医学生死亡态度调查及影响因素分析

目的了解医学生对死亡的认知程度,并对可能的影响因素进行分析。方法自制问卷,内容包含:医学生基本信息、是否接触过"死亡"相关内容和死亡观念。采用秩和检验对医学生的死亡认知程度的影响因素进行分析。结果医学生的死亡态度与其年龄、专业、宗教信仰、是否接受过死亡教育或培训等影响因素有关:有宗教信仰的人更愿意接受死亡的事实(P<0.01),家中讨论死亡的氛围更公开坦白的人更愿意接受死亡的事实(P<0.01),更愿意与别人谈论死亡(P<0.01),接受过死亡教育或培训的人更希望减轻走向死亡过程中的各种痛苦(P<0.01)。结论医学生死亡认知态度与其是否有过死亡教育和死亡接触经历有密切关系,提示需要而且可以通过多种途径对中国医学生进行死亡相关教育。

低叶酸联合甲氨蝶呤诱导神经管畸形胎鼠的神经组织转录组学分析

目的利用低叶酸饲喂联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)诱导的小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,分析孕9.5天胎鼠脑组织和脊髓组织基因转录表达的变化,探讨可能影响神经组织发育的功能基因及转录因子。方法将SPF级、6~8周龄健康雌性ICR小鼠分为两组,其中对照组采用正常饲喂,低叶酸联合MTX实验组采用低叶酸饲喂,4周后交配,受孕7.5天实验组以1.5mg/kg浓度腹腔注射MTX,受孕9.5天获取两组的胎鼠脑、脊髓组织,分别提取总RNA进行RNA-seq,采用DESeq软件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用生物信息学方法分析实验组与对照组中影响神经组织发育的差异基因功能及转录因子。结果实验组与对照组比较,脑、脊髓组织基因转录组分别有939、879个DEGs。GO(gene ontology)功能分析显示,脑组织DEGs功能按生物学过程(biological process,BP)分类,上、下调的基因均主要集中在细胞过程、生物调节、发育过程;按细胞组分(cellular component,CC)分类,上、下调的基因均主要集中在细胞、细胞器相关组分;按分子功能(molecular function,MF)分类,上、下调的基因均主要集中在蛋白结合、转录调节活性。脊髓组织DEGs功能在各分类中结果与脑组织的相似。脑、脊髓组织的差异表达转录因子主要聚焦在zf-C2H2、bHLH、Homeobox、STAT等家族。结论低叶酸联合MTX能够引起胎鼠神经组织基因组的转录改变,DEGs功能主要与神经细胞发育、转录调节有关。影响神经发育的转录调节因子集中在zf-C2H2、bHLH、Homeobox、STAT家族。

医院科研统计咨询工作实践与技能调查

目的分析公立医院科研统计咨询服务需求,探索如何提升从业者技能。方法连续收集2014年9月至2018年5月,北京协和医院中心实验室科研平台统计咨询服务对象352人次登记信息,总结分析咨询者特征、咨询目的及方法学需求。结果咨询者具有中级职称者占比最大(45. 4%),高级职称者次之(34. 4%)。咨询目的占比由高到低依次为:撰写并发表科研论文(73. 0%)、课题实施(9. 4%)、撰写项目书申请基金(8. 5%)、撰写毕业论文(6. 3%)、其他(2. 8%)。基础统计方法被咨询频次最多(41. 2%);多元统计方法次之(17. 6%);生存分析等现代统计方法咨询比例逐渐上升。结论科研统计咨询需求不断增长,从业者需要兼具良好的沟通能力,扎实的理论基础,丰富的临床研究经验,熟悉统计软件操作,对现代统计方法有较强学习能力。

POC5基因罕见突变位点在中国汉族人群特发性脊柱侧凸患者中的分布研究

背景:特发性脊柱侧凸(idiopathic scoliosis,IS)是一种脊柱三维畸形,其特点是脊柱侧方弯曲的度数>10°并伴有椎体的旋转畸形且已除外目前已知的所有致病原因。编码中心粒蛋白体-5(proteome of centrioles 5,POC5)的POC5基因是在高加索人群IS患者中发现的第一个致病性基因,而在中国汉族人群IS患者中尚无关于该基因的罕见变异报道。目的:检测中国汉族人群IS患者中POC5基因的突变情况。方法:选取2010年10月至2017年10月在我院就诊的121例中国汉族人群IS患者作为实验组,选取50名健康中国汉族人作为对照组,使用Sanger测序法,对他们血液样本中的DNA进行POC5基因测序。结果:在2例中国汉族IS患者中发现位于POC5基因第10外显子(NM_001099271)上的错义突变,分别是c.C1139T(p.S380F)及c.A1132T(p.I378L),而在50名健康人群中并未发现有POC5基因突变位点。结论:POC5基因第10外显子可能是中国汉族人群及高加索人群中,IS相关突变位点的热点区域。POC5突变在IS中的分子生物学发病机制,需要进一步的细胞功能及动物模型等研究进行验证。

