莪术基原植物DNA条形码序列的筛选与鉴定

为寻找适用于中药材莪术基原植物鉴定的DNA条形码序列,探索快速高效的莪术基原植物鉴定的新方法,该文首先利用扩增成功率和测序成功率对中药材莪术三种基原植物,9个样本的7种DNA条形码序列(ITS、ITS2、matK、psbA-trnH、trnL-trnF、rpoB和atpB-rbcL)进行评估,然后利用MEGA6.0软件对获得的高质量的序列通过变异位点分析、遗传距离计算和系统树分析等进一步进行评估,最后将筛选到的DNA条形码序列对未知基原的待测样品进行基原鉴定。结果表明:(1)ITS、ITS2和matK等条形码序列在莪术基原植物中的扩增或测序成功率较低,难以应用于实际鉴定;而psbA-trnH、trnL-trnF和rpoB条形码序列变异位点信息过少,不足于区分莪术的三种不同基原植物;只有atpB-rbcL条形码序列的扩增和测序成功率较高,容易获得高质量的序列,同时序列长度(642~645 bp)理想,变异位点多(11个),可实现莪术的三种不同基原的区分鉴别。(2)待测样品经基于atpB-rbcL序列构建的系统发育树鉴别为温郁金。综上所述,叶绿体atpB-rbcL序列能够准确鉴定莪术不同基原植物,可以作为中药材莪术基原植物鉴定的条形码序列。

沉香线香燃香吸入助睡眠作用及机制探究

目的探究沉香线香熏香助睡眠作用及其作用机制。方法实验动物随机分为空白对照组、氯苯丙氨酸模型组、地西泮对照组(2.5 mg·kg^(-1))及熏香吸入低剂量组(0.25 g·kg^(-1))、中剂量组(0.5 g·kg^(-1))、高剂量组(1.0 g·kg^(-1));采用自制熏香仪熏点吸入的给药方法,1次/天,1 h/次,连续7天。观察沉香线香熏点吸入后对睡眠的影响;观察小鼠行为学变化并进行评价;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠脑内伽马氨基丁酸(GABAA)、谷氨酸(Glu)、五羟色胺(5-HT)、腺苷(AD)等递质及对GABAA/Glu值的影响;采用免疫印迹法(Western Blot)检测对谷氨酸能系统代谢和转运相关蛋白——谷氨酸受体(GluR1)及囊泡谷氨酸转运蛋白(VGluT1)表达的影响。结果在一定剂量下,沉香线香熏香吸入可显著提高入睡效率和时长(P<0.05),同时减少其自主活动时间(P<0.05);熏香组可显著升高5-HT、Glu、GABAA及腺苷分泌水平(P<0.01或P<0.05),同时上调GABAA/Glu的比值(P<0.01或P<0.05);沉香线香熏香还可显著升高海马组织中GluR1及VGluT1相关蛋白的表达。结论沉香线香熏香吸入可显著抑制失眠小鼠的自主活动,较好改善睡眠状况,作用机制可能与调节脑内5-HT递质含量、调控GABA-Glu分泌平衡及Glu合成代谢和转运有关。

不同产地温莪术遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析

目的采用简单序列重复区间(ISSR)分子标记技术分析不同产地温莪术的遗传多样性和亲缘关系。方法以3个产地8个温莪术居群的42个样品为材料,从20条ISSR引物中筛选出6条进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后,利用PopGene 32软件对不同居群ISSR标记结果进行多态性分析,通过UPGMA方法聚类并构建亲缘关系树。结果6条引物共扩增出42个多态性位点,居群水平多态位点平均百分率为29.17%。居群间遗传分化系数Gst为0.3886,居群间每代个体的基因流系数(Nm)为0.7868。8个居群遗传一致性范围为0.8481-0.9736,遗传距离范围为0.0268-0.1647。结论供试8个温莪术居群之间的遗传多样性水平偏低,遗传变异较少,基因流动性水平较低。本研究的开展为温莪术的引种栽培及育种提供了一定的分子生物学依据。

沉香线香燃香调节多神经递质途径的抗焦虑/抑郁作用及机制

目的:探讨沉香线香(ALI)对小鼠焦虑模型和抑郁模型的作用及其机制。方法:采用间氯苯哌嗪(MCPP)和慢性不可预知性温和刺激(CUMS)法分别制作小鼠焦虑和抑郁模型,观察熏香后模型动物旷场活动(OFT)、明暗箱穿梭(LDT)、悬尾(TST)、游泳(FST)等行为学变化;ELISA法测定海马组织中五羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)、伽马氨基丁酸A受体(GABAA)水平;Western Blot法检测颗粒体蛋白(GRN2B)、代谢型谷氨酸受体5抗体(GRM5)、谷氨酸受体1(GluR1)及囊泡谷氨酸转运蛋白1(VGluT1)表达。结果:ALI可降低焦虑模型动物总活动路程和速度(P<0.05),增加静止时间(P<0.05),降低在暗箱中活动路程和速度(P<0.05);增加抑郁模型动物总路程和速度(P<0.05),降低静止时间(P<0.05)和强迫游泳及悬尾不动时间(P<0.05);与焦虑模型组比较,中、高剂量组的GLu水平降低(P<0.05),而GABAA,5-HT水平升高(P<0.05);与抑郁模型组比较,中、高剂量组5-HT和GLu水平升高(P<0.05),GABAA水平降低(P<0.05);ALI熏香吸入能提高焦虑模型动物GRN2B,GRM5,GluR1,VGluT1蛋白表达;可提高抑郁模型动物GRN2B,GluR1,VGluT1蛋白表达,降低GRM5蛋白表达。结论:ALI对焦虑模型和抑郁模型的行为均有改善,其作用机制可能与调控5-HT,GABAA,Glu神经递质水平和影响GRN2B,GRM5,GluR1,VGluT1的蛋白表达有关。