同种组织瓣在小儿先天性心脏病外科的应用现状

同种组织瓣作为目前理想的生物移植材料广泛地应用于复杂先天性心脏病的外科治疗 ,取得了良好疗效 ,但远期随访发现其易钙化、毁损 ,再次移植率明显提高。

成人大隐静脉内皮细胞的培养

目的 :探讨培养成人大隐静脉内皮细胞的有效方法。方法 :采用胶原酶 (0 .2 % )消化法收集大隐静脉内皮细胞 ,原代培养高密度种植 (1 .5× 1 0 4 /cm2 ) ,传代培养低密度种植 (0 .8× 1 0 4 /cm2 ) ,自体血清 (1 0 %～ 2 0 % )培养 ,胰酶 (0 .2 5 % ) - EDTA (1 mmol.L- 1 )消化 ,1 :3传代。结果 :原代培养细胞 ,1 2～ 2 4 h贴壁 70 %～ 80 % ,2～ 3d开始生长、延伸 ,(1 2 .0± 2 .3) d细胞 90 %汇合 ,原代培养获取细胞数 7.0× 1 0 4 /cm2 。传代培养细胞 ,0 .5～ 2 .0 h贴壁 80 %～ 90 % ,3～ 5 h开始生长 ,(7.0± 1 .1 ) d长满瓶壁。传代细胞较原代细胞易于贴壁 ,生长旺盛。形态学可见细胞呈扁平状单层排列 ,梭形或多角形 ,典型的呈“铺路石”状改变 ;CD31 相关抗原免疫荧光染色标记可见内皮细胞呈特异性黄绿色荧光 ;超微结构观察可见细胞表面有微绒毛 ,细胞浆内特异性的长杆状 Weibel-Palade(WP)小体。结论 :该方法确实、有效 。

剪切力促进内皮细胞种植黏附力的研究进展

血管和瓣膜内皮细胞种植面临的重要问题之一是提高内皮细胞和细胞外基质(ECM)的黏附力.剪切力环境下培养内皮细胞是改善心脏瓣膜和血管的内皮细胞种植效果的主要方法之一.本文旨在对近几年剪切力促进内皮细胞黏附的整合素信号传导途径和临床基础研究两方面进行综述,探讨体外培养内皮细胞时合适的剪切力指标.

去细胞组织工程同种心脏瓣膜的构建

目的 全面评价去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物学、生物力学及免疫学特性。方法采用低渗液-去污剂[0.5％去氧胆酸(DOA),1％DOA,1％Triton]-核酸酶去细胞法,测定了,47例去细胞同种心脏瓣膜去细胞前后组织学、免疫学、组织厚度、组织含水量、热皱缩温度、组织基因组DNA含量、胶原蛋白含量、应力应变曲线、破坏强度及组织伸长比变化。结果组织学检查1％DOA 24 h组完整地去除了同种心脏瓣膜、管壁及肌肉组织中所有的细胞成分,保留了完整的细胞外基质;免疫组织化学证实白细胞DR(HLA-DR)抗原表达明显下降;组织基因组DNA含量显著下降(瓣叶下降91.14％,管壁下降91.53％);与去细胞前相比,只有管壁组织的含水量(去细胞前75.4±1.8,去细胞后82.0±0.7,P<0.05)明显增加,组织厚度、瓣叶组织含水量、热皱缩温度、应力应变曲线、破坏强度及组织伸长比差异无显著意义。结论低渗液-去污剂(1％DOA)-核酸酶去细胞法方便有效,去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物学及生物力学特性稳定,免疫性显著下降,符合机体的要求,为受体细胞化组织工程心脏瓣膜的研制提供了可靠的天然的纤维支架材料。

去细胞组织工程同种心脏瓣膜的免疫学特征

目的构建去细胞的组织工程同种心脏瓣膜,探讨其免疫学特性变化。方法取液氮保存的人同种主动脉带瓣管道,采用低渗液-去污剂(1％去氧胆酸,1％DOA)-核酸酶[20mg／L核糖核酸酶(RNase)和200 mg／L去氧核糖核酸酶(DNase)]去细胞法去除同种心脏瓣膜、管壁组织及肌肉中所有的细胞成分,保留完整的细胞外基质,构建去细胞的组织工程同种心脏瓣膜;采用免疫组织化学方法测定HLA-DR抗原在同种心脏瓣膜组织中的表达;行大鼠皮下移植试验,评价组织学变化及Van Kosaa银染色法定性分析、原子吸收光度计法定量分析组织的钙化程度。结果去细胞同种心脏瓣膜的白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达较深低温液氮保存同种心脏瓣膜(HVA)显著下降;大鼠皮下移植8周后,去细胞同种心脏瓣膜组织中的炎性细胞浸润显著减少,定性分析表明去细胞组瓣叶和管壁组织中呈黑色颗粒的钙盐沉积较深低温液氮组显著下降,尤管壁组织更为显著;定量分析亦表明去细胞瓣叶和管壁组织的钙化程度显著下降(瓣叶:去细胞组0．83±0．17 mg／ g,深低温液氮组[(1．39±0．26)mg／g,P<0．05];管壁:去细胞组(2．35±2．58)mg／g,深低温液氮组[(42．66±7．46)mg／g,P<0．05)]。结论去细胞同种心脏瓣膜的免疫原性显著下降,有望减轻移植后免疫反应,延长同种心脏瓣膜的使用寿命。