肺鳞癌PD-L1共表达基因及转录调控网络分析

目的绘制肺鳞癌中细胞程序性死亡配体1(PD-L1)共表达基因关系网络,筛选潜在的PD-L1协同检测生物标志物,寻找可能参与PD-L1调控肿瘤免疫状态的基因及通路。方法采用TCGA肺鳞癌数据集,利用c Bio Portal数据分析平台进行共表达基因集检索,从全基因转录组水平对PD-L1的共表达基因进行Venny分析,筛选目标基因,进行多种类型的聚类和分子关系网络分析,并建立PD-L1调控网络。结果共获得PD-L1中等程度表达相关基因126个,主要为质膜定位型基因,功能集中在免疫调节过程,其中IRF2/NFKB1/IRF1三个转录因子参与了对PD-L1基因集30%以上基因的转录调控。经过PD-L1共表达基因集的核心分子筛选,分析网络节点连接度,得到具有最高连接度的前6个节点基因,依次为IFNG、JAK2、STAT1、CTLA4、CD80和CCR5,对这些基因不同表达水平的肺癌患者的生存情况进行分析,结果显示CCR5是一个有意义的预后指标分子。进一步对PD-L1和CCR5的表达谱数据进行相关性分析,结果显示CCR5与PD-L1表达谱水平的Pearson相关系数为0.47(P<0.05);GO-BP聚类分析显示,CCR5的功能主要聚集在免疫调控、T细胞调控、细胞信号转导等领域,与PD-L1调控网络的功能相符。结论 PD-L1共表达基因集内的主要节点均为免疫相关分子,其中IFNG、CCR5、NFKB1分子对PD-L1共表达基因网络具有最广泛的调控作用,该发现为肺鳞癌免疫治疗的研究和应用奠定了一定基础。

成纤维细胞生长因子结合蛋白2过表达促进食管癌细胞的增殖

目的:检测成纤维细胞生长因子结合蛋白2(FGFBP2) mRNA在食管癌组织中的表达情况及其预后判断价值,探讨其在食管癌细胞中的作用。方法:采用组织微阵列联合RNA原位杂交技术在190例食管癌组织和42例配对癌旁正常组织中检测FGFBP2mRNA的表达情况,分析其阳性表达率,及其与食管癌患者临床病理指标和预后的关系。利用CCK-8体外增殖实验和Westernblot法检测FGFBP2敲降(转染siRNA)在食管癌细胞系中的作用。结果:RNA原位杂交结果显示,FGFBP2 mRNA在食管癌组织中的表达阳性率为25.8%(49/190),在癌旁正常组织中不表达,两者间差异显著(P <0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,FGFBP2mRNA表达与食管癌患者术后生存期显著相关(P =0.002),FGFBP2 mRNA表达阳性的患者预后较差。多因素Cox回归分析结果表明,FGFBP2 mRNA阳性表达是食管癌患者不良预后的独立预测因素(危险度为2.291,95%置信区间为1.271~4.129,P =0.006)。体外细胞实验结果表明敲降FGFBP2 基因可抑制食管癌细胞系KYSE150和KYSE510的增殖。Western blot结果显示,敲降FGFBP2基因后AKT的磷酸化水平降低,ERK的磷酸化水平未发生明显变化(P >0.05)。结论:FGFBP2 mRNA在食管癌组织中表达升高,可能作为食管癌患者预后判断的分子标志物,FGFBP2高表达可能通过激活AKT通路而促进食管癌细胞增殖。

三阴性乳腺癌辅助化疗预后生物标志物的研究进展

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)具有组织学分级高、临床分期晚、侵袭性强、易发生转移等特点。由于缺乏有效的治疗靶点,传统化疗仍是TNBC患者主要的治疗选择。作为高度异质性疾病,TNBC需要更为精确的预测生物标志物。组学技术的发展及临床试验的实施为辅助化疗预后生物标志物带来新的探索,涵盖基因、蛋白及微环境成分等不同维度,也包括多分子的联合分析应用。本文将对TNBC辅助化疗预后生物标志物及其潜在分子机制与未来发展方向进行综述。

