转入人肿瘤坏死因子α基因的鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性及其体内抗肿瘤药效学研究

目的测定转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因的鱼腥藻IB02(+)的抗肿瘤药效。方法在相同的培养条件下通过100L光生物反应器培养4组转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+),分别命名为批次1、2、3、4,经过反复冻融和真空冷冻干燥处理,得到转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品。采用结晶紫染色法检测转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品的细胞毒活性,并通过测定不同批次间的细胞毒活性差异检测其稳定性。采用转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因鱼腥藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制来测定体内抗肿瘤药效。结果转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性约为8000U/mg。4种不同批次的转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)细胞毒活性相当,hTNFα蛋白性质比较稳定。小鼠1次口服最大耐受量为16.0g/kg,在观察期内所有受试小鼠无一死亡,生长发育正常,主要脏器未见异常,未显示明显毒性。药效学研究表明,口服6g/kg转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制率平均值(37.7±3.4)%,最高值为41.5%(P<0.001)。结论转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)抗肿瘤作用明显,无明显的毒副作用且药效学性质稳定。

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

CD3AK细胞是用抗T细胞表而CD3分子的单克隆抗体激活的新型杀伤细胞，在肿瘤的免疫疗法中愈来愈受到重视。本文用抗CD3单克隆抗体(北医太免疫室提供)和rIL-2(日本盐野义制药株式会社产品)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，诱导CD3AK细胞，系统地研究了其生物特性及其体外抗肿瘤活性并与LAK细胞作比较。

Ets转录因子家族在发育和肿瘤发生中作用的研究进展

Ets转录因子家族包括30多个成员,具有复杂的结构和功能,通过调节细胞的增生、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用,在许多生理和病理过程中发挥重要的调控作用。Ets家族成员在发育过程中特异性时空表达与其对发育的调控作用密切相关,他从细胞、组织、器官不同的水平调控发育过程,特别是在血管发生和免疫系统的发生中发挥重要作用。此外,Ets在肿瘤的侵袭、转移和血管生成过程中发挥重要作用,主要与调节细胞外基质(ECM)酶的转录活性有关。Ets转录因子受多种信号通路的调控,MAP激酶(Erk,p38和JNK)、Ca^(2+)依赖的信号通路以及TGF-β。

RGD序列多肽与不同肿瘤细胞结合特性研究

目的:通过体外细胞和动物体内研究期望获得不同肿瘤细胞整合素αvβ3受体表达的资料,以指导临床研究。材料和方法:采用荧光显微镜检测FITC标记HYNIC-RGD对人胰腺癌、肝癌、肠癌和子宫颈癌细胞的结合;用99mTc-HYNIC-RGD在小鼠乳腺和肝癌动物模型上比较了肿瘤对99mTc-HYNIC-RGD的摄取。结果:体外研究表明胰腺癌和肝癌细胞对RGD结合明显高于肠癌和子宫颈癌。注射后3小时小鼠皮下接种的乳腺癌和肝癌肿瘤组织对99mTc-HYNIC-RGD的摄取达到高峰,乳腺癌对99mTc-HYNIC-RGD摄取高于肝癌40%以上。结论:体外研究表明胰腺癌和肝癌细胞均对RGD有高的摄取,活体小鼠动物模型研究表明乳腺癌对RGD具有高的摄取。

腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实转导效率达 10 0 % (MOI为 2 5) ,转导RA538基因后的GLC - 82肿瘤细胞生长受到明显的抑制 ,抑制率为 77 2 %。经流式细胞计数 (FCM)及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,凋亡率为 59 4%。利用Westernblot法检测转导了RA538基因GLC - 82肿瘤细胞中癌基因蛋白发现 ,c -myc基因蛋白表达下调。结果提示 :RA538作为抑癌基因将有可能应用于肿瘤基因治疗。

对“中国优生科学的建立”的补充资料

回忆了 2 0世纪 70年代末至 80年代初中国优生科学建立过程中的一些史实。

Id蛋白与肿瘤关系的研究进展

DNA结合和分化抑制剂(inhibitor of DNA binding and differentiation,Id)是螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子亚家族的一个成员,4个Id成员与碱性螺旋-环-螺旋(basichehx-loop-helix,bHLH)蛋白形成二聚体,但缺乏碱性DNA结合结构域,因此,Id-bHLH异源二聚体不能结合DNA,故Id蛋白是bHLH转录因子的显性负调节子.Id蛋白也能与非HLH蛋白相互作用,如Rb、Ets、同源盒家族转录因子Pax、小鼠Id相关蛋白1(MIDA-1),并抑制其活性.现已证实Id在肿瘤细胞中通常过表达,并且与肿瘤细胞增生、分化、凋亡、侵袭等密切相关.

