人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂的高通量筛选

本研究拟建立体外人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂高通量筛选模型,用于PTP1B抑制剂的发现。利用大肠杆菌重组表达PTP1B,以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为特异性的底物,建立了基于酶反应速率的384孔微板为载体的PTP1B抑制剂高通量筛选模型(Z'=0.78)。选择24 240个样品进行筛选,对抑制率大于70%的80个样品作为活性样品进行复筛,最终确定6个具有较强的抑制活性的化合物J5753、J10550、J10551、J10583、J10585和J11101,其IC50值分别为21.58、18.39、15.37、11.92、37.27和36.61μg·mL-1。结果表明,所建立的PTP1B抑制剂高通量筛选模型具有快速、灵敏、稳定、重复性好的特点。

人源可溶性环氧化物水解酶抑制剂的高通量筛选

本研究拟建立体外人源可溶性环氧化物水解酶(hsEH)抑制剂高通量筛选模型,筛选hsEH抑制剂。利用大肠杆菌表达重组hsEH,化学合成其特异性的底物PHOME,建立了基于荧光测定的以384孔微板为载体的hsEH抑制剂高通量筛选模型(Z'=0.65)。对47 360种样品(包括25 040种化合物和22 320种天然产物)进行初筛,选择初筛抑制率大于80%的950种样品作为活性样品进行复筛。最终确定2个化合物具有较强的抑制活性,其IC50值分别为8.56和4.31μmol.L?1。结果表明,所建立的hsEH抑制剂高通量筛选模型具有灵敏、稳定、重复性好的特点。

仓鼠糜酶2抑制剂高通量筛选模型的建立及其应用

本研究拟建立重组仓鼠糜酶2(chymase 2)抑制剂的体外高通量筛选模型,寻找新型的糜酶2抑制剂。首先,利用大肠杆菌表达、制备成熟的重组仓鼠糜酶2蛋白,以384孔微板为媒介,建立基于荧光方法测定酶活性的抑制剂筛选模型,结果表明所建立的糜酶2抑制剂高通量筛选模型具有灵敏、稳定、重复性好的特点(Z'=0.84)。利用建立的模型对40 080种样品(包括28 060种化合物和12 020种天然产物提取物)进行抑制活性筛选,取抑制率大于90%的613种样品进行复筛。最终确定化合物J16647和J16648具有较强的抑制活性,其IC50值分别为0.823和0.690μmol.L?1。

槲皮素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用

目的观察槲皮素的舒血管作用并探讨其作用机制。方法采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察槲皮素对内皮完整和去除内皮血管的舒张作用。应用一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、钙激活钾通道阻滞剂四乙铵(TEA)、ATP敏感钾通道阻滞剂格列本脲和电压依赖钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)研究槲皮素舒张血管的作用机制。结果槲皮素(1、3、10、30、100、300μmol·L^(-1))能舒张由去甲肾上腺素(NE,1μmol·L^(-1))或KCl(80 mmol·L^(-1))预收缩的大鼠胸主动脉环。在内皮完整的血管环中,50μmol·L^(-1)和100μmol·L^(-1)的槲皮素预孵育后,能非竞争性地抑制NE或KCl对大鼠胸主动脉的收缩作用。去除内皮后槲皮素舒张血管的作用无显著改变(P>0.05)。L-NAME(100μmol·L^(-1))可明显抑制槲皮素的舒血管作用(P<0.05),而亚甲蓝(10μmol·L^(-1))和吲哚美辛(5μmol·^(-1))无明显抑制作用(P>0.05)。TEA(5 mmol·L^(-1))可使槲皮素舒张血管的作用显著降低,而格列本脲(10μmol·L^(-1))和4-AP(100μmol·L^(-1))无显著影响(P>0.05)。结论槲皮素舒张血管的作用可能不依赖于血管内皮功能,而是通过直接开放血管平滑肌细胞上钙激活的钾离子通道和阻滞钙离子通道发挥作用。