血管紧张素Ⅱ通过诱导自噬促进血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖迁移过程中自噬的作用。方法体外培养小鼠原代主动脉平滑肌细胞,采用AngⅡ(10^(-7)mol/L)刺激VSMCs 24 h,免疫印迹法检测细胞自噬标志物LC3B、P62的表达。荧光显微镜下观察并统计对照组、AngⅡ组的自噬小体和自噬溶酶体的数量,探究AngⅡ对VSMCs自噬的影响。通过EdU增殖实验和划痕实验,检测AngⅡ刺激后VSMCs增殖和迁移的变化情况。使用自噬抑制剂3-MA(10 mmol/L)干预后,使用Western blot和mCherry-GFP-LC3双荧光指示系统观察检测LC3Ⅱ、P62表达变化和自噬体、自噬溶酶体的数量变化,确认自噬受到抑制。通过EdU增殖实验和划痕实验,检测3-MA对AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移的影响。结果与对照组相比,AngⅡ显著增加LC3Ⅱ表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,显著减少P62表达,且显著增加自噬体和自噬溶酶体的数量,说明AngⅡ可诱导VSMCs自噬发生。AngⅡ还可显著增加EdU阳性细胞数及VSMCs的迁移距离,表明AngⅡ可促进VSMCs迁移和增殖。与AngⅡ组相比,3-MA可显著增加P62的表达,减少LC3Ⅱ表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值以及自噬体和自噬溶酶体的数量,抑制自噬的发生;同时3-MA还可显著减少EdU阳性细胞数及VSMCs的迁移距离,抑制VSMCs的增殖和迁移。结论AngⅡ可通过诱导自噬发生,促进VSMCs的增殖和迁移。