脱细胞心血管组织的生物力学性能评价

目的比较心血管组织在脱细胞前后的生物力学性质。方法分别测试脱细胞处理前后肺动脉壁和瓣叶的强度、应力-应变、应力松弛等生物力学指标并进行比较。结果肺动脉壁在处理前后各指标无明显差异,瓣叶在脱细胞后其强度和应力-应变明显变化,应力-松弛无明显变化。结论脱细胞的心血管组织与天然组织的生物力学性能一致或接近。

脱细胞牛心包羊肺动脉补片的实验研究

目的 评价脱细胞牛心包构建有活性的组织工程羊肺动脉补片的可行性。 方法 将新鲜牛心包采用酶 -去污剂联合脱细胞处理作为血管补片材料 ,从小尾寒羊颈外静脉分离血管内皮细胞和成肌纤维细胞进行传代扩增培养 ,然后分层种植到已消毒的脱细胞牛心包 ,体外培养 7d后 ,自体细胞 -脱细胞牛心包补片作为实验组 (n=5 )植入羊肺动脉 ,分别于 4周 ,6周 ,8周 ,12周和 2 4周取材 ;单纯脱细胞牛心包补片作为对照组 (n=3) ,于 4周 ,12周和 2 4周取材 ,对两组牛心包补片均进行大体观察和组织学检查 ;测定钙、胶原和弹性蛋白的含量。 结果 所有动物均存活 ,羊肺动脉补片内未见血栓 ,无明显动脉瘤样扩张 ,两组补片钙含量与正常肺动脉比较无明显差别。随补片植入时间的推移 ,弹性蛋白含量逐渐增加 ,与正常肺动脉弹性蛋白含量相似 ,显示进行性的组织重塑。 结论 自体细胞 -脱细胞牛心包羊肺动脉补片与单纯脱细胞牛心包补片在体内通过组织重塑在一定程度上均可形成有活性的血管壁组织。

骨髓间质细胞对体外培养的缺氧心肌细胞影响的初步研究

目的:探讨缺氧条件下骨髓间质细胞对培养的心肌细胞凋亡的作用。方法:共培养乳鼠心肌细胞和骨髓间质细胞。利用厌养罐模拟细胞缺氧,观察细胞形态、检测细胞凋亡亚二倍体、观察细胞脱氧核苷酸断裂情况及凋亡相关蛋白的表达。结果:单独培养的骨髓间质细胞对缺氧不敏感,而单独培养的心肌细胞在缺氧后24h出现凋亡,表现为明显的凋亡亚二倍体峰和“DNAladder”。当两种细胞缺氧共培养24h后,混合细胞的凋亡亚二倍体峰明显减少,“DNAladder”消失,抗凋亡蛋白Bcl-2表达无显著差异而促凋亡蛋白Bax表达降低。结论:缺氧条件下体外细胞共培养模型表明骨髓间质细胞对心肌细胞的凋亡有一定的拮抗作用,可能是通过抑制Bax蛋白的表达而实现的。

不同方法处理的牛心包生物相容性和钙化结果分析

目的观察脱细胞处理对牛心包体内生物相容性及钙化的影响并与戊二醛处理的牛心包进行比较;材料和方法对新鲜牛心包随机分为三组,A、戊二醛处理组:新鲜牛心包采用0.5%的戊二醛进行处理;B、新鲜牛心包组:新鲜牛心包保存于四联抗生素液中;C、脱细胞组:新鲜牛心包酶-去污剂联合脱细胞后保存于四联抗生素液中。上述处理后的牛心包经细菌培养,显示无细菌生长后,植入雄性昆明小鼠皮下三周观察炎性浸润及钙化情况。采用von Kossa钙染色检查进行定性分析;原子吸收光谱检查进行钙含量定量分析。同时体外对三组牛心包进行力学和热皱缩温度进行测试。结果三组间炎性浸润程度明显不同,0.5%的戊二醛处理组钙化程度明显增高,每克干重牛心包平均含钙量71.2mg,较其他两组有明显差异(P<0.001),新鲜牛心包组(平均2.12mg/g干重)和脱细胞组(1.41mg/g干重)间钙化程度方面亦有显著统计学意义(P<0.001)。组织学钙染色光镜下检查显示三组间黑色颗粒有明显差异,支持三组间钙含量定量结果的差异。戊二醛处理组的力学性能与优于新鲜组和脱细胞处理组,热皱缩温度高于新鲜组和脱细胞处理组。结论新鲜牛心包脱细胞处理后钙化显著降低,免疫源性降低,有很好的生物相容性。

染料介导光氧化固定牛带瓣颈静脉的生物特性评价

为了解染料介导光氧化固定牛颈静脉的生物稳定性,抗钙化性和免疫原性,新鲜的牛颈带瓣静脉经染料介导光氧化法固定,分别进行化学消化和胃蛋白酶消化,上清液进行梯度聚丙烯酰胺电泳来了解其生物稳定性;将氧化固定的材料埋植于SD大鼠皮下,3周后取出,测钙含量、进行钙染色以及组织学检查了解其抗钙化性和免疫原性;采用戊二醛固定以及新鲜的牛带瓣颈静脉作为对照。染料介导光氧化固定的牛带瓣颈静脉经化学和酶消化之后的上清液电泳之后出现极淡的蛋白条带,明显淡于新鲜的未处理的材料,戊二醛固定的材料几乎不出现蛋白条带。皮下埋植3周后,钙含量测定,染料介导光氧化组显著低于戊二醛组,统计学上差异有显著性意义;钙染色,戊二醛组可见大量的钙沉积,新鲜组也可见钙沉积,但比戊二醛组少,染料介导光氧化组只见少量钙沉积;组织学检查提示光氧化组细胞浸润明显少于其他两组。体外动物实验提示,染料介导光氧化固定的牛带瓣颈静脉具有生物稳定性,低的钙化性和低免疫原性。