功能差异细胞模型筛选抗肺癌功能性单克隆抗体及其抗原

目的:筛选获取抗肺癌细胞膜的功能性单克隆抗体及其靶抗原,为肺癌靶向治疗提供候选治疗剂及靶标。方法:将新鲜人肺癌组织细胞免疫BALB/c小鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单克隆抗体库。建立肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等定向功能差异细胞模型,采用活细胞免疫荧光与功能差异模型筛选其抗原在定向功能(细胞增殖、迁移、侵袭)差异模型细胞膜上差异表达的单抗,再经体外相应功能实验筛选具有抑制作用的功能性单抗,Western blotting鉴定这些单抗的抗原,裸鼠体内抑瘤实验鉴定部分单抗对肺癌的抑制作用。结果:细胞融合后共获得2 893株杂交瘤克隆,其中与肺癌细胞膜结合反应的309株。分别建立了3种体外肺癌细胞增殖、侵袭、迁移差异模型用于筛选,筛选获得20株单抗能显著抑制肺癌细胞增殖、10株单抗能显著抑制肺癌细胞侵袭、5株单抗能显著抑制肺癌细胞迁移(P<0.05或P<0.01)。Western blotting鉴定了其中6株的抗原。选取其中2株单抗均能在裸鼠体内显著抑制肺癌移植瘤的生长(P<0.05或P<0.01)。结论:采用大容量功能性单抗库技术结合功能差异细胞模型可批量筛选获得具有体内外抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,为筛选肺癌靶向治疗剂及靶标提供了一种潜在的新方法。

抑制胃癌增殖功能性单抗的制备、筛选及鉴定

目的:批量制备、筛选、鉴定抑制人胃癌细胞增殖的功能性单克隆抗体,为筛选获得与胃癌增殖相关的基因/蛋白奠定基础。方法:以人胃癌细胞系NCI-N87免疫BALB/c小鼠,经脾细胞融合后制备单抗,活细胞免疫荧光、免疫组化、细胞增殖实验、ELISA、Western blotting等方法筛选鉴定抑制胃癌生长的功能性单抗。结果:共获得1012株杂交瘤,252株能与胃癌细胞膜反应,145株与正常胃组织不反应或低反应。11株单抗在体外能够显著抑制N87的增殖。其中1株单抗1B7属IgMκ类,其识别的抗原的相对分子质量为32kDa。结论:成功获得了多株能够抑制胃癌细胞增殖的功能性单抗,其中1株单抗识别的抗原可能具有作为胃癌靶向治疗靶标的潜在应用价值。