高良姜种子超低温保存研究

为解决高良姜种子长期保存的问题,以高良姜的成熟种子为材料,研究含水量和玻璃化处理对其活力的影响,以及快速冷冻法和玻璃化冷冻法对种子超低温保存的影响。结果表明：（1）种子含水量在10.77%～27.25%时,其活力仍保持在60%以上,当含水量由10.77%降至7.86%时,其活力降至40%以下;（2）玻璃化处理后的种子活力低于未玻璃化处理的种子活力;（3）经液氮超低温保存后,含水量为21.10%～27.25%的种子活力降至50%以下甚至为0%;含水量为10.77%～15.61%的种子活力仍保持在60%以上;其中含水量13.58%的种子活力最高,并且玻璃化冷冻处理的种子活力（72.67%）高于快速冷冻处理的种子活力（65.81%）。据此认为,液氮超低温长期保存高良姜种子是可行的。

木霉菌及其对植物真菌病害的防治机制

木霉广泛分布于自然界,因其对多种病原真菌具有拮抗活性而被应用于多种植物病害的生物防治。本文从竞争作用、重寄生作用、分泌抗菌物质、诱导抗性和促生作用5个方面就木霉菌对植物真菌病害的拮抗作用进行了综述;另外,还简要概括了拮抗木霉菌在生物防治中存在的问题以及今后应重点研究的方向。

黄柏苷对黄檗种子休眠程度影响的初步研究

为研究黄柏苷与环境温度、种子休眠程度的相关性,探讨黄柏苷在温度信号介导中可能存在的作用。以高效液相法检测不同生长地及年度黄檗叶片中的黄柏苷含量,滤纸培养法检测黄檗种子发芽率确定其休眠程度。持续监测生长地气温。通过在黄檗繁殖器官上喷施黄柏苷,考察黄柏苷对种子休眠程度的直接影响。结果表明,生长地花期均温相差5℃,黄檗叶片中黄柏苷含量均值相差54.46 mg/g,层积30天种子发芽率相差40.45%;不同年度间花期均温相差1.16℃,黄柏苷含量均值相差4.83 mg/g,层积30天种子发芽率相差23.07%;喷施黄柏苷,可使种子休眠程度显著加深,种子发芽率降低57.34%。研究结果提示三者之间存在环境温度越低,黄檗叶片中黄柏苷含量越高,黄檗种子休眠程度越深的关联,温度对黄檗种子休眠程度的调控可能是通过调节黄柏苷含量,经过某种体内途径实现的。

九里香种子超低温保存研究

研究旨在探索适于九里香(Murraya exotica L.)种子的液氮超低温保存条件,为采用液氮超低温保存方法长期保存九里香种子提供依据。以九里香成熟种子为材料,采用快速干燥法获得不同含水量的种子,分别用玻璃化法、分步冷冻法和直接冷冻法对其进行液氮超低温保存,结合石蜡切片法观察种子显微性状,并测定种子生理生化活性指标。结果发现,种子含水量由30%降至7%,其对照组生活力由98%缓慢降至82%;经不同冷冻方法处理后其生活力随含水量的降低呈先降后升的趋势,在含水量7%时各冷冻组生活力均升至最高,且此时冻存前后生活力最接近;分步冷冻处理后的种子生活力普遍高于玻璃化冷冻和直接冷冻处理;含水量18%~30%时种子分步冷冻处理后切面颜色较其他组偏深,含水量30%的种子分步冷冻处理后部分细胞出现空腔或较严重的质壁分离,含水量7%的种子经不同冷冻处理后其活力和结构与对照组相比基本无变化;分步冷冻处理后种子丙二醛含量、蛋白质含量、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性下降,脱氢酶活性升高。九里香种子可用液氮超低温保存,采用含水量为7%的种子分步冷冻处理为佳。

急性慢性高尿酸血症大鼠模型的建立

目的:筛选出稳定可行的急性、慢性高尿酸血症大鼠模型,为抗高尿酸药物的研发提供模型工具。方法:急性高尿酸血症大鼠模型采用皮下注射次黄嘌呤(HX)+腹腔注射氧嗪酸钾(OAPS)和单纯腹腔注射OAPS的方法造模,在造模后0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、10 h眼眶取血,测定血尿酸、血肌酐及血清尿素氮水平。慢性高尿酸血症大鼠每天灌胃酵母膏(YE)+腺嘌呤(AP)溶液+定期腹腔注射OAPS溶液和每天灌胃乙胺丁醇(EMB)+OAPS混合溶液的方式造模,连续给药14 d,停止给药后继续观察14 d,在第4、6、8、11、14、15、16、18、20、22、25、28天大鼠眼眶取血检测血尿酸、血肌酐、血清尿素氮,在第14、28天取大鼠肾脏进行肾组织病理学检测。结果:2种急性模型均出现了尿酸值短暂性升高和急性肾脏损伤情况,而HX+OAPS联合模型高尿酸水平维持时间更长。2种慢性模型尿酸水平显著提高并出现了肾脏损伤,停止造模后,2种高尿酸水平可以维持1周左右,EMB+OAPS给药肾脏损伤更加严重,2周后各项指标仍处于高水平。结论:4种方法均可建立急性慢性高尿酸血症动物模型,但是HX+OAPS联合给药的急性模型和灌胃EMB+OAPS混合溶液的慢性模型病理症状更加明显,维持时间也更长,更适于药物的筛选。

