粗壮润楠化学成分及其活性研究

目的 研究粗壮润楠的化学成分,并对分离得到的化学成分进行生物活性筛选,为寻找新的生物活性成分、建立药材的质量标准奠定基础。方法 采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱色谱、Sephadex L^(-1)H-20柱色谱、反相中压柱色谱、闪式柱色谱以及反相HPL^(-1)C柱色谱分离等方法进行分离纯化;运用波谱数据分析鉴定化合物的结构。在细胞水平模型上,筛选化合物在神经保护、抗氧化、肿瘤细胞毒、肝保护和抗人类免疫缺陷病毒等方面的活性。结果 从粗壮润楠的乙酸乙酯部位共分离得到19个化合物,分别为α-芒柄花萜醇(1)、熊果酸(2)、白桦脂酸(3)、熊果醇(4)、8-(3,5-二羟基苯基)-1-丙基辛醇2,4-二羟基-6-十一烷基苯甲酸酯(5)、大黄素甲醚(6)、β-谷甾醇(7)、(+)-(7S,8R)-4-羟基-3,7-二甲氧基-1’,2’,3’,4’,5’,6’,7’-降七碳木脂烷-8’-酮(8)、(+)-去氢催吐萝芙木醇(9)、3-羟基-4-甲氧基苯丙烯酸乙酯(10)、4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸乙酯(11)、7-甲氧基香豆素(12)、5,7-二甲氧基-6-羟基香豆素(13)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸(14)、苯甲酸(15)、对羟基苯甲醛(16)、对羟基苯乙醇(17)、3,4-二羟基苯甲酸(18)和3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(19)。结论 化合物 1 和 5 为首次从樟科植物中分离得到,其余化合物均为首次从该植物中分离得到。化合物 9(10 μmol·L^(-1))对去血清诱导的PC12细胞损伤有保护作用,其相对保护率为(76.60±10.67)%。

生物发光共振能量转移技术在蛋白酶活性检测中的应用

生物发光共振能量转移（BRET）是20世纪中叶在海洋生物,例如维多利亚水母和软体珊瑚虫海肾中发现的一种自然现象[1],能量从生物发光蛋白如荧光素酶（供体）转移到荧光物质（受体）。在软体珊瑚虫海肾中海肾荧光素酶将腔肠素氧化,发出波长为480 nm的光,与近距离的海肾绿色荧光蛋白之间发生一个非辐射的能量转移,发出509 nm的光。

雌激素对小鼠胰岛素敏感性及脂肪因子的影响

目的探讨雌激素影响小鼠胰岛素敏感性的可能机制。方法采用随机数字表法,将36只6周龄C57BL/6J雌鼠随机分为正常饮食组(NOR)、正常饮食去卵巢组(NOR+OVX)、正常饮食去卵巢雌激素替代组(NOR+OVX+E2)、高脂饮食组(HF)、高脂饮食去卵巢组(HF+OVX)和高脂饮食去卵巢雌激素替代组(HF+OVX+E2)6组,每组6只。根据分组行去卵巢手术后,分别给予高脂或正常饮食20周,替代组给予雌激素20 d(5μg/d,皮下注射),比较各组小鼠体重、内脏脂肪量、糖耐量、胰岛素敏感性(高胰岛素正常葡萄糖钳夹试验)及血清瘦素、脂联素和抵抗素水平。结果 HF+OVX组小鼠的体重与内脏脂肪量明显高于HF组,糖耐量明显低于HF组,雌激素治疗后均得到显著改善(P均<0.05);正常饮食3组小鼠间的上述各指标差异均无统计学意义(P均>0.05)。高脂饮食和正常饮食去卵巢小鼠胰岛素敏感性均显著降低,雌激素治疗后均得到明显改善(P均<0.05)。去卵巢小鼠血清瘦素升高及脂联素降低具有显著性,雌激素治疗后瘦素降低及脂联素升高也均有显著性(P均<0.05)。各组小鼠的抵抗素水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论雌激素治疗可以通过减轻体重改善胰岛素抵抗,还能直接作用于脂肪组织,影响脂肪因子水平,减少内脏脂肪量,改善胰岛素敏感性。

转肽酶A在蛋白质和多肽修饰中的应用

在20世纪90年代末,Navarre和Schneewind首次在金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）中发现了转肽酶A（sortase A）,它催化了表面蛋白与多种革兰阳性菌的肽聚糖骨架的共价结合,从而开启了转肽酶A对蛋白质或多肽作用的研究。

独蒜兰中丁二酸苄酯苷类化学成分的研究

应用反相硅胶ODS、大孔树脂、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20和HPLC等多种色谱分离技术,从中药山慈菇来源之一——独蒜兰Pleione bulbocodioides干燥假鳞茎中分离得到10个丁二酸苄酯苷类化合物和1个苄醇糖苷类化合物,根据理化性质和波谱数据分别鉴定为loroglossin（1）,grammatophylloside A（2）,cronupapine（3）,（-）-（2R,3S）-1-[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-4-甲基-2-异丁基酒石酸酯（4）,vandaterosideⅡ（5）,grammatophylloside B（6）,（-）-（S）-1,4-二-[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-2-异丙基苹果酸酯（7）,gymnosideⅠ（8）,militarine（9）,dactylorhin A（10）,天麻苷（11）。其中化合物1~7为首次从独蒜兰属植物中分离得到。

