Secoemestrin C抗肝癌作用机制研究

目的 通过验证secoemestrin C(Sec C)对肝癌细胞增殖的影响,观察细胞内脂质过氧化水平,检测内质网应激(ERS)相关信号通路变化,进而揭示SecC在抑制肝癌增殖过程中的作用机制,为针对肝癌的药物研发提供新的思路。方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和平板克隆法测定Sec C对Hep G2和BEL7404细胞增殖的影响;流式细胞术测定SecC对肝癌细胞脂质过氧化和凋亡的影响;Westernblot法探究SecC对肝癌细胞内质网应激和细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 SecC以剂量依赖性方式抑制Hep G2和BEL7404细胞增殖,IC50分别为1.556和3.489μmol/L;平板克隆实验结果显示,1μmol/L Sec C处理7 d后,肝癌细胞的克隆数目和大小显著降低,表明SecC显著抑制肝癌细胞增殖且呈现浓度依赖。流式结果显示,与对照相比,Sec C处理后,Bodipy的阳性率增加且呈现浓度依赖,表明SecC促进肝癌细胞内脂质过氧化,且流式结果显示SecC以剂量依赖性的方式诱导肝癌细胞凋亡。Western blot结果表明,SecC会引起内质网应激相关蛋白免疫球蛋白结合蛋白、1型内质网转膜蛋白激酶、活化转录因子4和磷酸化的真核生物起始因子2表达增多,其作用呈现浓度依赖性;同时Western blot结果显示,凋亡相关蛋白多聚腺嘌呤二核苷酸核糖聚合酶的表达显著降低,以及凋亡剪切产物聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶7的表达显著增多,其作用呈现浓度依赖性。结论 Sec C能够显著抑制肝癌细胞的增殖,其作用机制可能通过诱导细胞内质网应激导致细胞凋亡。

肿瘤靶向治疗抗体药物的研究进展

近年来,随着人类对癌症的细胞生物学和遗传学方面的认识达到分子生物学水平,新的治疗理念和方法被不断的提出,其中关于肿瘤的分子靶向性治疗药物的研发与应用受到了广泛的关注。抗体药物以其靶向性强,副作用小,疗效显著等优点,迅速成为了肿瘤靶向治疗领域中的热点药物。目前已有20多种抗肿瘤抗体药物经过批准应用于临床,并取得了显著的疗效。本文总结了靶向肿瘤的单克隆抗体药物的发展历程和现状,及其抗肿瘤作用的机制。同时总结了单抗药物在肿瘤研究领域中取得的新进展,并对其应用前景以及存在的不足做了概述。

新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯的体内外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的评价新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯(ODE-TFV)在体外及体内的抗乙型肝炎病毒的活性并研究其改善肝脏病理的作用。方法分别以乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞和DHBV感染的1日龄北京鸭为体外和体内模型,评价ODE-TFV抑制乙型肝炎病毒复制的活性。结果 2.2.15细胞培养法实验结果显示,ODE-TFV抑制HBV DNA复制的IC50值为(0.38±0.18)μmol/L,抑制活性较阳性药TFV-DF和3TC分别强约18倍和13倍;ODE-TFV 100mg/kg和200mg/kg组,在给药7d和停药3d显示有显著性的DHBV-DNA抑制活性(P<0.01、P<0.05);在鸭体内模型中,ODE-TFV 100mg/kg和200mg/kg能够明显改善DHBV引起的肝细胞坏死和炎细胞浸润,有一定量效关系。结论 ODE-TFV不仅在2.2.15细胞内对HBV-DNA有抑制活性,而且能有效地抑制鸭体内DHBV-DNA的复制,并具有改善肝脏病理的作用。

抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究

目的探讨抗明胶酶单链抗体Fv与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压C4柱制备LDM发色团AE,体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP中,Superdex 75层析获得Fv-LDP-AE。反相HPLC测定纯度或相对含量。流式细胞术测定DNA含量;采用SA-β-gal染色、Western blot和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响;通过动物模型评价药物疗效。结果 Fv-LDP-AE承袭了LDM诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点,并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE诱导凋亡和抑制迁移依次与caspases通路激活和MMP-2降调节有关。Fv-LDP-AE可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长,抑制率分别可达到86.6%和82.5%。结论 Fv-LDP-AE对小鼠和裸鼠移植瘤有效,可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。

