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间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析
1
作者
尹艳爽
李秀
+3 位作者
杨志岗
马世泽
曹焱
肖苒
《中华整形外科杂志》
CSCD
2023年第9期1003-1009,共7页
目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型,并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交,获得子代小鼠,饲养1~2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及...
目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型,并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交,获得子代小鼠,饲养1~2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因,于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织,一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定,随后进行HE染色和Masson染色,在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析,组间比较采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果通过繁育获得间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠,基因型为Bicc1^(f/f)Cre+/-,野生型小鼠基因型为Bicc1^(f/f)Cre^(-/-);RT-qPCR检测结果显示,实验组小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤、脂肪组织中Bicc1 mRNA表达水平均显著低于对照组(P均<0.01);HE染色和Masson染色显示,与对照组相比,实验组小鼠肾小球萎缩,肾小囊形状不规则,部分肾小囊消失;骨骼肌纤维排列疏松散乱,肌纤维堆积不致密;皮肤及脂肪组织未见明显差别。结论成功建立了间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠模型,可以为研究Bicc1基因在组织器官间质细胞中的作用提供动物模型;3周龄小鼠间质细胞中敲除Bicc1后1周,其肾脏和骨骼肌发生病理性改变。
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关键词
小鼠
基因敲除
间质细胞
双尾C基因
条件性基因敲除
他莫昔芬
原文传递
题名
间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析
1
作者
尹艳爽
李秀
杨志岗
马世泽
曹焱
肖苒
机构
中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心、中国医学科学院体表组织器官再造研究重点实验室
中国医学科学院
北京协和医学院
整形
外科
医院
病理科
出处
《中华整形外科杂志》
CSCD
2023年第9期1003-1009,共7页
基金
国家自然科学基金(81873666)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2021-I2M-1-052)。
文摘
目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型,并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交,获得子代小鼠,饲养1~2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因,于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织,一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定,随后进行HE染色和Masson染色,在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析,组间比较采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果通过繁育获得间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠,基因型为Bicc1^(f/f)Cre+/-,野生型小鼠基因型为Bicc1^(f/f)Cre^(-/-);RT-qPCR检测结果显示,实验组小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤、脂肪组织中Bicc1 mRNA表达水平均显著低于对照组(P均<0.01);HE染色和Masson染色显示,与对照组相比,实验组小鼠肾小球萎缩,肾小囊形状不规则,部分肾小囊消失;骨骼肌纤维排列疏松散乱,肌纤维堆积不致密;皮肤及脂肪组织未见明显差别。结论成功建立了间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠模型,可以为研究Bicc1基因在组织器官间质细胞中的作用提供动物模型;3周龄小鼠间质细胞中敲除Bicc1后1周,其肾脏和骨骼肌发生病理性改变。
关键词
小鼠
基因敲除
间质细胞
双尾C基因
条件性基因敲除
他莫昔芬
Keywords
Mice,knockout
Stromal cells
Bicaudal-C gene
Conditional gene knockout
Tamoxifen
分类号
R-332 [医药卫生]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析
尹艳爽
李秀
杨志岗
马世泽
曹焱
肖苒
《中华整形外科杂志》
CSCD
2023
0
原文传递
已选择
0
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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