宠物对人类健康的潜在威胁

宠物是多种人兽共患病病原的宿主和传播媒介,由于传统宠物、另类宠物和进口宠物的增多,宠物来源的感染性疾病有了高发的趋势。本文总结了狗、猫、啮齿类、鸟类、鱼和爬行类宠物可能带有的人兽共患病病原,引发的疾病和传播途径。并概括了防控宠物源性感染性疾病的防控措施。

布氏田鼠的研究概况和其分类学名称变化

布氏田鼠Lasiopodomys brandtii(Radde,1861)分布广泛,分三个亚种。本文简介了布氏田鼠的研究进展,包括:生态、形态、生理、遗传以及实验动物化研究等。此外,布氏田鼠的中、英文名称和其分类学地位,因历史原因和研究方法不同,一直存在分歧和争议。本文介绍了布氏田鼠在我国各时期的名称和分类学变动情况。

微卫星标记在布氏田鼠封闭群遗传结构研究中的应用

目的使用微卫星标记分析连续三代布氏田鼠封闭群遗传结构的稳定性。方法使用高盐沉淀法从鼠尾中提取布氏田鼠基因组DNA,将筛选出7对微卫星引物并用荧光标记(Fam),然后对布氏田鼠封闭群连续三代的基因组DNA进行PCR扩增,测序仪检测PCR产物,整理原始数据并对布氏田鼠基因组DNA进行微卫星分析。结果由平均有效杂合度和多态信息含量的分析得出该布氏田鼠种群传代过程中保持着较高而且稳定的杂合度。结论该实验结果说明本实验室布氏田鼠封闭群的遗传结构比较稳定。

H7N9禽流感病毒小鼠感染动物模型的建立

目的建立H7N9禽流感病毒小鼠感染模型。方法 1×108,1×107或1×106TCID50H7N9禽流感病毒原液(A/Anhui/1/2013)滴鼻感染BALB/c小鼠。主要观测指标:临床症状、死亡率、病理变化、病毒载量和血清抗体检测。结果被感染的小鼠表现为竖毛、弓背、体重下降;病理表现为间质性肺炎,感染后第2天开始在呼吸道脱落细胞中检测到病毒;免疫组化或病毒分离方法在肺、肾、脑、肠、脾等组织检测到病毒;感染后14 d在小鼠血清中血凝抑制试验特异性抗体效价达到160;淋巴细胞减少,中性粒细胞增多。结论 H7N9感染BALB/c小鼠模型与人类禽流感感染疾病的基本特征相似,为研究该病的发病机制及药物疫苗的研发提供了工作基础。

绿色荧光蛋白转基因小鼠的生理生化常数

目的测定绿色荧光蛋白转基因小鼠不同年龄段的生理生化、组织病理学等方面的指标,为该品种转基因小鼠应用于毒理学等领域研究提供理论依据。方法定期测定不同周龄段(4～6周龄,6～8周龄,9～12周龄,13～14周龄)141只绿色荧光蛋白转基因(GFP)小鼠和100只对照组C57BL/6J小鼠的体重和摄食量,对上述两种动物定期取血,测定血生化及血液学指标,对动物进行大体解剖,计算主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺,性腺)的脏器系数并进行组织病理学检测。结果①体重和摄食量:4周龄的GFP小鼠,其体重明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.01);4～5周龄的GFP小鼠,其摄食量明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.01)。②血常规测定:6～8周龄,9～12周龄的GFP小鼠,其红细胞计数(RBC)明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.01);9～12周龄,13～14周龄的GFP小鼠,其白细胞计数(WBC)明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.01)。③血生化测定:6～8周龄,9～12周龄,13～14周龄的GFP小鼠,其尿酸(UA)值明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.01);6～8周龄,9～12周龄的GFP小鼠,其总蛋白(TP),白蛋白(ALB)明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.01)。④脏器系数:6～8周龄,9～12周龄的GFP小鼠,其胸腺的脏器系数明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.01);9～12周龄,13～14周龄的GFP小鼠,其肝脏的脏器系数明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.01)。⑤病理检测:6～8周龄有部分GFP小鼠胸腺发育不良,其他受检脏器和其他年龄段动物未见明显病理改变。结论①绿色荧光蛋白转基因小鼠与对照组C57BL/6J小鼠相比,在体重(4周龄)、摄食量(4～5周龄)、血常规(红细胞计数RBC、白细胞计数WBC、血红蛋白HGB)、血生化(尿酸UA、总蛋白TP、白蛋白ALB)、脏器系数(胸腺,肝脏)等指标上存在明显差异,但是其值均在正常范围内。②绿色荧光蛋白转基因小鼠在6～8周龄有部分小鼠胸腺发育不良。