后路脊柱手术隐性失血的预测（英文）

目的确定隐性失血的危险因素可以揭示其可能的发生原因并为更合理的临床决策提供依据。本研究旨在确定脊柱手术隐性失血的预测因素。方法回顾性地检索进行后路胸腰椎融合手术或脊柱侧弯手术患者的临床资料。记录人口统计学信息,围手术期可见失血量以及实验室检查结果。将接受融合手术或脊柱侧凸手术的患者分别分为隐性失血阳性亚组和隐性失血阴性亚组。然后分析各组之间变量的差异。采用二元Logistic回归分析确定与隐性失血相关的独立危险因素。结果对于接受脊柱后路手术的患者,隐性失血相关的独立危险因素为自体输血(融合手术P=0.011,OR:2.627,95%CI:1.574～2.782;脊柱侧弯手术P <0.001,OR:2.268,95%CI:2.143～2.504)和同种异体输血(融合手术P <0.001,OR:6.487,95%CI:2.349～17.915;脊柱侧凸手术P <0.001,OR:3.636,95%CI:2.389～5.231)。结论术中输血可能是围手术期隐性失血的早期预警指标。

罕见病研究与孤儿药研发

孤儿药缺乏一直是罕见病治疗中的瓶颈问题,孤儿药市场具有极高的商业潜力。目前全球范围内多个国际组织合作简化孤儿药专利申请过程,推动孤儿药研发、上市加速发展。中国国家罕见病注册系统(NRDRS)队列研究项目采用队列研究方法,可最大程度地为孤儿药临床试验提供便利。罕见病发病机制的研究将为孤儿药的研发提供新的策略和切入点,尤其是孤儿药中的基因治疗和酶替代疗法,其作用靶点极大依赖于对罕见病致病机制的了解。除此之外,罕见病机制的研究也将推动常见疾病药物适应证拓展,使部分常见疾病药物重定位为孤儿药。相应地,罕见病致病机制也可能为常见疾病的新药开发提供新的作用靶点。对于经过临床试验验证治疗效果、但作用机制尚不清晰的新药,罕见病致病机制也可提供新的思路,从而有助于解释其作用机制。此外,由于孤儿药批准、上市速度远优于常见疾病药物,许多药物最初作为孤儿药上市,但后期适应证拓展使其同样可用于治疗常见疾病,有力推动了制药产业的发展。在精准医学思想的指导下,随着中国NRDRS的建立及完善,罕见病基因型与表型之间的关系将日趋分明,这将有效助力孤儿药的研发,进而推动中国医药产业的整体迈进。

骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中miR130a的表达

目的诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,初步探索miR130a在骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中的调控作用。方法体外TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,免疫荧光法和免疫组化染色鉴定Ⅱ型胶原,阿辛兰染色鉴定氨基葡聚糖。用Real-time PCR法检测细胞miR130a的表达。结果骨髓间充质干细胞在TGF-β1诱导下可分化为软骨细胞。培养7 d后,诱导培养组细胞miR130a表达的水平显著低于培养前的水平(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞体外诱导可以分化为软骨细胞,在向软骨细胞分化的早期,miR130a表达降低伴随着软骨细胞的分化,提示与软骨形成的过程有关。

文献批判性阅读在临床教学中的应用:教学方案与初步实践

目的探索主动学习基础上的文献批判性阅读方法在临床教学中的应用。方法组织在神经科进行临床轮转和学习的住院医师及研究生共38人,每2周进行一次文献批判性阅读学习。以讨论课为主,教师指导下学生自选文献阅读,提出问题并分析,教师现场点评并作总结,并以邀请相关教师进行方法学知识授课为辅。初始阶段,建议学生从高影响力杂志选择文献,采用"http://www. equator-network. org/"发表的研究报告指南进行评价,文章类型可包括英文出版的观察性研究、干预性研究、诊断/预后研究以及系统综述。通过问卷调查反馈方式进行教学评价。结果目前已进行6次讨论课,所选取的文献涵盖4种研究设计类型:随机对照试验、预后队列研究、诊断试验以及病例对照研究;专业内容方面包括脑血管病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化以及帕金森病。开展"研究设计及文献检索讲座"2次。通过问卷匿名收集学生对于文献批判性阅读教学形式的反馈意见:11名学生认为主要收获是学习到了批判性阅读的思维方式及规范了文献阅读习惯,11名学生认为学习到了研究方法学知识,4名学生认为有助于补充统计学知识,1名学生认为可以了解专业方面最新进展。针对有待改进之处的反馈意见分散:5名学生希望增加方法学知识讲座,4名学生希望在讨论中更着重统计知识的学习,3名学生希望有更充裕时间阅读文献,2名学生希望在自己担任引领组时得到老师更多指导等。结论通过初期教学实践,文献批判性阅读在青年医师教学中反响良好,有助于系统培训住院医师和研究生的临床科研方法和能力,培养其良好的批判性阅读文献的思维方式。