HER-2/neu基因在肿瘤免疫治疗中的研究进展

原癌基因HER2 /neu是表皮生长因子受体家族中的一员 ,在多种人类恶性肿瘤中存在其扩增及过度表达 ,HER2 /neu的过表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2 /neu为靶点的抗肿瘤免疫治疗发展较快 ,在抗HER2 /neu抗体 (Herceptin) ,多肽疫苗 ,DNA疫苗等方面取得了很大进展。

单核苷酸多态性分析技术及其在肿瘤研究中的应用

单核苷酸多态性 (SNP)是第 3代遗传标记 ,由于其在基因组中分布的高密度性 ,被认为在多基因疾病的诊断及治疗方面有着广阔的应用前景。

牙龈卟啉单胞菌在消化系统肿瘤中的作用及机制研究

越来越多的证据表明牙周疾病是导致消化系统肿瘤的一个重要危险因素,而牙龈卟啉单胞菌(Pg)是引起牙周疾病及慢性牙周炎的关键病原体。大量研究表明,牙龈卟啉单胞菌除在口腔中具有局部作用外,还可能引发其他器官肿瘤,该细菌可能与胃和结肠的癌前病变、食管鳞状细胞癌、头颈部肿瘤和胰腺癌存在密切关系。本文重点总结了牙龈卟啉单胞菌和消化系统肿瘤之间的关系及相互作用机制的最新研究进展。

人肝癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及鉴定

目的:从人肝癌组织中分离培养肝癌干细胞样细胞,为进一步研究肝癌干细胞靶向治疗奠定基础。方法:采用酶消化法和以原代培养结合短暂传代培养的方法从人肝癌组织中分离出含人肝癌干细胞样细胞(human liver cancer stem-like cells,hLCSLCs)的连续传代细胞,分别加入肝素、白蛋白、氢化可的松以筛选适用于hLCSLCs的无血清悬浮成球培养基。以流式细胞术检测hLCSLCs和由无血清悬浮成球培养所获得的成球细胞中旁群(side population,SP)细胞、CD133及CD90等的表达,裸鼠成瘤实验检测这两种细胞的致瘤能力。结果:成功地从人肝癌组织分离获得hLCSLCs,其SP、CD133+和CD90+细胞含量分别为0.9%、0.8%和12.7%,裸鼠皮下接种2000个SP细胞的成瘤率为100%。含有肝素的无血清培养基更适于hLCSLCs的成球培养,所获成球细胞中SP、CD133+和CD90+细胞含量分别为4.6%、9.7%和48%,接种10000个成球细胞即可全部成瘤。结论:成功建立了从人肝癌组织中分离肿瘤干细胞样细胞的方法,添加肝素的无血清悬浮成球培养法可有效富集肝癌干细胞样细胞。

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的： 探讨Ａｓ２ Ｏ３ 对人肺腺癌ＧＬＣ８２ 细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制。方法：通过ＭＴＴ 还原法检测Ａｓ２ Ｏ３ 对该细胞系生长的影响；用光学显微镜、流式细胞仪、ＤＮＡ 凝胶电泳和细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ） 研究Ａｓ２Ｏ３ 诱导细胞凋亡的情况；用ＲＴＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 或Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析Ａｓ２ Ｏ３ 对ｃｍｙｃ、ｐ５３、ｐ１６ 和ｂｃｌＸ 等基因表达的影响。结果：Ａｓ２ Ｏ３ 能抑制ＧＬＣ８２ 细胞的生长。Ａｓ２ Ｏ３ 处理ＧＬＣ８２ 细胞后，光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞，细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰，ＤＮＡ 凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ 有规律断裂形成的梯状图谱，蛋白水平的检测表明Ａｓ２ Ｏ３ 可使细胞ｃｍｙｃ 基因表达下降，ｐ１６ 和ｐ５３ 表达升高。结论：Ａｓ２ Ｏ３ 能显著抑制ＧＬＣ８２ 细胞生长、诱导细胞凋亡，并主要通过调节ｃｍｙｃ，ｐ１６ 和ｐ５３ 等基因的表达来实现。

