小鼠胚胎成纤维细胞内质网应激反应中的长链非编码RNA表达谱及生物信息学研究

目的探究内质网应激反应也称为未折叠蛋白效应(unfolded protein response,UPR)激活后小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)表达谱。方法分离13天的小鼠胚胎获得并培养MEFs,采用内质网应激反应诱导剂衣霉素(tunicamycin)处理细胞16h后发生UPR;以未处理的MEFs作为阴性对照,采用基因芯片技术检测lncRNA表达谱,实时荧光定量PCR(real-time PCR)验证lncRNA芯片结果并进行生物信息学分析。结果与未使用衣霉素处理的MEFs相比,衣霉素处理的MEFs有411个lncRNAs表达量出现显著上调,790个lncRNAs出现显著下调;实时荧光定量PCR验证部分lncRNAs表达结果与芯片一致;高级生物信息学分析分析了显著变化的lncRNAs并提示它们可能参与了细胞内许多生物学过程的调控。结论 lncRNA表达谱及生物信息学分析提示lncRNA在UPR激活后的细胞功能中可能发挥重要作用。

自噬现象在肝纤维化和肝切除时的表现形式

目的了解肝纤维化和肝切除时同肝脏再生并行的自噬现象的表现和差别。方法雄性Wistar大鼠随机分成对照组、肝纤维化组和肝切除组;采用四氯化碳复合法制作肝纤维化大鼠模型,病理证实肝纤维化后,于诱导的第5周取材;采用改良70%肝切除法制作大鼠肝切除模型,于术后18 h取材。观察大鼠一般状况,定量比较血清肝功能指标的变化,用光镜、透射电镜观察肝细胞形态学改变及肝脏再生差别;利用透射电镜数据定量分析自噬现象的变化。结果肝纤维化组血清总蛋白、白蛋白较对照组显著降低（P〈0.01）,增殖细胞核抗原（PCNA）指数为85%-95%,自噬现象指数较对照组下降19%（P〈0.05）;肝切除组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶较对照组显著升高（P〈0.01）,PCNA指数为20%-30%,自噬现象指数较对照组下降95%（P〈0.01）;肝纤维化组和肝切除组自噬体内容物及形态发生显著改变。结论自噬现象在肝切除和肝纤维化代偿过程中均有不同程度的削弱,但二者表现形式不同,进一步对自噬现象的调节有可能促进和帮助术后剩余肝脏功能的恢复。

针对于白蛋白的新型核酸适配体的筛选与鉴定

目的研发能特异结合白蛋白的DNA核酸适配体,为去除实验样品中的白蛋白提供新型技术手段。方法体外合成全长为59个碱基并含有21个随机寡核苷酸的单链DNA文库,以白蛋白为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从单链DNA文库中筛选能特异结合白蛋白的核酸适配体;用流式细胞计量术来检测核酸适配体的富集程度、适配体与白蛋白的结合特性;用MFold软件预测其二级结构。结果经过多轮筛选得到了能特异识别白蛋白的DNA核酸适配体A6,其Kd值为77.4 nmol/L,且基本不结合卵清蛋白、免疫球蛋白Ig G等对照蛋白。结论针对于白蛋白的DNA核酸适配体A6能选择性识别白蛋白,在去除实验样品中的白蛋白方面具有应用潜能。

代谢综合征患者尿蛋白质组的建立及差异蛋白功能分析

目的建立代谢综合征（MetS）患者尿液蛋白质组表达谱，对比MetS与正常人尿液差异蛋白，分析差异蛋白功能，以探讨MetS发病机制。方法收集正常人和MetS患者过夜尿，丙酮沉淀法富集蛋白，将蛋白进行组内混合，反相液相色谱串联质谱鉴定蛋白，谱图数定量法定量蛋白，基因本体论分析方法进行差异蛋白功能分析。结果正常人和MetS患者共鉴定到807和630个蛋白。MetS患者相比正常人上调蛋白有23个，其中纤溶酶原参与纤溶酶原激活连锁反应；37个下调蛋白中，仅．烯醇酶、磷酸甘油激酶1和果糖二磷酸醛缩酶B分别参与糖酵解和果糖代谢过程。结论建立了MetS患者尿蛋白质组表达谱，鉴定了MetS患者尿液差异蛋白。发现纤溶酶原激活连锁反应、糖酵解、果糖代谢异常可能在MetS发生发展过程中发挥重要作用。

空气颗粒物和香烟烟雾提取物对人气道上皮及巨噬细胞的影响

目的探讨空气颗粒物(PM)及香烟烟雾提取物(CSE)对人肺泡上皮细胞(A549细胞)和单核细胞(THP-1细胞)源性巨噬细胞功能的影响。方法采用不同浓度的PM与CSE单独或叠加体外刺激A549细胞和THP-1细胞,应用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达,实时聚合酶链式反应检测巨噬细胞极化标志物,免疫蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达。结果与空白对照组比较,0.5%CSE、50 mg/LPM单独刺激即可抑制A549细胞增殖;二者叠加刺激后,较CSE单独刺激组能够进一步抑制该细胞增殖活性,促进细胞凋亡;同时,在CSE存在时,PM可进一步促进A549细胞和THP-1细胞产生的炎症因子白细胞介素6及白细胞介素1β。PM单独或与CSE叠加均可降低A549细胞表达occludin。实时聚合酶链式反应结果显示,CSE与PM叠加进一步促进THP-1细胞表达CD80 mRNA。结论PM能够进一步加重CSE暴露所导致的气道上皮抑制增殖、促进凋亡、炎症及巨噬细胞向M1型极化。