下调G3BP对抑制肿瘤细胞迁移能力的研究

目的探讨利用siRNA和靶向G3BP的多肽药物下调G3BP后对多种肿瘤细胞迁移能力的影响。方法采用人纤维肉瘤HT1080细胞、乳腺癌MCF-7细胞以及人非小细胞肺癌H1299细胞,应用siRNA特异性干扰G3BP后,通过划痕实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响;用多肽药物GAP161作用于肿瘤细胞后,利用划痕实验以及Transwell迁移实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响;在MCF-7细胞中高表达G3BP1,在MDA-MB-231细胞中用siRNA下调G3BP1后,采用人全基因芯片分析G3BP1高表达和低表达后的基因表达谱,并进行信号通路分析。结果 siRNA特异性下敲G3BP1和G3BP2后,HT1080、MCF-7和H1299细胞的迁移能力显著降低。利用靶向G3BP的特异性多肽药物GAP161作用于多种肿瘤细胞后,肿瘤细胞的迁移能力显著下调。全基因组芯片分析表明:多个基因同时在G3BP1高表达和低表达组中发生变化,该变化与细胞迁移相关的细胞黏附、整合素、MAPK等信号通路有关。结论 G3BP下调后能够显著降低肿瘤细胞的迁移能力。靶向G3BP的多肽药物具有显著抑制肿瘤细胞迁移的作用。下调或者高表达G3BP后可通过下调或者上调多种与细胞黏附、整合素、MAPK等信号通路相关基因发挥作用。

EGFR在肿瘤靶向治疗中的研究进展

细胞信号传导是复杂生物信号传递系统的一部分,控制并协调细胞的基本活动。细胞接受信号并作出反应的能力是组织发育、修复、免疫应答及维持正常稳态的基础。其中,细胞因子受体参与信号转导是信号传导途径的重要组成部分。受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine cytokines,RTKs)是一类重要的细胞表面受体。RTK在控制大多数基本细胞过程中发挥重要作用,如细胞周期、细胞迁移、细胞代谢、细胞增殖和分化及细胞存活[1]。

乌苯美司抗肿瘤作用研究进展

乌苯美司（ubenimex）商品名为百士欣（Bestatin），是细胞表面氮基肽酶N/CD13（aminopeptidase N/CD13，APN/CD13）、氮基肽酶B的抑制剂，主要通过调节机体免疫功能及诱导肿瘤细胞凋亡等发挥抗肿瘤作用。本文就乌苯美司来源及特点、药代动力学特性、抗肿瘤作用及联合用药研究进展作一简要综述。

HER3与肿瘤及肿瘤耐药的关系研究进展

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）家族属于受体酪氨酸激酶,包括4种I型跨膜受体：EGFR（HER1）、HER2（Neu,ERBB2）、HER3（ERBB3）和HER4（ERBB4）。这些受体均包含细胞外区、跨膜区和胞内区3个部分,其中细胞外区包含4个结构域,胞内区包含1个用来信号传导的细胞内酪氨酸激酶结构域和1个位于胞浆内的带有酪氨酸磷酸化残基的尾部。

Secoemestrin C抑制肺腺癌细胞增殖和诱导凋亡的作用机制研究

目的通过检测Secoemestrin C(Sec C)对肺腺癌细胞增殖的影响,观察内质网应激相关基因及细胞信号通路的变化,揭示Sec C在抑制肺腺癌增殖过程的作用机制,为肺腺癌治疗药物的开发提供新的思路。方法以不同浓度梯度的Sec C处理肺腺癌A549和H1299细胞,观察细胞的形态学变化和生长增殖情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和平板克隆实验测定Sec C对A549和H1299细胞增殖的影响;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测法测定Sec C对A549和H1299细胞DNA复制的影响;Western blot法探究Sec C对A549和H1299细胞内质网应激和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果光镜下观察发现Sec C对A549和H1299具有杀伤作用,IC_(50)分别为2.164和2.341μmol/L;克隆形成实验结果表明Sec C能够抑制A549和H1299细胞的增殖能力,且呈浓度依赖;EdU实验结果证明Sec C能够显著抑制DNA复制。Western blot结果表明,Sec C会引起内质网应激相关蛋白免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、活化转录因子4(ATF4)、磷酸化的真核生物起始因子2(p-eIF2)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1α)表达增多,其作用呈时间和浓度依赖性;Sec C可诱导细胞凋亡,使半胱氨酸天冬氨酸酶3(caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸酶7(caspase7)、多聚腺嘌呤二核苷酸核糖聚合(PARP)的表达显著降低,以及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶7(cleaved-caspase7)、凋亡剪切产物聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)的表达显著增多,其作用呈时间和浓度依赖性。结论Sec C能明显抑制肺腺癌细胞的增殖活性,其作用机制可能通过内质网应激诱导细胞凋亡。