功能基因组学的研究内容与方法

基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学.综述了功能基因组学研究的内容和方法,主要包括应用微点阵、基因表达系列分析(SAGE)、蛋白质组、生物信息学等方法来研究基因组表达概况、基因组多样性。

细胞周期蛋白cyclin B1与肿瘤

细胞周期蛋白cyclin B1与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinases,CDKs)结合,受磷酸化、去磷酸化调节,所形成的活性复合物为MPF即细胞促分裂因子或M期促进因子,能转位入核,磷酸化其核内底物,促进细胞的G2/M期转变;并能通过磷酸化调节多种蛋白的活性与分布而参与纺锤体的形成和染色体的分离。cyclin B1在许多肿瘤中异常表达,呈现出癌基因的特性,cyclin B1过表达与定位的改变受p53、c-myc、H-Ras、Aurora A、Gadd45等多个基因的调节,而且与肿瘤发生发展、预后、诊断和治疗密切相关。

蛋白质泛素化降解途径与肿瘤发生的关系

泛素是在真核生物中普遍存在,具有很高的保守性的一种蛋白质.泛素化是细胞维持对那些受组成型调节和环境刺激产生的蛋白质水平的基本调节方式.泛素-蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质质控系统,参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化,以及信号传导等多种细胞生理过程,因此细胞内蛋白质泛素化降解是蛋白质重要的转录后修饰方式之一.泛素化底物及其随后的降解过程贯穿于整个细胞的质膜系统,从细胞膜、内质网到核膜等等.泛素化系统的作用位点主要位于细胞膜表面、内质网和细胞核.细胞泛素化与去泛素化过程的改变与肿瘤的发生密切相关.认识细胞内蛋白质泛素化降解过程,对治疗由泛素系统紊乱而引起的各种疾病,尤其是恶性肿瘤具有重要意义.

Gadd45a在抑制细胞转化和肿瘤恶性进展中的作用

Gadd45a,一个受p53和BRCA1调节的生长阻滞和DNA损伤基因,在抑制细胞转化和肿瘤恶性进展中扮演重要的角色.Gadd45a可以通过抑制细胞生长以及促进DNA损伤修复等间接或者直接方式维持基因组稳定性,从而抑制细胞转化和肿瘤的恶性进展.此外,Gadd45a还可通过对一些信号传导通路的调节,参与肿瘤发生发展的抑制.

不同单核细胞亚群来源树突状细胞的特性及其在肿瘤免疫治疗中的作用

树突状细胞由多种表型特征及生物学功能特性不同的亚群组成,单核细胞源性树突状细胞是其中的重要组成群体。近年来研究表明,人体内外周血单核细胞由CD14++CD16-和CD14+CD16+两个群体组成,小鼠体内则由CD115+Ly6Chigh和CD115+Ly6Clow组成;不同亚群单核细胞可发育分化成为具有不同表型特征的树突状细胞,在体内外诱导产生不同类型的免疫应答反应。小鼠体内CD115+Ly6Clow群体是机体稳定状态下外周组织器官树突状细胞的重要前体细胞,CD115+Ly6Chigh单核细胞是炎症状态下外周淋巴器官中树突状细胞的重要来源。CD115+Ly6Chigh来源的树突状细胞,一方面可以直接提呈外周摄取的抗原,另一方面还可将MHC-Ⅰ/抗原肽复合物传递给淋巴组织中原住性树突状细胞。不同来源树突状细胞间的协同和交互作用确保机体诱发针对不同外源抗原刺激的有效免疫应答。

pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用

目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效 应的差异,并用RT PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16mRNA水平。结果:质粒注入后接受20GyX射线 照射组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(P<0.05)。质粒注入量为20μg或30μg的 联合治疗组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(P<0.05)。单纯接种 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组和接种pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16mRNA表达,且 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组的p16mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组(P<0.05)。结 论:pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20 μg;pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射 激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。