联合磁性微球和基质辅助的激光解吸/离子化-飞行时间质谱筛选肾细胞癌血清差异蛋白

目的采用联合磁性微球和基质辅助的激光解吸/离子化-飞行时间(MALDI-TOF-MS)技术筛选肾细胞癌患者血清差异蛋白峰。方法采用弱阳离子磁性微球从99份血清标本(肾细胞癌62份,肾脏良性占位病变37份)捕获血清蛋白,MALDI-TOF-MS质谱仪检测蛋白峰,Biomarker Wizard 3.1和Biomarker Patterns Software 5.0分析数据,以47例肾细胞癌及26例肾脏良性占位病变标本建立肾细胞癌诊断模型,15例肾细胞癌和11例肾脏良性占位病变标本进行盲法验证。结果发现7个蛋白峰具有统计学差异(P<0.05),以质荷比2945.35、15340.8、6984.51、5819.23的4个蛋白峰建立肾细胞癌诊断模型,该模型区分肾细胞癌与肾脏良性占位病变的敏感性为83.0%,特异性为84.6%;盲法验证,该模型诊断肾细胞癌的敏感性为80.0%,特异性为81.8%。结论采用磁性微球与MALDI-TOF-MS技术可以检测肾细胞癌血清中的差异蛋白峰,并建立敏感性、特异性较高的肾细胞癌诊断模型。

多重连接探针扩增技术检测常见线粒体疾病

目的探讨多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)用于常见线粒体疾病基因检测的可行性。方法收集2010年5月至2012年8月北京协和医院281例可疑线粒体异常病例,包括神经科存在神经系统损伤的患者233例及眼科疑诊Leber遗传性视神经病变的患者48例,运用MLPA法对常见线粒体疾病突变位点进行检测,并使用线粒体基因序列测定方法进行验证。结果 281例标本中共38例检测到线粒体基因突变,总检出率为13.5%。眼科48例标本中,3460G>A、11778G>A和14484T>C3种突变共检测到19例,检出率为39.6%;神经科233例标本中,3243A>G、8344A>G、8993T>G和大片段缺失共检测到19例,检出率为8.2%。除1例大片段缺失暂无PCR测序验证外,其余MLPA结果均经序列测定验证为相符。结论 MLPA法是一种可行的快速、准确、简便的基因诊断方法,可作为筛查常见线粒体疾病的检测工具,为临床诊断和治疗提供依据。

ω-3多烯酸乙酯对肿瘤恶病质的影响及其机制

目的临床上肿瘤恶病质的治疗十分棘手,初步的研究提示ω-3多不饱和脂肪酸本身作为免疫营养素具有改善肿瘤恶病质的功能。本研究应用在心血管疾病中广泛使用的ω-3多烯酸乙酯口服制剂来干预荷瘤小白鼠,探讨其对肿瘤恶病质的改善作用及机制。方法使用小白鼠结肠癌细胞株C-26皮下注射Balb/c小白鼠,构建荷瘤小白鼠肿瘤恶病质模型,将小白鼠分为3组:对照组(无荷瘤小白鼠组)、荷瘤无干预组和荷瘤ω-3多烯酸乙酯干预组,荷瘤ω-3多烯酸乙酯干预组小白鼠给予ω-3多烯酸乙酯(DHA、EPA>80%)灌胃(2 g.kg-1.d-1,体积<0.1 ml)。连续2周记录小白鼠饮食量、体质量及腓肠肌重量等指标,并比较各组肿瘤组织炎性因子IL-1β、IL-6的mRNA表达差异。结果ω-3多烯酸乙酯干预组相对于荷瘤无干预组可显著改善荷瘤小白鼠的体质量减轻程度,减少瘦肉体(腓肠肌)的丢失,并降低肿瘤组织的炎性因子IL-1β、IL-6的mRNA表达水平。结论口服ω-3多烯酸乙酯可以降低组织炎性因子表达,达到改善肿瘤恶病质的作用。