SPF级和野生布氏田鼠血生化指标的比较分析

目的:检测布氏田鼠的血生化指标,比较布氏田鼠无特定病原体级(specific pathogen-free,SPF)封闭群和实验室驯育野生种群之间该指标的差异。方法:分别测定4月龄野生布氏田鼠和SPF级封闭群内布氏田鼠的25项血生化指标,每个种群各抽样16只个体,雌雄各半。结果:实验室开放环境饲养的野生布氏田鼠的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的值均显著高于SPF级布氏田鼠,部分血生化指标不同性别之间差异较大。结论:在一定程度上,布氏田鼠体内外的微生物控制状况影响该动物的血生化指标。

不同月龄SPF级布氏田鼠血液学指标与生化指标的比较

目的:本实验分别对4和12月龄SPF级布氏田鼠进行了血常规和血生化指标的检测,比较不同月龄布氏田鼠间的差异。方法:检测12项血常规指标,24项血生化指标。结果:12月龄布氏田鼠的平均血红细胞体积、红细胞分布宽度、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、血清总蛋白、肌酸激酶、胆固醇、免疫球蛋白、Ca、Na、Cl、K、P以及谷氨酰基转移酶高于4月龄田鼠,而血红蛋白、血小板数、平均血小板比积、平均血红蛋白浓度、血清白蛋白、血糖、肌酐、A/G以及尿素氮低于4月龄田鼠。部分指标在性别间有显著差异。结论:布氏田鼠的血液和生化指标随着月龄增长有显著变化,而且该变化存在性别差异。

布氏田鼠与BABL/C小鼠气道反应性的比较分析

目的:比较BABL/C小鼠和本实验室培养的封闭群布氏田鼠的增强呼气间歇,分析两者之间的气道反应性差别。方法:利用EMKA肺功能检测系统测定清醒无创状态下4周龄～6周龄BABL/C小鼠和布氏田鼠的各项呼吸生理参数,使布氏田鼠和小鼠吸入0.494 g/L～30 g/L倍增浓度的乙酰甲胆碱(Mch),测定相应浓度下的增强呼气间歇(Penh)指标。结果:通过对这两种动物的气道反应性的比较分析,发现布氏田鼠的气道高反应性(AHR)在Mch的刺激下比BABL/C小鼠明显。在3.75 g/L Mch的刺激下,布氏田鼠的Penh值明显高于BABL/C小鼠。结论:Penh指标可以成功检测BABL/C小鼠和本实验室培养的封闭群布氏田鼠的高气道反应性。

布氏田鼠与BALB/c小鼠焦虑样行为的差异比较

目的比较布氏田鼠与BALB/c小鼠焦虑样行为的差异。方法记录布氏田鼠与BALB/c小鼠在高架十字迷宫实验(总路程、开臂时间及次数、闭臂时间及次数)及旷场实验(总路程、边缘区时间及次数、中央区时间及次数)的焦虑样行为数据。结果高架十字迷宫实验中,布氏田鼠所记录的总路程、闭臂时间均极显著高于BALB/c小鼠(P<0.001),在开臂时间百分比[开臂时间/(开臂时间+闭臂时间)]显著低于BALB/c小鼠(P<0.05)。在旷场实验中布氏田鼠总路程、边缘区滞留时间均极显著高于BALB/c小鼠(P<0.001)。结论布氏田鼠具有显著的焦虑行为,为开发新的焦虑症动物模型提供理想的动物资源。

