋亡率明显高于对照组 (p <0 0 1) ,而1μM组与对照组无显著性差异。结论 9 cis RA对PG细胞株有明显的生长抑制、诱导分化和凋亡的作用 ,而对A54 9细胞的作用较弱 ,表明不同的细胞株对 9 cis RA的敏感性存在差异。

能量代谢基因表达改变在大鼠卒中发病学中的意义

目的 探讨能量代谢基因表达改变在卒中发病学中的意义。方法 应用冷刺激加高盐饮食复合环境因素作用于Wistar大鼠 ,诱发大鼠高血压脑卒中作为模型 ,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠和正常对照鼠脑的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后 ,产生的克隆均为脑卒中鼠脑组织特异表达的序列。每组随机挑取 2 88个克隆 ,进行测序及GenBankBlast生物信息分析。结果 两组共有 4 5 6个可用序列 ,我们对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行了分类 ,发现大鼠卒中后脑组织能量代谢基因出现的频数高达 2 6 5 % ,5 1个克隆与能量 /三羧酸循环基因高度同源 (P <0 0 1) ,能量 /三羧酸循环基因表达明显上调。结论 能量代谢基因表达发生改变 。

应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异及其在发病学中的意义

目的 探讨应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异以及其在发病学中的意义。方法 制备大鼠高血压脑卒中模型,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠(刺激因素组)和正常对照鼠脑(正常对照组)的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后,产生的克隆均为脑卒中鼠脑组织特异表达的序列。每组随机挑取2 88个克隆,进行测序及GenBankBlast生物信息分析。结果 两组共有4 5 6个可用序列,我们对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行了分类,发现大鼠卒中后脑组织细胞与机体防御基因表达明显下调(P <0 .0 1) ,2 88个克隆中未发现运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达。结论 脑组织运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达发生改变,可能是脑卒中发生的分子机制之一。

MTHFR基因多肽性及血浆同型半胱氨酸水平与老年人脑卒中发病的关系

目的 :探讨N5,N10 亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因C6 77T位点突变和血浆总同型半胱氨酸 (tHcy)水平升高是否增加中国老年人群脑卒中的危险。方法 :对 10 0 2例经头颅CT确诊的老年 (>6 0岁 )脑卒中患者和 94 8例非卒中对照者 ,采用多聚酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性技术 (PCR RFLP)检测MTHFRC6 6 7T基因型 ,用高效液相色谱法测定血浆总同型半胱氨酸水平 ,同时所有研究对象记录其病史 ,体检等临床资料及吸烟 ,饮酒等流行病学资料。结果 :脑卒中患者MTHFR基因纯合子突变 (TT)和杂合子突变 (CT)发生率 (6 9 4 % )明显高于对照组 (6 4 3% ,P =0 0 16 ) ,卒中组T等位基因频率 (4 5 8% )也高于对照组 (4 2 4 % ,P =0 0 32 ) ;脑卒中患者血浆总同型半胱氨酸水平及异常检出率和中、重度增高率亦明显高于对照组 (P <0 0 0 1) ,且MTHFR基因TT型 >CT型 >CC型 (P <0 0 0 1)。Logistic回归分析结果显示 :在调整传统危险因素后 ,升高的tHcy水平和CT和TT基因型仍与脑卒中发病的有关 ,且血浆同型半胱氨酸水平越高发生脑卒中的危险性越大。结论 :高同型半胱氨酸血症是中国老年人脑卒中发病的一个独立危险因素 ,而MTHFR基因C6

PDGF家族新成员:PDGF-C和PDGF-D

血小板源性生长因子(PDGF)是成纤维细胞,平滑肌细胞以及其它间充质来源细胞的强有丝分裂原和化学驱动剂。同VEGF家族成员类似,PDGF家族每一成员都含有一个高度保守的PDGF/VEGF同源结构域。生物活性PDGF分子一般由二硫键连接的同源二聚体或异源二聚体组成,受体是酪氨酸激酶受体PDGFR-α,β。PDGF及其受体在胚胎发育过程中扮演着非常重要的角色,尤其是肾脏、血管、肺和中枢神经系统。PDGF家族成员目前至少有4个,即PDGF-A,B,C,D。其中PDGF-A,B的研究历史已有二十余年,而PDGF-C,D是近年来刚发现的两个新成员。本综述主要是探讨PDGF-C,D两配体的结构和功能特性,并与两个传统的PDGF分子PDGF-A和PDGF-B加以比较。

遗传易感性与卒中

目前认为 ,脑血管疾病是由多个基因和多个环境因素共同作用的结果。遗传易感性在一些病例中起重要作用。对双生子、种族、地区及家族的研究表明 ,遗传基因在卒中的发生中起重要作用 ,某些常染色体异常可引起卒中。但在已研究的几十个候选基因中 ,尚无肯定的致病基因。卒中的危险因素受遗传基因和环境因素影响。研究表明 ,遗传因素对卒中的发生及致病因素的影响大于环境因素。卒中存在遗传易感性。