循环肿瘤DNA预测激素受体阳性晚期乳腺癌患者内分泌治疗耐药的临床分析

目的探讨多基因联合检测预测激素受体阳性晚期乳腺癌患者内分泌治疗耐药的临床应用价值。方法采用回顾性病例分析方法,收集2015年1月至2016年8月中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院收治的30例激素受体阳性晚期乳腺癌患者的临床资料。于患者治疗前采集其外周血10 ml,利用目标区域捕获测序技术检测循环肿瘤DNA(ct DNA)突变情况。根据患者是否存在耐药相关基因(TP53、PIK3CA、m TOR、ERBB2、ESR1、FGFR1)突变,将其分为基因突变组和非基因突变组。分析内分泌治疗耐药与基因突变的关系。采用Kaplan-Meier法绘制2组患者的无进展生存(PFS)曲线,用Log-rank检验比较两者之间的差异。并用χ~2检验比较基因突变组与非基因突变组患者发生原发耐药的差异。结果在30例患者中,基因突变组与非基因突变组患者分别有20例和10例。随访1~19个月,中位随访时间为3个月,2组患者中位PFS分别为3个月和5个月,并且,基因突变组患者6个月PFS率明显低于非基因突变组(10%比50%,χ~2=8.328,P=0.004)。20例基因突变组患者中,原发耐药者18例,继发耐药者2例,而10例非基因突变组患者中原发耐药者5例,继发耐药者5例;基因突变组原发耐药者比非基因突变组多(χ~2=5.963,P=0.026)。结论联合检测多个耐药相关基因的ct DNA,能够预测晚期乳腺癌患者内分泌治疗耐药。

食管鳞癌细胞系核苷酸还原酶亚单位M1的表达水平与细胞对吉西他滨敏感性的关系

目的探讨食管鳞癌细胞系核苷酸还原酶亚单位M1（RRM1）表达水平与细胞对吉西他滨（GEM）敏感性的关系。方法选用4个人食管鳞癌细胞系Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706，采用Western blot和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各细胞系的RRM1表达水平，采用细胞毒性试验检测各细胞系对GEM的敏感性。以50nmoL／L GEM持续培养Kyse-450细胞，检测不同时点存活细胞RRM1表达水平的变化。应用RNA干扰技术下调RRMl表达水平后，检测细胞对GEM敏感性的变化。结果GEM作用48h，Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706细胞的IC50分别为（0．92±0．17）、（0．48±0．11）、（0．29±0．06）和（0．02±0．01）mmol／L。RT—PCR和Western blot结果均显示，Eca-109细胞系的RRM1表达水平最高，其次是Kyse-150和Kyse-450，9706细胞系的RRM1表达水平最低。50nmol／L GEM持续培养Kyse-450细胞后，存活细胞的RRM1水平随着培养时间的延长而逐渐增高。转染RRM1 siRNA的Kyse-450细胞RRM1蛋白的表达水平显著降低，而对GEM的敏感性提高了4．26倍。结论食管鳞癌细胞系RRM1的表达水平与细胞对GEM的敏感性相关，RRM1表达水平低的细胞对GEM相对敏感。

荧光原位杂交技术在淋巴瘤诊断中的价值

目的探讨荧光原位杂交（FISH）检测在淋巴瘤诊断中的价值，为淋巴瘤的准确诊断提供依据。方法以前瞻性非随机分组模式，采用三组IgH／bcl-2、IgH／CCND1、API2／MALT1探针，对临床初诊为淋巴瘤的74例活检新鲜样本的瘤细胞进行FISH，检测其相应t（14；18）、t（11；14）及t（11；18）染色体易位，将检测结果与组织病理诊断进行比较评价。结果74例中8例（10．8％）检测到染色体易位，分别为t（14；18）和t（11；14）各4例。62例组织病理诊断为淋巴瘤者中7例检测到染色体易位，分别为t（14；18）3例（组织病理诊断2例为滤泡性淋巴瘤、1例为结节硬化型霍奇金淋巴瘤）；t（11；14）4例（组织病理诊断2例为套细胞淋巴瘤、1例滤泡性淋巴瘤，1例小淋巴细胞淋巴瘤）。在组织病理未诊断为淋巴瘤的12例中，仅检测到1例t（14；18），而其组织形态显示为淋巴组织增生活跃，经FISH检测更正诊断为滤泡性淋巴瘤。25例弥漫性大B细胞淋巴瘤未检测到t（14；18）。在其他有基因数目异常者56例（75．7％）中恶性病变52例（92．9％），与4例（7．1％）良性病变比较，病变性质与基因数目异常之间差异有统计学意义（P=0．011）。结论FISH技术检测淋巴瘤特异的遗传学异常对于复核组织病理诊断、鉴别其类型、亚型及病变的良、恶性有重要参考价值。

血清miR-378和miR-21联合检测对胃癌的诊断价值

目的探讨血清miR-378和miR-21联合检测对胃癌的临床诊断价值。方法选择中国医学科学院肿瘤医院经病理确诊的胃癌患者87例，结直肠癌患者78例，健康体检者83例，采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中miR-378和miR-21的表达水平（以log2对结果进行转换）。结果miR-378在健康对照者、胃癌患者和结直肠癌患者血清中的相对表达水平分别为－1.24、－3.25和－2.73，miR-378在胃癌和结直肠癌患者血清中的相对表达水平明显低于健康对照者（均P〈0.05）。miR-21在健康对照者、胃癌患者和结直肠癌患者血清中的相对表达水平分别为0.11、2.34和2.47，miR-21在胃癌和结直肠癌患者血清中的相对表达水平明显高于健康对照者（均P〈0.05）。胃癌患者血清中miR-378的低表达与肿瘤的临床分期有关（P〈0.05），分期越晚，下降程度越大；而miR-21在胃癌患者血清中的升高程度与患者的临床病理特征无关（均P〉0.05）。血清miR-378诊断胃癌的曲线下面积（AUC）为0.770，灵敏度为82.0%，特异度为66.0%；miR-21诊断胃癌的AUC为0.900，灵敏度为85.0%，特异度为88.0%；miR-378＋miR-21诊断胃癌的AUC为0.930，灵敏度为92.0%，特异度为87.0%。CEA＋CA-199诊断胃癌的AUC为0.767，CEA＋CA-199＋miR-378＋miR-21诊断胃癌的AUC为0.946。结论联合检测血清中miR-378和miR-21的表达对胃癌具有一定的诊断效能。

