血小板源生长因子B链基因上游序列HMGI结合区的初步鉴定

目的:观察转录结构因子高迁移率蛋白I(HMGI)与血小板源生长因子B链(PDGF-B)基因上游序列的结合并初步鉴定HMGI的结合序列。方法:应用凝胶迁移率改变法(EMSA)观察重组人HMGI蛋白与PDGF-B基因上游-1758/+43bp片段的结合,并逐步确定与其结合的AT富含序列。结果:重组人HMGI蛋白能较特异地与PDGF-B链基因上游-1758/+43bp片段结合,分离到的两个HMGI结合片段,-1393/-1181bp和-190/+43bp,均含有AT富含序列TTTATAAA(-1333/-1326bp,-1314/-1307bp和-30/23bp)。HMGI能与含TT-TATAAA的合成寡核苷酸结合,并能促进转录因子NF-κB与拼接于旁侧的PDGF-B基因的切应力反应元件结合。结论:HMGI在体外能与PDGF-B链基因上游的TTTATAAA序列结合,可能参与PDGF-B基因的转录调控。

交感神经在慢性心理应激性免疫抑制中的作用

交感神经、儿茶酚胺类神经递质和免疫细胞膜表面的各型肾上腺素能受体与慢性心理应激性免疫抑制的产生、发展密切相关。慢性心理应激下 ,蓝斑和下丘脑腹正中核等脑区发出的信号可使交感神经兴奋 ,导致儿茶酚胺类神经递质的释放 ,并引起信号在细胞内进一步转导 ,这对免疫细胞的成熟、分化、增殖 ,激活以及转运等可产生重要的抑制性调节作用。

α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定细胞内ROS的产生量；用RT-PCR测定p47^phox mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47^phox蛋白的表达；用Western印迹测定ERK2及核因子（NF）-κB、应激蛋白（SP-1）和活化因子蛋白的表达。结果TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155，4％；α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF—α对ROS的诱导效应。TNF-α作用细胞24h后，p47^phox的mRNA表达水平较对照组高212．8％，蛋白的表达也明显高；α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47^phox mRNA表达水平低63．0％，蛋白表达水平也明显下降。p47^phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生。α-玉米赤霉醇预处理和p47^phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位，明显地抑制了NF—κB的核转位。结论α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF—α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路，主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47^phox亚基的表达。