3’非翻译区在转录后调控中的作用

从生物体的能量消耗最小化原则来讲,生理意义上的基因表达调控多发生在转录水平,尤其是转录伊始不难理解--这样可以避免进行无用的转录过程和mRNA的剪切工作,从而避免了大量的资源浪费.相应地,目前被人们所熟悉的基因表达调控位点几乎都集中在基因的5'端,即转录调控的主要作用位置.然而基因不只有5'端序列,其3'端序列以长度推测亦应富含信息量.目前普遍被接受的一种观点是,基因的3'端,尤其是3'非翻译区涉及了基因转录后水平的调控过程,主要参与mRNA的稳定性、基因表达的定位以及翻译效率等生理进程的调控,具体可能在干细胞增殖分化、性别决定、神经元发生、血红细胞生成等过程中发挥作用.

心脏特异转录因子及其对心脏发育和心脏基因的调控

器官的形成需要器官特异细胞的定向分化及形态发育,这些都在特异基因的调控下完成。特异基因的表达由转录因子调控。心脏特异转录因子主要在心肌细胞表达,调节心脏特异基因表达,决定组织特异性,在心脏发育过程中起到了关键的作用。这些基因的突变会导致先天性心脏缺陷。我们感兴趣的是,这些转录因子以及它们所调控的心脏基因,在心脏发育中扮演了什么样的角色,这些基因的突变会有什么样的后果。本文主要综述了目前已经发现的一些转录因子在脊椎动物,尤其是小鼠和人类心脏发育的作用以及它们调控心脏基因表达的方式。

基因GADD45-β在肥厚型心肌病发病机制中的潜在作用浅谈

GADD45-β是GADD45家族中的一员,属于核内蛋白,主要通过调控p38和JNK来抑制细胞生长及细胞凋亡过程的。细胞核因子NF-kB是GADD45-β的上游调节因子,它对GADD45-β的调节有多种方式,但是最终都落到调节细胞生长及凋亡过程上来。目前关于GADD45-β的研究主要集中在肿瘤、癌症方面,有很多涉及GADD45-β的文献主要是研究它在肿瘤、癌症方面的功能。

MTHFR基因多态性及血浆同型半胱氨酸水平与脑卒中的关系

目的研究Ｎ５，Ｎ１０亚甲四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因多态性及血浆同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）水平与脑卒中的关系。方法运用多聚酶链反应限制性内切酶片段长度多态性技术（ＰＣＲＲＦＬＰ）检测８０例脑卒中及１１０例正常人ＭＴＨＦＲ基因多态性，用高效液相色谱仪和荧光检测仪测定８０例脑卒中及１１０例正常人血浆总Ｈｃｙ水平。结果发现ＭＴＨＦＲ基因型有３种，即纯合子突变（＋／＋）型，杂合子突变（＋／－）型，正常（－／－）型。患者组中＋／＋型频率为３１．２５％，＋／－型频率为５６．２５％，－／－型频率为１２．５％，Ｔ等位基因频率为５９．３７％，Ｃ等位基因频率为４０．６２％。正常组中＋／＋型频率为１８．１８％，＋／－型频率为２０．０９％，－／－型频率为５２．７２％，Ｔ等位基因频率为３２．７２％，Ｃ等位基因频率为６２．２７％，两组差异有显著性，且患者组中＋／＋和＋／－型均高于正常组。脑卒中患者血浆总Ｈｃｙ水平显著高于正常组。结论脑卒中患者ＭＴＨＦＲ基因纯合子突变和杂合子突变发生率均显著高于正常组，而Ｔ等位基因频率也明显高于正常组，说明ＭＴＨＦＲ基因突变及高同型半胱氨酸血症与脑卒中发生有一定关系，ＭＴＨＦＲ基因可能是脑卒中的易?