伏隔核区Jak/Stat3抑制剂注射调控布氏田鼠的能量代谢

目的探究抑制布氏田鼠Lasiopodomys brandtii伏隔核区leptin-Stat3(瘦素-Stat3)细胞信号通路对其能量代谢以及体质量的影响。方法在布氏田鼠伏隔核区定点注射Jak/Stat3抑制剂(WP1066),使用TSE代谢笼系统检测布氏田鼠的基础代谢,并随时记录布氏田鼠的体质量。结果在伏隔核区定点注射Jak/Stat3抑制剂后,布氏田鼠伏隔核区P-Stat3表达量以及瘦素表达水平明显下降(P<0.05),而血清瘦素浓度以及血糖浓度没有显著变化(P>0.05)。TSE代谢笼实验检测发现,实验组布氏田鼠总能量消耗显著降低(P<0.05)、呼吸交换率显著增加(P<0.05)、总耗氧量显著降低(P<0.05)、总自主运动量显著减弱(P<0.05)、总饮水量显著增加(P<0.05)、体质量显著增加(P<0.05)。结论调控伏隔核区的leptin-Stat3信号通路能够调控基础代谢,进而在10 d内改变布氏田鼠体质量。

一种gRNA快速合成及检测方法的建立

目的建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段,然后通过体外转录纯化得到gRNA;最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强,活性高,在靶点上成功切开DNA双链。结论成功建立gRNA快速合成及检测的方法,为后续转染或显微注射筛选有活性gRNA节约了时间。

SPF级和野生布氏田鼠血液学指标的比较

目的:了解不同微生物控制程度(屏障环境和普通环境)对布氏田鼠血液学指标的影响。比较SPF级布氏田鼠(specific pathogen-free,SPF)和野生布氏田鼠血液学指标的差异。方法:选取4月龄SPF级布氏田鼠和野生布氏田鼠各16只,雌雄各半,测定12项血液学指标。结果:实验室开放环境饲养的野生布氏田鼠血红蛋白指标低于SPF级布氏田鼠,红细胞分布宽度和血小板数高于SPF级布氏田鼠。部分血液学指标在不同性别之间差异较大。结论:普通开放条件下饲养的野外捕获的布氏田鼠与SPF级布氏田鼠的部分血液学指标存在显著差异,说明微生物控制能影响动物的血液指标。

细胞衰老与2型糖尿病的相关性研究进展

2型糖尿病是目前公认的与衰老相关的重大疾病之一,发病年龄多在50岁以上。细胞衰老是指细胞应激致细胞产生不可逆的永久性细胞周期停滞的状态,是机体衰老的基础。细胞衰老与2型糖尿病的关系相当复杂,衰老的胰岛β细胞在组织内累积引起β细胞功能障碍、脂肪细胞衰老导致脂质代谢障碍等等,衰老的细胞还可间接通过衰老相关分泌表型使个体处于慢性低水平炎症状态,引起2型糖尿病及其并发症;反过来,糖尿病的高血糖、炎症微环境及脂毒性等能够促使细胞衰老并进一步累积。细胞衰老可能既是2型糖尿病发生的原因,又是其发展的结果。靶向细胞衰老的疗法可能为2型糖尿病提供新的治疗策略,现就细胞衰老在2型糖尿病的发生发展中的作用研究进展做一简要综述。

铅暴露U251细胞对钙离子信号通路的影响

目的探讨铅暴露人神经胶质瘤U251细胞对钙离子信号通路的影响。方法将体外培养的人神经胶质瘤U251细胞(human U251 glioma cells,U251)分别暴露于含有乙酸铅(400μg/ml)的培养液中8和24 h,提取RNA。应用cDNA芯片技术筛选差异表达基因,并利用信息学技术进行钙离子信号通路分析。结果铅暴露U251细胞,导致2840条基因差异表达,钙离子信号通路中有45条基因表达异常。结论铅暴露U251细胞后,参与钙离子信号通路的45条基因发生了表达改变,导致细胞膜上钙离子通道发生变化,钙离子调控的生物学功能受到影响。

SPF级布氏田鼠的繁殖及生长发育性能测定

目的:在屏障环境下,对本所饲养的SPF级布氏田鼠繁殖及生长发育性能进行测定。方法:在采用药物净化等方法同时初步尝试进行剖腹产净化,确定了在屏障环境中针对该动物的净化方法。从SPF级繁殖鼠中抽取20对,以雌雄1∶1长期同居,统计繁殖性能参数,随机选取雌雄各20只3周龄SPF级布氏田鼠进行生长发育性能测定,每周测定一次,到20周龄为止。结果:剖腹产手术成功。SPF级布氏田鼠的平均窝产子数为6.37只,平均离乳率为96.86%,平均胎间间隔为23.7 d。离乳后的布氏田鼠的体重和体长有一个快速增长期,9周龄后增长速度开始放慢。结论:本研究建立了SPF级布氏田鼠繁殖和生长发育性能的基本指标。