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱联合磁珠技术寻找肺癌血清蛋白标志物

目的 建立肺癌蛋白质指纹图谱诊断模型,探讨用于肺癌早期诊断及手术疗效评估的血清蛋白标志物。方法 收集38例肺癌患者、12例肺部良性肿瘤患者及32名正常对照者的血清标本,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）联合磁珠技术,获得蛋白质指纹图谱,采用BPS分析软件对数据分组及相关性进行分析,初步建立肺癌的血清蛋白质指纹图谱诊断模型,并验证其诊断效率;同时对比肺癌患者手术前后的差异蛋白质谱,结合肺癌的诊断模型,选取合适的蛋白作为肺癌手术疗效的观察指标。结果 在质荷比为1000-50 000范围内,肺癌患者、肺部良性肿瘤患者和正常对照者之间共检测到215个蛋白质峰。其中,质荷比为1115.37、1929.70、3217.57、3246.34、3318.57、11 508.90的6个蛋白质峰表达差异具有统计学意义（P〈0.05）。决策树模型对肺癌的原始判别敏感性为92.11%（35/38）,特异性为90.91%（40/44）;交叉验证敏感性为86.67%（13/15）,特异性为86.67%（13/15）。其中质荷比为1115.37、1929.70、3246.34和11 508.90的蛋白质峰在肺癌患者中明显升高（P〈0.05）,当肺癌患者手术治疗后表达量较术前明显降低（P〈0.01）,表明这4个蛋白质峰对肺癌的诊断及疗效判定具有潜在应用价值。结论 应用SELDI-TOF-MS技术建立的肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型具有较高的敏感性和特异性,为发现肺癌早期生物标志物并判断疗效奠定基础。

丙型肝炎病毒相关混合型冷球蛋白血症的炎症因子浓度分析

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)相关混合型冷球蛋白血症(mixed cryoglobulinemia,MC)患者的外周血炎症相关因子的表达情况。方法 30例患者经过年龄、性别、HCV抗体检测结果、冷球蛋白定性结果匹配后,纳入本研究。分别归入MC和HCV双阳性组(MC+HCV+)、MC和HCV双阴性组(MC-HCV-)、MC阳性HCV阴性组(MC-HCV+)、MC阴性HCV阳性组(MC-HCV+)。采用魏氏沉降法、毛细管电泳分型进行冷球蛋白定性、定量、分型分析,Meso Scale Discovery(MSD)超敏电化学发光多细胞因子检测试剂盒检测人白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),CXC趋化因子10(C-X-C motif chemokine 10,CXCL10),CXC趋化因子12(C-X-C motif chemokine 12,CXCL12),胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)。IBM SPSS 22. 0软件进行数据分析。结果 MC+组IL-2,CXCL12,TSLP浓度高于MC-组(P<0.05),HCV-MC+亚组CXCL12,TSLP浓度高于HCV-MC-亚组(P<0.05)。其他亚组内细胞因子浓度差异不具有统计学意义。结论本研究发现CXCL12,TSLP与MC有一定的关联,而与HCV感染没有相关性。这些发现为进一步深入研究HCV相关MC的发生机制提供了初步的研究基础。

PTEN调节神经样细胞微管相关蛋白tau的聚集及意义

目的观察体外诱导成人骨髓基质干细胞(BMSC)向神经细胞分化过程中,在第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)调节细胞骨架中轴突标志分子微管相关蛋白tau(MAPT)分布及聚集的特征,并探讨其意义。方法从成人骨髓中分离基质干细胞,在体外经细胞因子诱导分化2周后成为神经样细胞,将未分化的BMSC作为对照组;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法研究MAPT的表达变化;经PTEN抑制剂BPV作用于该细胞后,用结合有荧光剂的鬼笔环肽直接染色细胞微丝肌动蛋白,并联合用免疫荧光细胞化学方法染色MAPT,在激光共聚焦显微镜下观察MAPT和肌动蛋白的定位及关联性。结果成人骨髓来源的基质干细胞经诱导分化后,MAPT的m RNA在分化1周和2周时相对表达水平为0.24±0.04和0.52±0.04,高于对照组BMSC的0.04±0.02(P<0.05)。MAPT蛋白表达水平分别为0.18±0.03和0.44±0.05,高于对照组0.06±0.04(P<0.05)。细胞染色后,经BPV作用后MAPT由弥散状态变为聚集状态,并分布于细胞一侧,神经样细胞开始出现极性。结论 BMSC来源的神经细胞分化成熟时,PTEN参与调节细胞骨架中轴突标志分子MAPT的转运和聚集,为神经细胞的轴突进一步生长提供物质支持。