党参水提取物中的木脂素类化学成分

通过正相硅胶、大孔吸附树脂、MCI树脂、Sephadex LH-20、制备薄层色谱和反相HPLC等多种色谱分离方法相结合,从常用中药党参的水提取物中分离得到16个木脂素类化合物,借助波谱学分析方法鉴定它们的结构分别为:(-)-(7R,7'R,8R,8'S)-4,4-二羟基-3,3',5,5',7-五甲氧基-2,7'-环木脂烷(1)、(-)-(7R,8S)-二氢脱氢双松柏基醇4-O-β-吡喃葡萄糖基-(1'''→2'')-β-吡喃葡萄糖苷(2)、(-)-(7R,8S)-二氢脱氢双松柏基醇(3)、(+)-(7S,8R)-脱氢二松柏基醇(4)、(+)-蛇菰脂醛素(5)、(+)-去甲氧基松脂素(6)、(+)-松脂素(7)、(+)-表松脂酚(8)、(-)-丁香脂素(9)、(-)-皮树脂醇(10)、(-)-落叶松脂醇(11)、(-)-开环异落叶松脂醇(12)、(-)-对映-异落叶松脂醇(13)、(+)-(7S,8S)-3-甲氧基-3',7-环氧-8,4'-氧新木脂素-4,9,9'-三醇(14)、(+)-(7S,8R)-3',4-二羟基-3-甲氧基-8,4'-氧新木脂素(15)和(-)-(7R,8R)-3',4-二羟基-3-甲氧基-8,4'-氧新木脂素(16)。以上化合物均为首次从党参中分离得到;其中,化合物1为一个新的2,7'-环木脂烷类天然产物,化合物2为一个新的4',7-环氧-8,3'-新木脂烷类双糖苷。在1×10-5 mol·L-1浓度下,化合物12对半胱氨酸亚铁(Fe^(2+)_Cys)诱导大鼠肝微粒体脂质过氧化的抑制率为(63.4±8.3)%。

过氧化氢诱导人肺动脉内皮细胞损伤模型的建立及其氧化应激机制

目的 建立过氧化氢（H2O2）诱导的人肺动脉内皮细胞（PAEC）损伤模型,探讨氧化应激促使PAEC结构和功能改变的分子机制.方法 采用不同浓度（25、50、100、200、400、800、1 600、3 200和6 400 μmol/L）的H2O2刺激PAEC,分别作用4、24 h后,采用CCK-8法测定PAEC活力并绘制存活曲线,采用流式细胞术检测PAEC凋亡情况,利用小分子荧光探针检测PAEC内活性氧（ROS）生成和线粒体活性,采用Western blot法检测PAEC内信号分子的磷酸化水平.结果 （1）不同浓度H2O2对PAEC活力的影响：H2O2作用4h后,PAEC的活力随着H2O2浓度的增加而降低.同时,经过计算H2O2作用4和24h后,H2O2抑制PAEC活力的IC50值分别为397.00和488.77 μmol/L.（2）H2O2对PAEC凋亡的影响：400 μmol/L的H2O2作用4h后,PAEC晚期凋亡和坏死的比率分别为（22.58 ±3.69）％和（11.86±4.27）％,而阴性对照PAEC晚期凋亡和坏死的比率仅为（3.41±1.44）％和（1.94±1.15）％,P均〈0.05.H2O2处理后PAEC存活率仅为（7.98±3.21）％,明显低于阴性对照（48.89±8.08）％,P〈0.01.但H2O2处理后PAEC与阴性对照PAEC的早期凋亡率差异并无统计学意义.（3）H2O2对PAEC内线粒体活性和ROS生成的影响：H2O2处理后PAEC ROS生成量和线粒体活性均明显高于阴性对照（P均〈0.01）.（4） H2O2对PAEC内信号传递分子蛋白含量的影响：H2O2作用后30 min,PAEC内Akt含量与阴性对照PAEC比较差异无统计学意义,而p-Akt含量则明显高于阴性对照PAEC（P 〈0.01）,同时p-JNK和p-p38含量亦均明显高于阴性对照PAEC（P均〈0.01）.结论 400μmol/L H2O2可明显损伤人PAEC,其机制可能涉及Akt、MAPK等多条信号通路.

4'-去甲基表鬼臼毒素的酶法糖基化

4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战。该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因Ab GT5,并成功进行了外源表达及蛋白纯化。重组Ab GT5能够催化4'-去甲基表鬼臼毒素进行糖基化,获得的产物经MS,~1H-NMR,^(13)C-NMR,HSQC以及HMBC等波谱技术鉴定为4'-去甲基表鬼臼毒素-4'-O-β-D-葡萄糖苷。酶学性质研究发现AbGT5的最适反应温度为20℃,最适pH 9.0,且不依赖金属离子。在最适反应条件下,4'-去甲基表鬼臼毒素的转化率可达80%。该研究表明利用新颖糖基转移酶AbGT5可实现4'-去甲基表鬼臼毒素的高效酶法糖基化,为其糖基化提供新方法。