病毒对细胞凋亡的调控

近年的研究表明病毒感染细胞与细胞凋亡有密切的关系，在凋亡的过程中新基因的表达、病毒蛋白等起着重要的调控作用。本文主要介绍病毒感染后对细胞凋亡的调控。

一株引起手足口病重症感染的柯萨奇B3病毒变异株的生物学分析

目的分析1株柯萨奇病毒B3型（CoxB3）新分离株FY-19的基因特性和生物性状，为进一步探讨其引起手足口病（HFMD）重症表现的机理提供线索。方法采用Lim Benyesh-Melnick组合血清方案对1株分离自2008年中国阜阳地区重症HFMD男性患儿的FY-19病毒株进行血清学鉴定，以全基因序列测定分析该病毒株的遗传特征，结合病毒增殖动力学和噬斑形成实验分析FY-19病毒的生物学特性，通过乳鼠脑内病毒接种研究该毒株的致病性特征。结果血清学鉴别确定FY-19毒株为CoxB3病毒；与标准株相比，FY-19株在3’、5’非编码区和编码区的差异分别为达到23．0％、16．5％和32．1％，与我国分离于非HFMD患者的毒株相比也存在较大差异（非编码区和编码区的差异分别为13．5％和25．0％）；FY-19株能在14h内达到增殖高峰，且其在小鼠体内引起心肌病变的致病性显示出明显的致死能力。结论FY-19株的生物学特性与标准毒株之间存在较大的差异，对该变异株的进一步分析将为了解其在HFMD的特殊的致病机理提供帮助。

人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定

目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘肽(GST)标签琼脂糖4B亲和柱层析、纯化蛋白,CellTiter96AQueous细胞增殖检测法(MTS)检测K5对ECV304增殖影响。结果 PCR扩增得到282bp片段,并成功插入pGEX-5X-1质粒,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下工程菌表达了特异性融合蛋白,经凝血酶酶切后得到分子量约为12kD的K5蛋白;K5蛋白能特异性抑制ECV304增殖,抑制率最高蛋白浓度为5ng/L。结论含重组质粒pGEX-5X-1/K5大肠杆菌表达产物量多且易纯化,为包括肿瘤在内的病理性血管增生疾病抗血管生成药物开发做了积极的尝试。

HCV多表位抗原的选择及结构分析

目的:设计HCV复合多表位抗原,分析其空间结构,探讨其用于疫苗研究和HCV-Ag检测的潜在可行性。方法:选择HCV多表位抗原并将其串联成HCV复合多表位抗原基因B2,利用软件和网站分析其空间结构。结果:该HCV复合多表位抗原具备涵盖多种天然表位的抗原特性,且二级结构提示具有形成T细胞位点的倾向,易于诱导T细胞介导的细胞免疫应答,三级结构有良好的亲水性,可能激发良好的体液免疫应答。结论:该HCV复合多表位抗原选择合理,空间结构分析能激发良好的免疫反应,有望用于疫苗研究和HCV-Ag检测。

抗HIV黏膜免疫评价方法研究进展

黏膜是人类免疫缺陷病毒（human immunodenciency virus，HIV）侵入机体最主要的途径之一，评价黏膜免疫应答对评价HIV疫苗效果至关重要。用于检测不同动物模型和人体黏膜免疫应答的方法不尽相同，包括黏膜取样方法、样品保存、黏膜标记物种类和检测等方面，因此，建立统一的抗HIV黏膜免疫应答评价系统具有重要的意义。

肠道病毒71型中和抗体的保护水平

目的通过检测乳鼠模型、健康婴幼儿和疫苗免疫后目标人群的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体效价,为确定EV71疫苗保护水平提供基础数据。方法 6份不同EV71病毒株免疫血清经中和抗体准确定量后,分别通过两个EV71乳鼠攻毒模型,检测EV71中和抗体保护水平。采用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,分别对健康婴幼儿及疫苗免疫后血清进行中和抗体准确定量。结果在2个乳鼠攻毒模型中,6份免疫血清的中和抗体保护水平接近,ED50分别为10～50 U和6.1～54.2 U;婴幼儿人群7、12和24月龄抗体阳性率分别为45.0%、48.8%和56.8%,阳性人群的抗体效价分别为113.8、120.3和330.6U/m(l均值为173.2 U/m)l,母亲抗体阳性率和效价分别为86.7%和114.3 U/ml;中、高剂量疫苗2针免疫后,婴幼儿抗体阳性率均为100%,效价为356.0和1 136.2 U/ml,较婴幼儿人群自然感染水平高2.1～6.6倍。结论应用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,确定了以U/ml为单位的乳鼠攻毒抗体保护水平及婴幼儿人群抗体水平和疫苗免疫后抗体水平,为EV71疫苗免疫人群中和抗体保护水平的确定提供了依据。

膀胱癌组织Kringle5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定

Krigle 5（K5）是纤溶酶原裂解片段，生物活性高于内皮抑素和血管抑素，其相对分子质量小、穿透力强，是更有研究前途的内源性血管生成抑制因子。本研究旨在对膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定。

2008-2013年国内报道的手足口病病原体构成的Meta分析

目的 利用Meta分析的方法对国内发表文献中的手足口病病原体检测结果进行分析,找出手足口病病原体在人群中传播的规律和特点,为手足口病的防治提供参考.方法 从CNKI中国知网中收集2008年至2013年发表的符合纳入标准的文献,用Review Manager 5.0软件对手足口病病原体的构成情况进行Meta分析.结果 共筛选到24篇符合标准的文献,总样本量为15 360份.主要病原体肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）的实时荧光PCR检出数的合并比数比（odds ratio,OR）为2.10,95％可信区间（CI）为1.37～3.23,EV71的感染风险略高于CA16（Z=3.4（0,P=0.0007）.不同性别（男、女）间总肠道病毒、EV71、CA16检出数的合并OR值（95％CI）分别为1.19（0.97～1.46）、1.01（0.81～1.26）和1.36（1.04～1.78）,CA 16的感染风险在不同性别间的差异有统计学意义（Z=2.23,P=0.03）.不同年龄段[0～3岁（不含3岁）、3～6岁（不含6岁）]总肠道病毒、EV71、CA16检出数的合并OR值（95％CI）分别为1.01（0.69～1.48）、0.88（0.58～1.35）和0.98（0.65～1.47）,不同年龄段之间三者的感染风险差异均无统计学意义.结论 EV71、CA 16和其他肠道病毒在总体人群以及不同性别、不同年龄段之间的感染风险无差异或差异不大,因此,在预防手足口病过程中,对不同病原体、不同性别、不同年龄段都应等而视之.

全球脊髓灰质炎流行现状和应对措施

脊髓灰质炎（脊灰）是一种古老的疾病，由脊灰病毒引起，可导致不可逆残疾等严重机体损害，甚至死亡。自20世纪50年代口服脊灰减毒活疫苗问世以来，全世界脊灰的发病和流行得到有效控制，但仍未彻底消灭脊灰。2009年后，针对阿富汗、印度、尼日利亚、巴基斯坦等国家的脊灰流行特点，世界卫生组织（WHO）建议使用两价（I＋Ⅲ型）口服脊灰减毒活疫苗，这标志着消灭脊灰有了新工具。