一种脆性X综合征新检测方法的应用及探讨

目的建立一种更快捷、准确、简便的检测脆性X综合征的方法。方法用传统的基因组酶切-PCR法与TP-PCR法同时对26例可疑患儿进行基因检测。结果基因组酶切PCR法共检测4例男性患者,其余均未见异常;TP-PCR法不仅检测出4例男性患者,且检测出1例女性携带者。结论 TP-PCR法是一种准确、快速、简便和相对价廉的方法,可以快速筛查脆性X综合征的基因诊断方法。

口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中抑癌基因PTEN mRNA表达的定量研究

目的定量研究蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)mRNA在口腔鳞状细胞癌及对应癌旁正常组织中的表达。了解PTEN基因的表达与口腔癌发生、发展的关系。材料和方法应用实时荧光定量PCR方法检测42例口腔鳞状细胞癌及对应癌旁正常组织中PTEN mRNA的表达,Rotor-Gene Real-Time PCR Analysis Software 6.0软件进行mRNA定量分析,在SPSS14.0统计软件平台上用配对t检验方法统计检验。结果42例口腔鳞状细胞癌和对应癌旁正常组织中均有PTEN mRNA表达。口腔鳞状细胞癌组织中PTEN mRNA表达量[1.10±0.13(log PTEN/logβ-actin)]低于相应癌旁正常组织(1.48±0.28),差异有统计学意义(P<0.01)。结论口腔鳞状细胞癌的发生与PTEN mRNA表达水平降低有一定关系。

骨骼发育不良的分子遗传学研究进展

骨骼发育不良(SD)是一组以全身骨骼生长发育障碍为特征的遗传性骨骼系统疾病,其临床表型具有多样性和复杂性。分子诊断技术可帮助临床医师明确疾病的类型、病因和转归。全外显子组测序(WES)目前作为基因组学中被广泛应用的技术,在SD的致病突变和发病机制研究中取得了显著成果。本文就近3年来应用WES在SD领域的分子遗传学研究进展进行综述。

临床生物样本库信息系统建设与发展

随着转化医学的快速发展,临床生物样本库的作用日益凸显,其建设和应用日益受到关注和重视。信息管理系统是样本库的核心部分,其建设应立足于支撑样本库的运营、管理和服务全过程,通过建立样本信息数据采集流程、数据集成与交换系统及安全系统,形成一体化整合数据库和公共门户网站,实现生物样本、临床资料和分子数据等各种资源的高效管理和全面共享。

格特隐球菌基因组学研究进展

格特隐球菌属于新生隐球菌复合体,既往被认为是新生隐球菌复合体的变种,但最终被确立为独立的物种。与新生隐球菌不同,格特隐球菌多感染免疫力正常人群,目前致病机制尚未明确。格特隐球菌的基因组学研究不仅可全面了解其基因组成、分子进化、毒力因子以及致病机制等特点,还可对致病相关基因和重要蛋白进行预测,为疫苗和新型抗生素的研发提供分子基础,并进一步为高效治疗和防控隐球菌病提供理论依据。本文就格特隐球菌的基因组测序和基本特征、基因组进化、重要毒力基因以及比较基因组研究予以概述。

叶酸通过KDM6A影响神经管发育

目的研究低叶酸环境中赖氨酸去甲基化酶(KDM6A)对神经管畸形(NTDs)产生的影响。方法采用小鼠胚胎干细胞(SV129)、NTD小鼠模型以及NTD人标本;通过甲氨蝶呤(MTX)0.02μmol/L处理SV129细胞24 h,并使用Access 2 Immunoassay系统、竞争性受体结合免疫法测量其叶酸水平;Western blot和免疫荧光检测DNA的断裂及KDM6A表达情况;用小鼠NTD模型,测量其DNA断裂相关修复基因的转录水平;检测人NTD标本中的叶酸含量及KDM6A的表达。结果细胞在低叶酸环境中DNA断裂增加并且KDM6A蛋白表达减少,同时小鼠NTD模型中DNA断裂修复基因KU80/70转录水平表达降低(P<0.05);低叶酸NTD标本的KDM6A与KU80表达也减少。结论低叶酸环境中,DNA断裂增加,KDM6A表达减少。可能是由于启动DNA断裂修复途径异常,导致NTD的发生。