心肌球蛋白重链基因Arg719Gln突变与家族性肥厚型心肌病

目的 调查中国人家族性肥厚型心肌病 β 肌球蛋白重链 (β MHC)基因突变情况 ,评估中国人肥厚型心肌病临床特点与基因突变的关系。方法 对 5个独立的肥厚型心肌病家系进行 β MHC基因突变扫描 ,通过聚合酶链反应扩增 β MHC基因 3～ 2 7及 40号外显子 ,通过单链构像多态性及测序检测突变 ,采用限制性片断长度多态性分析检测其他家系成员。结果 发现一家系先证者第19号外显子聚合酶链反应产物单链构象多态性异常 ,测序分析表明该患者 β MHC基因第 719密码子位置发生G→A转换 ,使精氨酸 (Arg)变为谷氨酰胺 (Gln)。该患者临床表现胸痛、心悸及反复发作晕厥 ,超声示室间隔轻度不对称肥厚和左房扩大 ,母亲及姐姐皆有相似临床症状且都已于 38岁猝死。此外 ,在其他 4个家系中还发现了位于 β MHC基因上的ACT6 3ACC、TTT2 44TTC多态位点 ,但与疾病无明显相关。结论 β MHC基因Arg719Gln错义突变位于肌球蛋白重链的头杆结合部 ,该部位系肌球蛋白的重要功能区。该突变表型症状重 ,发病早 ,预后差 ,并与心房扩大和心房纤颤相关 ,提示该突变是致肥厚型心肌病的恶性突变。另一方面 ,研究表明同一突变可有不同的临床表现和预后 ,结合其他 4个家系均未发现错义突变的结果 。

甲钴胺对冠心病患者的高同型半胱氨酸血症的影响

目的 研究血浆同型半胱氨酸 (hyperhomocysteinemia ,Hcy)与冠心病 (CHD)的关系及甲钴胺对其的影响。方法 运用高效液相色谱仪和荧光检测仪测定 6 0例CHD患者和 40例健康人血浆Hcy水平 ,并对 36例冠心病合并高Hcy血症的患者用甲钴胺进行干预治疗 ,一次 5 0 0 μg ,每日 3次 ,连用 6周 ,6周后再次测定其血浆Hcy水平。结果 CHD患者血浆Hcy水平 (2 4 0± 5 5 ) μmol/L显著高于正常对照组水平 (9 8± 2 9) μmol/L ,P <0 0 1,在 6 0例CHD患者中有 36例合并高Hcy血症 ,对这些患者进行甲钴胺干预治疗 6周后 ,发现较治疗前明显下降 (11 3± 3 1) μmol/L ,P <0 0 1。 结论 高Hcy血症与冠心病发病有关 ,甲钴胺可显著降低冠心病合并高Hcy血症患者的血浆Hcy水平。

复合环境因素诱导大鼠脑卒中机体防御基因表达的改变及意义

目的 探讨环境因素对脑卒中发生、发展的影响。方法 应用冷刺激加高盐饮食复合环境因素作用于Wistar大鼠 ,诱发大鼠高血压脑卒中作为模型 ,应用新近发展起来的抑制性消减杂交技术对卒中鼠和正常对照鼠脑的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后 ,每组随机挑取 2 88个克隆 ,进行测序及GenBankBLAST生物信息分析。结果 两组共有 45 6个可用序列 ,我们对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行了分类 ,发现脑卒中时细胞与机体防御基因表达明显下调 (P <0 .0 1) ,而与代谢相关基因 ( 4 3个克隆与线粒体基因高度同源 ,P <0 .0 1)表达明显上调。结论 脑卒中时与应激相关的基因表达下调 ,说明机体的防御能力减弱。

肺炎衣原体感染增加糖尿病患冠心病的危险性

目的 本研究旨在探讨肺炎衣原体感染与冠心病的关系。方法 142 2例冠状动脉造影证实有冠心病或急性心肌梗死的患者和 2 97例冠状动脉造影证实的非冠心病患者作为对照 ,应用ELISA方法检测血液中的肺炎衣原体 (chlamydiapneumoniae,Cp)特异性IgG抗体 (CpIgG)。所有个体分为有、无冠心病 ,有、无冠心病危险因素 (年老、男性、吸烟、糖尿病、血脂紊乱、高血压、CpIgG抗体阳性、较少体力劳动和体重指数 ) ,应用logistic回归分析 ,得出调整OR(比值比 )值 ,用于评估危险因素对冠心病的危险性。结果 冠心病患者组CpIgG阳性率 ( 31 1%)高于对照组 ( 2 4 9%) (P =0 0 35 ) ,但logistic回归分析显示 ,调整OR值为 1 2 95 ( 95 %CI:0 96 2～ 1 743 ,P =0 10 8) ,表明Cp感染与冠心病的发病关系不明显 ,而年龄≥ 5 5岁、男性、吸烟、高血压、糖尿病是冠心病的独立危险因素 ;进一步分组研究表明 ,CpIgG阳性组中 (n =5 16 ) ,糖尿病的调整OR值为 4 90 1( 95 %CI:1 44 9～ 16 5 81,P =0 0 1) ,而CpIgG阴性组 (n =12 0 3)调整OR值为 1 6 75 ( 95 %CI:0 988～ 2 841,P >0 0 5 ) ,表明Cp感染增加了糖尿病对冠心病的危险性 ;老年、男性和吸烟的调整OR值 ,CpIgG阳性组也高于CpIgG阴性组。结论 Cp感染与冠心病发病?