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题名琥珀酰辅酶A转移酶的表达纯化及抗体制备
被引量:1
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作者
张勤
朱大海
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机构
中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室
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出处
《生物技术通讯》
CAS
2007年第3期426-429,共4页
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基金
国家自然科学基金重点项目(30330430)
港澳青年学者合作研究基金项目(30429002)
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文摘
目的:琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)是酮体代谢过程中的关键限速酶,此酶缺陷多由SCOT基因突变引起,患者多有酮症酸中毒表现。为了进一步研究SCOT的功能,采用原核表达系统表达并纯化重组SCOT,制备SCOT多克隆抗体。方法:选择蛋鸡、肉鸡模式生物为研究对象,通过生物信息学对其抗原性和属间同源性进行分析,通过RT-PCR从鸡的骨骼肌cDNA中扩增了SCOT基因N端半长片段,克隆到表达载体pET28b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组SCOT;用纯化的重组SCOT免疫小鼠后得到多克隆抗体。结果:Western印迹表明,制备的SCOT抗体具有较高的特异性,可特异性识别鸡的SCOT蛋白,同时可特异性识别小鼠和人的相应SCOT蛋白。结论:SCOT多克隆抗体的制备为后续在鸡、鼠和人中研究SCOT基因提供基础。
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关键词
琥珀酰辅酶A转移酶
原核表达
抗体制备
westem印迹
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Keywords
succinyl CoA: 3-oxoacid CoA transferase 1(SCOT)
protein expression
antibody preparation
Western blot
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
R392
[医药卫生—免疫学]
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