腺病毒介导人FL与GM-CSF联合抗肿瘤免疫基因治疗实验研究

目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF。采用ELISA、W estern b lot法测定重组腺病毒介导的hFL和hGM-CSF在体内外的表达情况。MTT法测定hFL和hGM-CSF刺激细胞增殖的生物学活性。利用流式细胞分析技术研究重组腺病毒对小鼠脾脏树突状细胞(DCs)的扩增情况。在移植EL-4淋巴瘤的小鼠皮下注射4次重组腺病毒(每次5×109pfu),研究其抑制肿瘤生长的功能。结果:构建得到含有双基因的重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF,并在体内、外高效共表达hFL和hGM-CSF。hFL对小鼠骨髓有核细胞,hGM-CSF对TF1细胞,均有明显的刺激增殖作用。Ad-hFL-hGM-CSF显著扩增小鼠脾脏DCs至正常值的50倍。抑瘤实验中,Ad-hFL-hGM-CSF使小鼠EL-4淋巴瘤生长延慢,瘤体比对照组明显减小,抑瘤率为30%,P<0.05。病理切片显示,Ad-hFL-hGM-CSF治疗组肿瘤细胞间隙有大量淋巴细胞浸润。结论:腺病毒介导hFL和hGM-CSF在小鼠体内显著扩增脾脏DCs,并可抑制EL-4淋巴瘤的生长。

血管紧张素转化酶基因多态性与原发性高血压的关系

目的研究血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）基因的插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与原发性高血压的关系。方法应用ＰＣＲ的方法分别检测７２例原发性高血压患者和９３例正常血压组的ＡＣＥ基因第１６内含子的Ｉ／Ｄ多态性。结果共得到３种基因型：纯合缺失型（ＤＤ），纯合插入型（Ｉ），杂合型（ＩＤ）。原发性高血压患者Ｄ等位基因的频率（０．６２）高于健康对照组（０．４８）（Ｐ＜０．０５）。结论ＡＣＥ基因的Ｉ／Ｄ多态性可能与原发性高血压有关。

谷氨酰胺双肽增强肠粘膜IGF－I和谷氨酰胺酶的mRNA表达

外科应激及传统的肠外营养可引起肠粘膜萎缩，谷氨酰胺能维持并减轻肠粘膜萎缩，但它不能耐受热灭菌，无法制成商品。而丙氨酸－谷氨酰胺双肽稳定性好，能耐受热灭菌，具有与谷氨酰胺相同的生物学效用。其作用机理尤其是分子水平的机理还有待进一步研究。研究目的：研究谷...

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物的分离和纯化

从机采浓缩血小板中 ,应用凝胶柱刀豆素A—琼脂糖、肝素—琼脂糖亲和层析与分子筛层析法 ,分离、纯化并得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物由α、β两个亚单位组成 ,糖蛋白Ⅱb可还原为糖蛋白Ⅱbα(分子量为 12 5kDa)和糖蛋白Ⅱbβ(分子量为 2 3kDa) ,而糖蛋白Ⅲa为一条多肽链 ,分子量为 95kDa ,还原后为 10 8kDa。经不同凝胶亲和层析、凝胶电泳分析 ,得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物 ,为进一步筛选单克隆抗体和进行药物研发打下了基础。

敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对MGC-803人胃癌细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用UCSC Cancer Browser下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛查YTHDF2 mRNA在胃癌中的表达情况。设计并构建能够靶向敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)病毒载体;病毒感染MGC-803细胞,敲低YTHDF2水平后,实时荧光定量PCR检测YTHDF2 mRNA水平,Western blot法检测YTHDF2蛋白水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果通过TCGA数据库查询发现YTHDF2在胃癌组织中高表达。成功构建YTHDF2敲低的稳定转染MGC-803细胞。与对照组相比,YTHDF2敲低后,明显抑制细胞增殖;G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少;细胞凋亡率升高。结论敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2水平,抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。

腹主动脉瘤信号传导相关基因的研究

目的研究细胞信号传导基因在腹主动脉瘤和正常主动脉的差异表达 ,探讨其与腹主动脉瘤发生的关系。方法应用基因芯片技术检测腹主动脉瘤和正常主动脉信号传导相关基因的表达 ,筛选出差异表达显著的基因 ,从RNA和蛋白质水平作进一步的分子生物学实验。结果发现腹主动脉瘤差异表达的信号传导基因 45条 ,在动脉瘤组织中表达上调基因为 2 8条 ,表达下调基因 17条。对其中MAPK信号系统的进一步实验发现ASK1、ERK1等基因异常表达 ,均在主动脉中层有蛋白质表达。

热休克蛋白90β参与热休克基因的表达调控

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类进化上保守的蛋白质,它们以分子伴侣的形式在细胞内发挥其正常生理功能,并参与细胞应激保护和应答过程。人淋巴细胞中最主要的HSP是表观分子量70ku和90ku的HSP70和HSP90两组,其中HSP90又分为α和β两个拷贝。热休克蛋白基因(heat shock protein gene,hsp)的反式调节因子即热休克因子(heat shock factor,HSF)通过多聚化、磷酸化等活化过程参与HSP基因表达。与主要在应激诱导中大量表达的HSP70不同,HSP90是一类特异性分子伴侣,在生理条件下能与多种细胞内受体和信号传递途径中有关成分结合并调节它们的活性,因而其细胞内精密调节的机制具有重要的生理意义;但是,作为分子伴侣的HSP90是否参与其自身或对其他热休克基因的反馈调节迄今未见报道,本文对此进行了探讨。

血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达

Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子 .从胎盘组织中提取总RNA ,根据已知canstatin基因序列 ,设计特异引物 ,应用RT -PCR方法扩增出该基因片段 .DNA序列测定表明 ,与文献报道的该基因比较 ,核苷酸序列完全一致 .将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体 pPROEX HTb中 ,在大肠杆菌E .coliBL2 1中经IPTG诱导获得了表达 ,表达量约占菌体总蛋白量的 2 0 %以上 .

诱导性基因打靶的原理及有关应用

诱导性基因打靶是一种借助于 Cre/ lox P系统的作用、利用控制重组酶 Cre表达的启动子或 Cre酶活性的可诱导性、或重组酶 Cre定位表达的基因转移系统的宿主细胞特异性等特性 。

精子发生特异表达的SOX蛋白

SOX(SRY box相关)蛋白是与SRY相关的蛋白家族,它们的HMG box与Sry(Y染色体上性别决定基因)编码蛋白SRY的HMG box不同程度的同源,通过HMG box结合于特定的DNA序列上,使DNA构象发生改变,或直接通过HMG box两侧的氨基酸序列调节靶基因转录活性。部分SOX蛋白在精子发生中特异表达,并表现出与不同分化时期生精细胞相关的转录形式和表达量的改变。

JAK-STAT信号转导机制及其与Ras通路的关系

细胞因子在造血细胞的生长和分化、免疫调节及宿主防御机制中发挥着重要作用。多数细胞因子是通过与一类受体亚家族相互作用而发挥其广泛生物学作用的。随着对细胞因子受体结构的认识不断加深和JAK-STAT信号通路的发现,分子生物学家们愈来愈意识到JAK-STAT在细胞因子信号传递中的主导作用。Shc-JAK和Raf-JAK的相互作用以及MAPK对STAT功能的调节作用提示,JAK-STAT与Ras信号通路之间具有广泛的联系和沟通。