多发性骨髓瘤中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)基因异常甲基化的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者的SOCS1基因甲基化状态及其mRNA表达情况.方法收集2009年1月至2011年6月在昆明医科大学第一附属医院和第二附属医院就诊的54例MM患者骨髓标本,采用甲基化特异性PCR法研究SOCS1基因启动子区甲基化情况;利用自动测序技术对扩增产物测序分析其碱基甲基化位点;运用荧光实时定量反转录PCR检测其mRNA表达水平.结果 54例多发性骨髓瘤患者中,存在SOCS1基因启动子区甲基化,与对照组比较具差异有统计学意义(P<0.05);测序结果也证实甲基化的存在;mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 SOCS1异常甲基化在MM的发病机制中具有一定作用,但其表达可能受到标本数量、临床治疗方案和其他免疫相关细胞因子等多因素影响.

甲乙肝联合疫苗中不同配比对小鼠Th1/Th2型细胞因子变化的影响

目的通过注射甲乙肝联合疫苗和单价甲肝、乙肝疫苗来观察小鼠在免疫过程中细胞因子的变化情况,衡量应答的性质,探讨两种抗原对小鼠细胞因子变化的不同作用以及乙肝抗原对甲肝抗原的作用。方法选用150只Balb/c小鼠随机分成注射联苗640Eu/mL:10μg/mL组、640Eu/mL:20μg/mL组、单价甲肝抗原640Eu/mL组、单价乙肝抗原10μg/mL组、单价乙肝抗原20μg/mL组和佐剂AL(OH)3对照组,每组25只。于第4周加强免疫1次,分别在初次免疫注射后第1、2、3、4周及加强免疫后第2周,眼眶采血,分离血清,每组各5只小鼠,上流式细胞仪检测小鼠血清5种细胞因子(TNF、IFN-γ、IL-5、IL-4、IL-2)含量。结果疫苗诱导产生的Th1/Th2型细胞因子均随时间的变化而变化,5种细胞因子均约在第3周达最大值,其中小鼠产生最多的是TNF;加强免疫后,640Eu/mL:20μg/mL联苗组刺激小鼠产生细胞因子水平高于640Eu/mL:10μg/mL联苗组。结论甲乙肝联合疫苗能刺激机体产生特异性细胞免疫应答,甲乙肝联合疫苗能诱导机体产生与单价相同或略强的Th1/Th2型细胞因子。

东亚群体中高血压GWAS阳性9个SNP在中国傣族及蒙古族群体中的验证研究

目的为了验证GWAS研究发现的3个高血压一个基因的相关性。方法本研究选取了3个在东亚群体中被GWAS研究证实了与高血压发生相关的基因(AKAP13,ENPEP和CNNM2)上的9个SNP,在傣族和蒙古族群体中进行验证。对这9个SNPs用SNaPshot的方法在774例傣族群体和409例蒙古族群体中进行了分型,排布单倍型并进行了统计学分析。结果发现统计学上无法证明这9个SNPs与高血压相关。但是在ENPEP基因的一连锁区段中,rs1126483在傣族群体中呈现与收缩压升高弱阳性关联(χ2=4.53,P=0.033)。同时rs3796889在蒙古族群体中也与收缩压的升高呈现弱阳性关联(χ2=4.35,P=0.037)。虽然这一阳性在进行统计学矫正后消失。结论本研究同时在起源不同,生活环境均差异较大的两个群体中均观察到ENPEP基因这一区段与高血压的关联,这也许暗示了此基因确实可能与高血压发生相关。另一方面本研究的阴性结果,也暗示了中国一些相对封闭的群体可能具有更窄的高血压遗传变异谱。

云南彝族中人群补体受体Ⅰ型基因遗传多态性研究

目的探讨补体受体Ⅰ型(CR1)基因多态性在云南彝族人群中的分布特点并比较不同人群间的差异。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA测序技术检测216例云南彝族样本中CR1基因的Exon22(rs2274567),Intron27(rs11118133)和Exon33(rs3811381)多态性位点的基因型,并与千人基因组计划中的人群数据进行比较。结果云南彝族人群中CR1基因Exon22、Intron27、Exon33这3个多态性位点的主要基因型和频率分别为AG41.2%,AA56.9%,CG47.7%。云南彝族与国内外各人群比较:在国内外人群的3位点分布频率数据中,北京汉和非洲人、欧洲人是以非突变基因型(Exon22为AA,Intron27为AA,Exon33为CC)为主,而南方汉、傣族和印度人以突变基因型(Exon22为AG+GG,Intron27为AT+TT,Exon33为CG+GG)为主。彝族的3个多态性位点中,突变率依次递增为Intron27、Exon22、Exon33,Intron27、Exon22位点基因型分布频率与南方汉比较无统计学差异(P分别为0.274、0.177),Exon33与傣族、印度人无差异(P分别为0.409,0.475)。单倍型以AAG、GTG为主。结论云南彝族CR1基因Exon22、Intron27和Exon33存在多态性,三位点分布频率基因型分布频率提示彝族与南方汉、西双版纳傣族、印度人有更近的亲缘关系,单倍型分布具有自身特点,可能与疟疾自然选择压力、种族基因差异等相关,对红细胞相关免疫性疾病的群体分布研究有重要意义。

DNA池焦磷酸测序法在病例-对照关联研究中的应用

目的探讨DNA池结合焦磷酸测序技术(DNA pooling and pyrosequencing,DNA pooling-PSQ)在病例-对照关联性研究中的适用性。方法利用前期获取的傣族高血压病例与健康对照样本及基因分型结果,选取有序列复杂性及频率代表性的4个SNP位点,用DNA pooling-PSQ分别对由453例傣族高血压患者及488例傣族对照构建的DNA池进行等位基因频率测定,所得结果与用SNa Pshot逐一分型计数所得结果进行比较。结果 DNA pooling-PSQ法对于非复杂性的中高频率SNP位点等位基因频率估计较为准确,差值在0.9%-2.7%之间,所得关联分析结果与SNa Pshot法一致;但对于复杂SNP rs12046278及低频SNP rs11066280,所得频率与逐一分型法相差值较大,在11.2%-15.6%之间,位点的关联性结果也不一致。结论 DNA pooling-PSQ适用于中频和高频的非复杂性SNPs关联分析。

2019年昆明市手足口病病原学及其分子特征分析

目的了解2019年云南省昆明市手足口病的病原学及其分子特征,为手足口病防治提供一定参考依据。方法采用半巢式逆转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-pdy merase chain reaction,RT-PCR)方法对242份临床标本进行检测,对通用引物检测结果为阳性的PCR产物进行测序和生物信息学分析以鉴定其型别及分子特征。结果从收集到粪便样品242份中检出肠道病毒阳性166份,总阳性率为68.60%;共检测到8种肠道病毒A群病毒,其中柯萨奇病毒A6型(CV-A6,30.72%)和A4型(CV-A4,15.06%)为2个主要优势病原体,并分别属于D3和F基因型;另外,男性肠道病毒阳性率多于女性(P<0.05),且以<5岁为主。结论昆明地区存在多种肠道病毒感染或流行,且CV-A6和CV-A4为HFMD的主要病原并同属于中国流行株。