复合诱变选育抗菌肽Sublancin高产菌株

Bacillus subtilis BF168可以产生一种新型的抗菌肽Sublancin,Sublancin具有明显的抗革兰氏阳性菌活性,但产量较低。为了获得Sublancin高产菌株,对其产生菌B. subtilis BF168进行诱变选育研究。以B. subtilis BF168为出发菌株,采用加热、紫外(Ultraviolet,UV)、氯化锂(Li Cl)、微波(Microwave,MW)和UV-Li Cl、UV-MW、MW-LiCl处理技术分别进行单一诱变和复合诱变,不同诱变条件处理的菌悬液涂布在培养基平板上培养后获得单菌落,通过菌株致死率和正突变率确定合适的诱变条件,利用突变株摇瓶发酵效价筛选出正突变菌株。结果表明:单一诱变最佳参数分别是热诱变为80℃处理10 min;UV诱变为功率30 W、照射距离30 cm、照射时间90 s;Li Cl诱变浓度为12 g/L;MW诱变为脉冲频率2 450 MHz、功率800 W、辐射时间100 s。在不同诱变方法对比中发现,UV-Li Cl复合诱变方式可获得最高的正突变率,以突变株的发酵效价为指标的正突变率和致死率分别为21.05%和92.18%,复筛效价是出发菌株1.6倍以上的有4株,占复筛菌株的10%。经过多种方法复合诱变,最终获得一株遗传性状稳定的Sublancin高产菌株UL2,在培养温度为37℃、210 r/min的条件下,经过28~30 h培养后,该菌株的相对效价达到(204±2.83)%。实验证实UV-LiCl复合诱变可以显著提高BF168菌株的Sublancin发酵产量。