遗传性痉挛性截瘫的遗传学研究进展

遗传性痉挛性截瘫是一种遗传学上很受关注的神经性遗传疾病 ,在遗传学和临床表现上都有很强的异质性。本文综述了遗传性痉挛性截瘫的分类和遗传特点 ;按遗传特点的不同对各种类型的痉挛性截瘫及其相关基因的研究进展进行了全面总结 ;

中国10例戈谢病基因型与临床表型的相关性

目的 了解中国人戈谢病 (GD)基因型及其与临床表型的相关性。方法 10例中国GD患儿 (男 9,女 1。其中 5例Ⅰ型 ,2例Ⅱ型 ,3例Ⅲ型 ) ,来自无关的家庭 ,年龄 1 5～ 13岁。所有GD患儿的诊断是根据白细胞或成纤维细胞中 β 葡萄糖苷酶活性明显缺乏及骨髓象中出现戈谢细胞确定。采用巢氏聚合酶链反应扩增葡萄糖脑苷脂酶功能基因 ,产物覆盖了全部编码区 ;再分别扩增 11个外显子 ,用于限制酶切片断多态性 (RLFP) ,单链构像多态性 (SSCP)及序列分析。结果 5例Ⅰ型GD患儿的基因型是R48W R12 0W、G46E L44 4P、F37V L44 4P、N188S L44 4P及Y2 0 5C L44 4P ;2例Ⅱ型GD均为F2 13I L44 4P ;3例Ⅲ型GD为D40 9H D40 9H、G2 0 2R D40 9H及L44 4P L44 4P。检出了 2个新生突变F37V及Y2 0 5C。结论 中国GD患儿的L44 4P突变的等位基因频率最高 (40 % )。它同时出现在有神经病变及无神经病变的表型中。F2 13I、D40 9H及G2 0 2R突变基因型与有神经病变表型相关。

SmaRT──一种简便、有效的PCR产物直接克隆技术

ＳｍａＲＴ──一种简便、有效的ＰＣＲ产物直接克隆技术宋莉，李明月，张秀清，但美霞，刘国仰，杨焕明（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学遗传室，北京１００００５）ＰＣＲ已成为医学与生物学、特别是医学遗传学领域中最重要的技术。在序...

积极开展遗传病的预防工作

积极开展遗传病的预防工作施惠平近年来，随着医学的发展、妇幼保健工作的开展、预防接种的普及，我国营养不良性疾病、感染性疾病和传染病的发病率明显下降，遗传性疾病比例上升，预防遗传性疾病发病的问题日益重要。全国统计资料表明，目前我国有残疾人约５１００多万，...

苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复序列多态性的分析及应用

在苯丙氨酸羟化酶基因内含子３中有一４核苷酸（ＴＣＴＡ）串联重复序列，作者分析了中国人中这一位点的多态性，聚合酶链反应扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，经银染色显示结果，在中国人群中检出７种等位片段。在３６例正常人中这些等位片段的频率分别为０．０２８、０．０４２、０．０１４、０．１３８、０．５４２、０．２０８和０．０２８，多态性信息量（ＰＩＣ）为０．５８５；在１６个苯丙酮尿症家庭中，频率为０．０１６、０．０７８、０．０４７、０．３１２、０．３７５、０．１５６和０．０１６，ＰＩＣ为０．６９３，在苯丙酮尿症产前基因诊断中应用价值极高。短串联重复序列多态性连锁分析简化了苯丙酮尿症基因诊断的途径，有利于向基层推广。作者应用连锁分析成功地进行了２例产前诊断。

猫叫综合征关键区域定位于5p15.2的D5S713-D5S18区域

猫叫综合征是由５号染色体短臂缺失引起的染色体缺失综合征。根据染色体综合征“关键区域”的概念，以及近１０年来对１０６例５ｐ缺失病例的临床诊断、细胞遗传学及分子遗传学分析，将猫叫综合征的关键区域定位于５ｐ１５．２，位于Ｄ５Ｓ７１３和Ｄ５Ｓ１８两个遗传标记之间的区域。为研究该病提供了遗传学资料。

睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征Ⅰ型相关基因的定位

目的 对一个常染色体显性遗传的睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征(blepharophimosis epicanthus inversus and ptosis,BPES)家系的致病基因进行定位研究。方法 对染色体3q区域 4个微卫星位点 D3S30 45、D3S176 4、D3S30 5 3和 D3S2 436进行连锁分析。结果 未见患者在这 4个位点有缺失 ,各多态性位点 L od最大值 D3S30 45为 0 .77(θ=0 .0 0 ) ;D3S176 4为 3.6 1(θ=0 .0 0 ) ;D3S30 5 3为 0 .11(θ=0 .3) ;D3S2 436为 - 0 .0 3(θ=0 .4)。结论 在该家系中 ,BPES 与 3q2 2 - q2 4区域的D3S176

我国人睑裂狭小综合征患者FOXL2基因突变检测

目的研究分析我国人睑裂狭小综合征(BPES)两家系及6例散发病例的基因突变。方法选取染色体3q区域5个微卫星位点D3S3696、D3S1549、D3S3586、D3S1764和D3S1744进行家系连锁分析,应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序技术对提示连锁的染色体区域内候选基因FOXL2进行突变筛查。结果家系连锁分析,将致病基因定位在3q23区D3S3696至D3S1744之间9.88cM范围,其中位点D3S1549、D3S3586的LOD最大值为2.11(θ=0.00),D3S1764为1.51(θ=0.00);对FOXL2基因突变筛查发现,2例散发患者有909～938dup30重复突变,1例散发患者有1041～1042insC移码突变,但两个家系中无突变。结论两个家系与3q23区域的D3S1549、D3S3586和D3S1764位点存在连锁。首次在散发患者中发现两种FOXL2基因突变,其中909～938dup30突变被认为是BPES综合征FOXL2基因两大突变热点之一。尚未发现突变的家系,其致病机制可能与FOXL2基因周围的位置效应,或是与提示连锁的3q23区域内其他基因相关。

短重复序列PCR产物变性胶电泳影子带新解——正负链电泳行为的差异

目的 探讨短重复序列 Ｐ Ｃ Ｒ 产物变性胶的电泳影子带形成机理，并设法消除影子带。方法采用 Ｐ Ｃ Ｒ和不对称 Ｐ Ｃ Ｒ，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察影子带产生的情况。结果 利用不对称 Ｐ Ｃ Ｒ，某些二核苷酸（ Ｃ Ａ）ｎ 重复序列的影子带减少一半，四核苷酸重复序列的影子带消除；正负链的电泳速度有差异。结论 正负链电泳行为的差异是影子带产生的原因之一，利用不对称 Ｐ Ｃ Ｒ 可部分或完全消除影子带。

儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。

一个异染性脑白质营养不良家系ARSA基因突变分析

目的分析并确定一个异染性脑白质营养不良(metachromaticleukodystrophy,MLD)家系芳基硫酸酯酶A(arylsulftaseA,ARSA)的基因(ARSA)突变及遗传特征。方法收集先证者及其家系成员临床资料,采用聚合酶链反应和DNA直接测序方法进行ARSA突变检测,确定基因突变的位点,分析基因型与表型的关系。结果该家系先证者的ARSA基因同时存在第2外显子G251A(R84Q)与G296T(G99V)两个杂合突变,具有相似表型的胞弟与先证者的测序结果完全一致,先证者之父母分别携带ARSA基因第2外显子G251A(R84Q)与G296T(G99V)的杂合突变,表型正常的先证者之姐未发现这些突变。结论该家系中两位患儿均为ARSA基因复合杂合突变致病,其G251A(R84Q)突变来自父亲,G296T(G99V)突变来自母亲,其父母均为表型正常的基因突变携带者。

用人鼠杂交细胞株探针进行染色体描绘

用人鼠杂交细胞株探针进行染色体描绘曾瑄，赵蓥，高春生，赵非非，刘国仰，杨焕明，程在玉荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｔｉｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）是目前广泛应用的一种非同位素原位杂交技术，在基因定位、标记染色体的识别、染色体...

