利用蛋白转导域介导的新型大分子转染方法

目的构建蛋白转导域（PTD）与扩增链亲和素（Strep）融合蛋白，用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系。方法采用聚合酶链反应（PCR）法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重组质粒pAYZ-PTD-Strep，用低磷培养液AP5诱导表达融合蛋白，E-tag亲和层析柱纯化产物，Westernblot鉴定产物，利用pAYZ-PTD—Strep将eGFP质粒转染到悬浮U937细胞内，流式细胞术测定融合蛋白转染效率。结果目的产物PTD—G4S—Strep融合蛋白以可溶形式表达，产量约为0．7mg／L，经E—tag亲和层析柱纯化后纯度可达90％以上。融合蛋白PTD-Strep可成功将质粒运送至悬浮细胞U937内，转染效率高于PTD单体。结论构建的融合蛋白PTD-Strep具有将生物大分子转入血液肿瘤悬浮细胞内的活性，有望发展成为一种高效、可靠的真核细胞转染方法。