基于COI条形码的中药材蛇蜕及其易混伪品的DNA分子鉴定

目的:对中药材蛇蜕及其易混伪品进行分子鉴定,以确保该中药材的临床用药安全。方法:以COI序列作为DNA条形码,对蛇蜕原药材进行DNA提取,PCR扩增和序列测定,对13个物种的68份样品进行DNA Barcoding Gap分析和系统聚类分析。结果:蛇蜕3种基原黑眉锦蛇Elaphe taeniura Cope、锦蛇Elaphe carinata(Guenther)和乌梢蛇Zaocys dhumnades(Cantor)具有DNA Barcoding Gap,在邻接(NJ)系统聚类树上分别聚为独立一枝。结论:COI作为DNA条形码,不仅可以鉴定中药材蛇蜕的3种基原,而且可以区分蛇蜕及其易混伪品,表明DNA条形码可以用于中药材蛇蜕的鉴定。

基于SNP位点鉴定砂仁药材物种

目的:为建立基于单核苷酸多态性(SNP)技术鉴别砂仁3个基原(阳春砂Amomum villosum、海南砂Amomum longiligulare、绿壳砂Amomum villosum var.xanthioides)的方法,对这3个种共计60份材料ITS2序列进行分析比较。方法:将实验所得砂仁ITS2序列,应用CodonCode Aligner软件进行序列拼接比对。用MEGA 5.0导出各序列变异位点,并对变异位点进行分析。为验证结果准确性,下载砂仁3个基原GenBank的所有ITS2序列,共计34条,对结果进行验证。结果:砂仁ITS2序列比对后长度为230 bp,3个不同基原在135 bp和199 bp处存在稳定SNP(s)变异位点。结论:本研究开发的两个稳定的SNP(s)位点可以快速准确地鉴定砂仁药材3个基原。

金银花莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶(LjHCT)基因克隆与序列分析

莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶(HCT)是金银花中绿原酸合成途径的关键酶。本研究利用已经获得的金银花(Lonicera japonica Thunb.)大量表达序列标签(EST)数据,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得8条可能的HCT基因cDNA全长序列。通过序列相似性比较、蛋白质理化性质和保守结构域分析确定其中1个基因为金银花HCT(LjHCT)基因。该基因全长1 275个碱基,蛋白质分子量约为47kDa,为进一步研究HCT在绿原酸合成过程中的功能奠定基础。

基于ITS2条形码序列鉴定中药材续断及其混伪品

【目的】利用ITS2序列对中药材续断及其混伪品进行DNA条形码鉴定,从而确保用药安全。【方法】对续断及其混伪品ITS2进行扩增并双向测序,经CodonCode Aligner V3.7.1拼接比对后,用MEGA 5.0计算种内种间K2P遗传距离,并构建NJ系统聚类树进行鉴定分析。【结果】续断药材ITS2序列比对后长度为218bp;种内K2P遗传距离分布于0-0.009 4,种间K2P遗传距离分布于0.033-0.188 2,NJ树显示续断药材及混伪品可明显区分,表现较好的单系性。【结论】ITS2序列作为DNA条形码能准确鉴别续断药材。

连作对丹参产量和质量的影响及施肥的作用

为了明确连作对丹参药材产量及品质的影响及施肥对连作障碍修复作用。文章采用田间试验的方式,以连作一年的土壤为试验土壤,将不同种类肥料在整地时施入连作土壤。研究连作及施肥后的丹参产量、有效成分含量及抗氧化活性。结果表明连作使丹参的产量下降了21.78%,抗氧化活性也显著降低,但对有效成分含量影响不明显;施用微生物肥使连作丹参的产量提高21.67%,使连作丹参的抗氧化活性得到了显著提高,但施肥处理对有效成分含量影响不大。连作使丹参药材产量和抗氧化活性降低,但不影响有效成分含量,施肥对连作障碍有一定的修复作用。

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品>酒制品>烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品>酒制品>净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。