基于抗体和配体的肿瘤靶向肽药物研究进展

过去的二十年，肿瘤治疗已经从非特异性的化疗向具有选择性的基于发病机制的疗法转变[1]。分子靶向治疗作为肿瘤治疗的新手段，正以其疗效高、不良反应少且轻等特点而备受瞩目，现已成为肿瘤治疗领域的研究热点。它以肿瘤微环境、肿瘤细胞细胞膜或细胞内特异性表达或高表达的分子为作用靶点，能够更加特异地作用于肿瘤细胞，阻断其恶性增殖、转移或诱导其凋亡，同时降低了对正常细胞的杀伤作用，因此是十分有前途的肿瘤治疗方法之一[2]。

脂肪组织微环境对肿瘤生物学的影响

哺乳动物具有白色、棕色和米色脂肪组织,分布于体内的不同位置,由不同类型的脂肪细胞组成,具有独特的功能,对机体的新陈代谢至关重要。脂肪组织主要由脂肪细胞组成,此外还具有其他基质和血管成分,包括周细胞、内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、多能干细胞和一些免疫细胞,其确切组成比例随性别、年龄、体内分布部位、健康状况等因素不同而存在差异[1]。白色脂肪细胞以单个大脂质滴为特征,分化的白色脂肪细胞可储存及动员脂质,维持能量稳态;棕色脂肪细胞内含多个较小的脂质滴和线粒体,可氧化脂质通过解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)产生热量;米色脂肪细胞UCP1基础表达低并于寒冷环境或β-肾上腺素刺激下增加UCP1表达[2]。最初,人们认为脂肪组织的功能是以三酰基甘油的形式储存脂类,并在机体需要时在激素调节下以游离脂肪酸的形式将其释放。然而1994年瘦素的发现揭示脂肪组织是具有调节能量代谢及稳态的内分泌器官。

基于生物信息学分析YOD1基因在胰腺癌中的作用

目的通过TCGA数据库中胰腺癌的RNAseq,分析YOD1作为胰腺癌预后标志物的潜力及其对肿瘤免疫的影响,为胰腺癌的诊断及预后研究提供参考。方法通过TCGA数据获得RNA数据集;利用R survminer包对数据可视化,survival包分析YOD1对胰腺癌生存期的影响,对于TCGA和GTEx的TPM格式的RNAseq数据,利用ggplot2包可视化数据,pROC包对数据进行分析并绘制ROC曲线;使用linkedomics在线网站对差异基因进行GO和KEGG分析。通过miRWalk、TargetScan、miRDB、miRtarBase共同分析可能调节YOD1表达的miRNA。采用R-project中的GSVA包对数据进行可视化处理,采用免疫浸润算法ssGSEA分析YOD1对免疫细胞的影响;利用TIMER2.0在线数据库分析YOD1对免疫细胞浸润的影响。通过EdU和transwell实验验证YOD1对胰腺腺癌细胞增殖和迁移的影响。通过MTT实验验证YOD1对巨噬细胞增殖的影响。通过Western blot实验验证YOD1对巨噬细胞极化的影响。结果差异分析发现YOD1在胰腺癌中高表达;YOD1高表达患者的总生存期(P=0.028,HR=1.59)和无病生存期(P=0.036,HR=1.52)明显低于YOD1低表达患者;ROC曲线证明YOD1具有成为胰腺癌诊断标志的潜力(AUC=0.953,95%CI=0.931~0.975);通过不同网站预测发现,存在31种miRNAs对YOD1的表达起负性调控作用。KEGG富集分析发现,上述31种miRNAs主要富集在影响癌症进展、p53信号通路和胰腺癌进展;PPI网络分析,预测YOD1主要与VCP、UBC、UBB、UBP4、RPS27A、UBXN6、UFD1L、NPLOC4、FAF2、PLAA发生蛋白-蛋白相互作用;免疫相关分析发现YOD1与Th2免疫细胞在PAAD组织的浸润呈正相关(P<0.05),与TFH细胞的浸润呈负相关(P<0.05);体外实验验证YOD1能够促进胰腺癌细胞迁移、增殖,抑制巨噬细胞的增殖并逆转巨噬细胞由M2型向M1型极化。结论YOD1作为一种去泛素酶,可能通过影响肿瘤微环境来促进胰腺腺癌的发生发展,进而影响胰腺腺癌患者的预后。YOD1有潜力成为胰腺癌诊断和治疗的分子标志物。