粒细胞集落刺激因子受体及其阳性免疫细胞在结直肠癌发生发展中的表达变化

目的探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在结肠炎相关结直肠癌（CAC）发生发展过程中的表达水平，并分析其阳性表达的免疫细胞亚群。方法联合应用氧化偶氮甲烷（AOM）和葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导C57BL/6小鼠，建立CAC动物模型，模拟结直肠癌疾病发展中的3个阶段，即炎症恢复期（AD1）、轻度不典型增生期（AD2）和原位癌形成期（AD3）。于AD1、AD2和AD3结束后，分别取结直肠组织制备单细胞悬液，应用流式细胞仪和荧光定量PCR法检测粒细胞集落刺激因子（G-CSF）和粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）的表达，并分析G-CSFR在T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞中的表达情况。结果小鼠结直肠炎-癌转化模型成功建立，可以有效模拟结直肠炎-癌的发生和发展过程。实时荧光定量PCR检测结果显示，AD1组、AD2组和AD3组小鼠结直肠组织中G-CSF mRNA的表达水平分别为对照组的1.2倍、7.3倍和18.0倍，其中AD2组与对照组、AD3组与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。AD1组、AD2组和AD3组小鼠结直肠组织中G-CSFR mRNA的表达水平分别为对照组的1.5倍、2.2倍和4.5倍，其中AD3组与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测结果显示，对照组、AD1组、AD2组和AD3组小鼠结直肠组织中CD45＋G-CSFR＋细胞的比例分别为（21.84±1.77）%、（41.48±4.15）%、（44.84±8.54）%和（57.76±1.95）%，AD2组和AD3组均明显高于对照组（均P〈0.05）。对照组、AD1组、AD2组和AD3组小鼠结直肠组织中CD45＋G-CSFR＋巨噬细胞的比例分别为（21.54±5.88）%、（47.14±5.25）%、（42.49±7.80）%和（29.25±8.24）%；CD45＋G-CSFR＋T细胞的比例分别为（30.04±6.87）%、（29.65±8.08）%、（33.75±7.37）%和（33.32±9.85）%；CD45＋G-CSFR＋中性粒细胞的比例分别为（2.39±2.10）%、（4.05±1.56）%、（3.62±2.67）%和（2.26±0.85）%。各组小鼠结直肠组织中巨噬细胞亚群和T细胞亚群占CD45＋G-CSFR＋细胞群的比例均明显高于粒细胞亚群所占的比例（均P〈0.05）。对照组与AD1组、对照组与AD2组、AD1组与AD3组、AD2组与AD3组小鼠结直肠组织中G-CSFR＋巨噬细胞含量的比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论CAC发生发展过程中，G-CSFR的表达明显上调，其阳性表达的巨噬细胞随疾病进展而富集于结肠组织，提示其参与CAC的发生发展。

PDGFRα在成人胶质母细胞瘤患者中的表达及临床意义

目的探讨血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)在成人胶质母细胞瘤(GBM)患者中的表达并评价其临床意义。方法选取2013年7月至2016年10月间中国医学科学院肿瘤医院和安徽医科大学第二附属医院收治的278例成人GBM患者,采用组织芯片-免疫组化染色技术检测278例患者瘤脑组织及10例非瘤脑组织中PDGFRα表达情况,10例非瘤脑组织为切除深部胶质瘤而造瘘获得的表浅正常组织,并对PDGFRα阳性表达与GBM临床病理参数和预后关系进行分析。结果 PDGFRα在10例非瘤脑组织中均未见明显阳性信号,而在278例GBM标本中41例为强阳性,阳性率为14.7%,主要定位在细胞浆和细胞膜。PDGFRα表达与p53表达显著正相关,差异有统计学意义(P<0.01),PDGFRα表达与性别、年龄、卡氏生活治疗评分(KPS)、病理类型、治疗方式及IDH1状态等临床病理参数均无相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Cox分析结果表明KPS、术后治疗方式及PDGFRα阳性表达是GBM的独立预后因素,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 PDGFRα在成人GBM患者中存在异常表达,可作为GBM分子分型、辅助治疗及预后评估的标志物。