感染肠道病毒71型的小鼠模型组织病理变化的透射电镜观察

目的 观察感染肠道病毒71型（EV71）小鼠模型的脑、脊髓、肌肉、空肠和肺脏组织超微结构改变,探讨EV71嗜肌性发病机制和神经系统病理改变的发展过程.方法 采用腹腔注射EV71感染10日龄BALB/c乳鼠,感染4d出现症状后,取其脑、脊髓、肌肉、空肠以及肺脏组织进行透射电镜和光镜观察.结果 感染组小鼠脑组织病变轻微,部分线粒体内室肿胀,有髓神经纤维髓鞘呈现小泡性分离；脊髓前角神经元尼氏小体溶解,粗面内质网脱颗粒,线粒体肿胀,胞质呈筛状外观,并可见嗜神经现象；肌组织发生退行性变,横纹消失,肌细胞核固缩,线粒体肿胀；空肠黏膜上皮细胞微绒毛排列疏松,形成螺旋状髓鞘样结构,线粒体肿胀；肺组织发生了间质性肺炎,肺泡Ⅱ型上皮细胞增生,其嗜锇性板层小体或出现排空现象.结论 感染EV71小鼠模型其骨骼肌发生严重的坏死性肌炎,病毒表现出强肌嗜性；中枢神经系统发生不同程度的损伤,脊髓前角运动神经元损伤,这与肢体瘫痪有一定的关联性.

布氏田鼠催产素基因的克隆及通过慢病毒载体转染细胞后的过表达检测

目的:构建表达布氏田鼠催产素基因的慢病毒载体及过表达检测。方法:从布氏田鼠脑组织提取RNA逆转录PCR得到OT的cDNA片段,并分别连接到带有荧光素酶(luciferase,LUC)标记的慢病毒载体PGK启动子下游,以及带有绿色荧光蛋白(EGFP)标记的EF1A启动子下游,通过这两个载体转染细胞,分别利用生物发光标记与荧光标记这两种技术示踪OT基因的表达;再通过提取RNA逆转录以及实时荧光定量PCR检测OT基因不同模板转录的拷贝数。结果:成功构建LUC标记和EGFP标记的表达布氏田鼠催产素基因的慢病毒载体,进行了真核表达检测,并建立了实时荧光定量PCR的方法。结论:催产素(oxytocin,OT)基因是哺乳动物特有的神经垂体激素,与社会认知行为和社会适应行为有关,为研究该基因的功能奠定基础。

转基因表达KLK1抵抗压力负荷引起的心室重构

目的 KLK1基因对高血压具有保护作用,KLK1在心脏中也有所表达,但目前对KLK1基因在心肌中的作用所知甚少。本研究通过建立KLK1基因转基因小鼠,在压力负荷的条件下,研究KLK1对心室重构的作用。方法把人KLK1基因插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立C57BL/6JKLK1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型。采用Western Blot鉴定KLK1在心脏、大血管和肾脏中的表达筛选高表达转基因品系。用无创血压仪测量血压,利用超声影像分析技术和病理学观察转基因小鼠心脏结构与功能改变。结果建立了在心脏、肾脏和大血管壁高表达KLK1基因的转基因小鼠。在正常情况下,与同窝转基因阴性小鼠相比,转基因小鼠心脏结构和功能无显著变化。主动脉缩窄术后1个月,由于压力负荷的存在,同窝阴性小鼠左心室壁厚病理性肥厚,而转基因表达的KLK1可明显地抑制左心室壁肥厚的进程;主动脉缩窄术后2个月,同窝阴性小鼠心脏进入到病理性扩张阶段,KLK1也表现出对心肌病理性扩张的抑制,同时,组织学染色显示KLK1转基因小鼠心肌肥厚与纤维化程度减弱。结论转基因表达KLK1可抵抗压力负荷引起的心室重构。