过表达Tribbles同源蛋白3促进成纤维细胞分泌I型胶原的研究

目的探讨过表达Tribbles同源蛋白3对小鼠成纤维细胞3T3-NIH分泌胶原的影响。方法使用腺病毒载体过量表达Tribbles同源蛋白3,使用PCR以及Western blot方法检测Tribbles同源蛋白3的过量表达情况,使用天狼猩红染色试剂盒以及Western blot检测胶原的表达。结果使用过量表达Tribbles同源蛋白3的腺病毒载体可以增加成纤维细胞3T3-NIH中Tribbles同源蛋白3的转录水平以及蛋白水平的表达,并增加3T3-NIH细胞中I型胶原的蛋白表达水平,降低III型胶原的蛋白表达水平。结论过量表达Tribbles同源蛋白3可以促进小鼠成纤维细胞I型胶原的表达与分泌。

表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌细胞Eca-109的作用研究

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌Eca-109的作用。方法采用MTT法检测化合物对肿瘤细胞增殖的影响;采用克隆形成法检测EGCG对肿瘤细胞克隆形成的影响;采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞凋亡的影响;采用动物实验评价药物或EGCG对移植于裸鼠的移植瘤的生长抑制作用;同时采用免疫组化的方法检测药物或EGCG对血管形成的影响。结果 EGCG能够剂量依赖性地抑制Eca-109细胞增殖,其IC50值为43.22μmol/L。经克隆形成法检测结果表明,EGCG能够明显抑制Eca-109细胞的克隆形成,IC50值为28.49μmol/L。EGCG能够显著引起Eca-109细胞凋亡,60和80μmol/L EGCG诱导的凋亡百分率分别为(21.70±0.62)%、(57.13±9.09)%。EGCG和西妥昔单抗联用对Eca-109细胞的增殖抑制作用较单独用药组强,具有相加作用。体内实验结果表明,EGCG和西妥昔单抗均能抑制Eca-109裸鼠移植瘤的生长,两者联用存在增强作用。EGCG和西妥昔单抗均能抑制裸鼠移植瘤的血管形成,两者联用血管形成抑制作用较单用组更强。结论 EGCG能够抑制食管癌Eca-109的细胞增殖和克隆形成,具有诱导Eca-109细胞凋亡作用,与西妥昔单抗联用在体内外均具有增强作用。

抗体药物偶联物研究进展

近年来抗肿瘤抗体药物在基础研发、临床应用等方面都得到了快速发展。但现有抗体药物单独使用抗肿瘤疗效有限，临床上多与化疗药物联合应用，且多数初始接受抗体治疗有效的患者易产生耐药。抗体药物偶联物（antibody drug conjugates，ADCs）在提高抗体药物的治疗效果、克服耐药和充分利用抗体靶向性方面具有独特优势。目前，ADCs 俨然已成为新型抗肿瘤抗体药物研发的重点。本文拟对现有ADCs 研究现状作一简要概述。

