血管生成和成熟的分子调节机制

血管新生或血管形成过程中产生的新生血管需要经过血管壁细胞的聚集、细胞外基质的生成、血管网的重塑修剪以及动 静脉分化等一系列过程才能成熟 ,形成有一定功能的血管。多种细胞因子发挥着重要的调控作用如VEGF/VEGFR、Angiopoietin/Tie和EphrinB2 /EphB4等。当这些调节因子的水平异常时 ,血管的结构出现异常从而导致各种疾病 。

氧化苦参碱体外抗病毒性心肌炎试验研究

目的:研究氧化苦参碱对柯萨奇B_3病毒(CVB_3)所致的VERO和大鼠原代心肌细胞病变抑制作用、病毒繁殖抑制反应,并测定其对大鼠原代心肌细胞培养上清液中心肌酶(LDH、CK-MB)活性的影响。方法:在VERO细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度氧化苦参碱后,感染CVB_3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID_(50))的差别:紫外分光光度法测定心肌细胞培养上清液LDH和CK-MB活性。结果:氧化苦参碱在VERO和心肌细胞实验中可有效抑制CVB_3病毒引起的细胞病变(P<0.01)及病毒的繁殖,对心肌细胞释放心肌酶也有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:氧化苦参碱对CVB_3病毒感染的VERO和心肌细胞具有保护作用。在一定浓度下可降低心肌酶的释放。其作用机制尚需做进一步实验来探讨。

血小板衍生生长因子D(PDGF-D)转基因鼠模型的鉴定

目的 :通过SouthernBlot的方法鉴定PDGF D转基因鼠。方法 :显微注射Alpha MyHC PDGF D质粒后 ,产生的PDGF D转基因c5 7小鼠养至 4～ 6周。取 0 5～ 1 0cm的小鼠尾巴 ,蛋白酶K消化过夜 ,提取基因组DNA。PCR方法初步筛选 ,阳性鼠进行进一步的SouthernBlot验证。紫外分光光度法定量基因组DNA ,EcoRI酶切过夜 ,酶切产物经纯化后 ,电泳 ,转膜。PCR方法制备Alpha MyHC PDGF D载体上特异的hGHPolyA探针 ,然后由32 P dCTP标记探针 ,与转好的膜相互杂交 ,- 70摄氏度在X光片上曝光约 1个月 ,得到转基因鼠鉴定的结果。结果 :SouthernBlot显示 4笼共 2 0只PDGF

CARP编码蛋白的相互作用蛋白筛选

目的 :筛选与CARP编码蛋白相互作用的蛋白 ,为其功能研究奠定基础。方法 :将编码全长CARP的DNA序列插入到pGBKT7 BD载体中 ,转化AH1 0 9酵母 ,然后与含有已克隆到pACT2载体上的人心脏cDNA文库的Y1 87酵母融合。CARP与相应的人心脏cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后 ,可激活报告基因的表达。阳性克隆的质粒进行测序分析。同源性检索搜寻GenBank中与之相同或相似的序列。结果 :共筛选约 3× 1 0 7个cDNA ,筛选出 9个阳性克隆 ,其中包括FLNa (actin bindingprotein 2 80 )。结论 :CARP编码蛋白在酵母中可以特异性的结合FLNa 。

CARK对心肌细胞肥大的影响及其作用机制探讨

目的 :探讨心肌细胞特异表达的基因CARK在心肌细胞中的作用。方法 :构建CARK真核表达载体 ,用脂质体介导的方法将CARK基因与NFκB Luciferase报告载体或 2 6kbNppapromoter luciferase报告载体共转染入原代培养的心肌细胞中 ,检测荧光素酶活性的变化。结果 :与转染空载体组比较 ,转染CARK基因组的NFκB 荧光素酶的活性下降了 1 3% ,(p >0 0 5 ) ,2 6kbNppapromoter 荧光素酶的活性下降了 1 9% (p >0 0 5 ) ,但无显著性差异 ;当给予心肌细胞一定的刺激时 ,其荧光素酶的活性分别显著性的下降了 4 5 %和 4 4 7% (p <0 0 5 )。结论 :当心肌细胞受到AngⅡ的刺激时 ,CARK能明显抑制ANF的表达 ,并抑制NFκB的激活 。