基于高效液相色谱法对吸水链霉菌发酵液中波拉霉素A的测定与分离纯化

该研究建立了检测吸水链霉菌(LP-93)发酵液中波拉霉素A含量的HPLC方法,使用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),确定了流动相[V(乙腈)∶V(水)=45∶55]及相关参数:流速1 mL/min,检测波长220 nm,进样量10μL,柱温30℃。并在此基础上建立了波拉霉素A的高效制备色谱(high performance preparative chromatography,HPPC)分离纯化方法,使用C18色谱柱(250 mm×21.2 mm,7μm),流速15 mL/min,进样量3 mL。进一步使用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometer,UPLC-Q-TOF)对纯化组分进行了定性分析。结果表明,该检测方法在2.5~500 mg/L线性关系良好(R^(2)=0.9998),平均回收率在90.53%~101.96%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)<2%。纯化方法得到较高纯度的波拉霉素A溶液,平均纯度87.52%,平均得率71.84%,并获得波拉霉素A的一级和二级质谱图。该操作方法简便,分析快速,结果准确,可用于吸水链霉菌发酵液中波拉霉素A的含量测定,并为该天然产物的分离纯化提供了参考。

吸水链霉菌17997产生的4,5-双氢格尔德霉素的鉴别与检测

本文对从吸水链霉菌17997发酵提取获得的格尔德霉素精制品进行了LC-MS-MS分析,发现其中含有4,5-双氢格尔德霉素组分。对吸水链霉菌17997摇瓶发酵产物的硅胶板薄层层析分析表明,4,5-双氢格尔德霉素组分在发酵中期有积累。已知4,5-双氢格尔德霉素的抗肿瘤活性比格尔德霉素差,因而需要限制其在格尔德霉素制品中的含量。本文研究结果对以吸水链霉菌17997等为产生菌研究格尔德霉素发酵,促进4,5-双氢格尔德霉素转化为格尔德霉素以提高发酵液的品质,以及检测格尔德霉素制品中的4,5-双氢格尔德霉素组分具有实际意义。