非同位素逆相点杂交方法检测苯丙酮尿症突变基因

目的建立一种简便、准确和快速的筛查苯丙酮尿症（ＰＫＵ）突变基因的方法。方法应用生物素渗入的聚合酶链反应扩增中国人ＰＫＵ患者常见突变位点：Ｙ２０４Ｃ（ｅｘｏｎ６，Ｅ６）、Ｒ２４３Ｑ（Ｅ７）、Ｙ３５６Ｘ（Ｅ１１）和Ｒ４１３Ｐ（Ｅ１２）所在的４个外显子区域，扩增标记产物再与固定于同一张膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行逆相点杂交（ＲＤＢ），用碱性磷酸酶显色法检测杂交信号以确定突变类型。结果建立了检测以上突变位点的非同位素逆相点杂交方法，并对５例就诊的ＰＫＵ患者进行了ＲＤＢ检测，查明３例携带Ｒ２４３Ｑ突变，其中１例还带有Ｙ３５６Ｘ突变，用单链构象多态性方法验证了上述结果。

尼曼-匹克病B型的产前诊断

目的对尼曼－匹克病Ｂ型进行产前诊断。方法应用成色底物２－己癸酰氨基－４－硝基苯磷酸胆碱，对４例尼曼－匹克病Ｂ型先证者及其父母进行了外周血白细胞中鞘磷脂酶的酶学分析，并对这４例先证者再妊娠的母亲进行了绒毛、羊水细胞中的酶学分析。结果先证者均有明显的鞘磷脂酶的缺乏，而父母的酶水平与正常有重叠。对２例先证者母亲孕早期绒毛、孕中期羊水进行酶学分析，结果与正常个体差异均无显著意义，另外２例仅于孕中期作了羊水细胞中的酶学分析，结果亦正常。随访４名先证者母亲所生新生儿表型正常。结论绒毛和羊水细胞中鞘磷脂酶分析可用于尼曼－匹克病的产前诊断。

应用双脱氧指纹法检测苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的提高苯丙氨酸羟化酶基因突变的检出效率，快速对苯丙酮尿症患儿进行产前诊断。方法采用双脱氧指纹（ｄｉｄｅｏｘｙｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ，ｄｄＦ）检测技术，ｄｄＦ法是将单链构象多态（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎ－ｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）分析技术和双脱氧测序技术结合为一体的检测基因突变的方法，它能有效地检测基因突变而不受扩增片段长度的限制。用ｄｄＦ法鉴定了苯丙氨酸羟化酶基因上的突变Ｙ１６５Ｘ，Ｙ２０４Ｃ和Ｑ３５５Ｈ。结果有多条泳带不同于正常对照泳带。采用ＳＳＣＰ技术，也检测出突变Ｙ１６５Ｘ和Ｑ３５５Ｈ显示了不同于正常的泳带位移，而扩增片段较长的含突变Ｙ２０４Ｃ的样本却未显示异常泳带。结论ｄｄＦ检测技术对大片段基因的突变检测比ＳＳＣＰ法更为敏感。

一例父源染色体有两种新生5p缺失的患者

一例父源染色体有两种新生５ｐ缺失的患者但美霞ＮｉｅｂｕｈｒＡ张小晓高春生刘国仰杨焕明ＮｉｅｂｕｈｒＥ罗会元猫叫综合征是５号染色体短臂缺失引起的综合征之一［１，２］。典型患者的主要临床症状有“似猫叫哭声”，典型的面部或其他特征，以及不同程度的智力低下和...

利用外显子捕获技术从基因组片段中分离表达序列

本实验旨在以外显子捕获（ｅｘｏｎ－ｔｒａｐｐｉｎｇ）技术从人类５号染色体短臂（５ｐ）＂猫叫综合征＂区域分离表达序列。将来自５ｐ的基因组片段克隆进ｐＳＰＬ３剪接载体，用以转染ＣＯＳ－７细胞。经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后，以ＵＤＧ法克隆剪接产物，并进行基因组来源、组织表达特异性及序列分析等鉴定。结果表明，基因组片段在实验系统中能被有效剪接，并得到了确为５ｐ来源的表达序列。证明外显子捕获技术能有效用于表达序列的筛选，但现有的剪接载体仍有较为严重的隐含剪接问题。