抗CD30抗体药物研究进展

CD30是肿瘤坏死因子受体超家族（tumor necrosis factor receptor superfamily，TNFRSF）成员之一，属于 I 型跨膜糖蛋白，过表达于霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma， HL）和间变性大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphomas， ALCL），低表达于非病理状态下活化的 T 细胞、B 细胞表面，而正常细胞不表达[1]。早期研究表明，CD30参与细胞活化和分化，NF-κB 等信号的传导以及 T 细胞免疫激活等[2]。目前的研究证实 CD30与细胞的增殖和死亡密切相关[3]，其胞内部分可与 TNFR 相关因子（TNFR associated factor，TRAF）家族多个成员相互作用，既能通过 JNK 和p38途径介导细胞的凋亡，又能通过 NF-κB 途径介导细胞的活化[4-5]。CD30激活后其胞外部分很快被蛋白酶降解，形成可溶性的 sCD30。正常情况下人体血清中的 sCD30含量很低，但在许多病理状态下，sCD30水平会明显升高，可作为疾病诊断的指标。由于 sCD30在 HL 和 ALCL 患者血清中的含量升高，因此可作为肿瘤标志物[6]。

双靶向配体化力达霉素DTLL的制备优化和稳定性研究

目的通过对具有高效抗肿瘤活性的类抗体偶联药物—--双靶向配体化力达霉素(DTLL)制备过程的优化,获得纯度高和活性强的DTLL产品;探讨影响DTLL稳定性的主要因素,为临床申报和工业化生产提供依据。方法分别对DTLL前体(DTLP)蛋白表达载体、宿主菌株、表达温度、诱导剂终浓度、菌体密度和诱导时间进行优化。以高压破碎法提取可溶性目的蛋白,采用Ni+亲和与分子筛层析两步纯化,得到高纯度DTLP,再与力达霉素发色团组装获得DTLL。采用HPLC、MTS、ELISA法进行稳定性试验,分别监测DTLL冻干样品的蛋白纯度、发色团含量、细胞毒和亲和力活性的变化。结果经过发酵提取工艺优化,每升发酵液所得DTLP蛋白约为22 mg,是优化前每升9 mg的2.4倍,其蛋白纯度达到99.7%;DTLL组装效率达到68%;稳定性试验结果显示,DTLL冻干样品对光照敏感,在–80℃低温避光环境下可稳定保存。结论成功优化了双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺,提升了产品纯度和产率,为其后续生产和临床申报提供了实验基础,也为其他抗体偶联药物的制备提供了较成熟完善的技术平台。

多发性骨髓瘤治疗药物的研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种克隆浆细胞异常增殖的恶性肿瘤[1],典型临床表现为"CRAB"症状——血钙增高(calciumelevation)、肾功能损害(renal insufficiency)、贫血(anemia)、骨病(bonedisease)以及继发淀粉样变性等。M蛋白是由浆细胞或B淋巴细胞大量增殖而产生的一种异常的免疫球蛋白,常见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性淋巴瘤患者的血液或尿液中。

视网膜母细胞瘤的治疗、基因组学和表观基因组学研究进展

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)是一种好发于婴幼儿的最常见的眼内恶性肿瘤,严重危害患儿的视力、眼球甚至生命。我国的RB患儿多为高风险晚期,多数患儿不得已采用眼球摘除术,严重影响日后生存质量。RB是第一个发现的与基因改变有关的疾病,视网膜母细胞瘤基因1(RB1)及其等位基因的失活是RB发病的首要原因。近年来研究表明,RB的发生发展与基因组及表观基因组均有很大的关系。现对RB治疗概况及其基因组学、表观基因组学研究进展做一综述。

坏死性凋亡与肿瘤治疗

在多细胞生物个体中,细胞增殖和死亡之间的动态平衡是维持生物体内环境稳态的必要条件,也是生物体生长发育的重要条件之一。当体内细胞过度增殖或细胞正常死亡受到抑制时,恶性肿瘤的发生率大大增加。因此,有研究者认为,恶性肿瘤的两大显著特征为细胞无限增殖和死亡抑制[1]。在传统意义上,人们将细胞的死亡分为调控型和非调控型两类。然而,近年来研究发现,细胞坏死也可以像细胞凋亡一样受到遗传物质的调控,这是一种新型的细胞死亡机制。因其由基因控制但细胞形态表现为细胞坏死,所以又称为坏死性凋亡,并且其调控过程不经含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)介导。大量的研究证明,坏死性凋亡或程序性坏死在恶性肿瘤的发生、发展、侵袭、转移以及耐药中发挥着重要的作用。本文将对坏死性凋亡机制及其有别于凋亡、坏死等的特点,在肿瘤治疗中的潜在应用等做简单阐述,以期为肿瘤治疗提供新靶点、新思路。