HPV 58 L1改造基因的表达及其VLP产物抗血清制备

高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)慢性持续性感染是诱发宫颈癌的主要病因.体外表达的HPV主要衣壳蛋白(L1)可自组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),免疫后可诱导产生型别特异性中和抗体,有效保护机体免受同型病毒的感染,因此可望预防病毒感染及感染相关的宫颈癌等病变.HPV58是诱发我国妇女宫颈癌的主要高危型病毒之一,目前尚无针对HPV58的疫苗问世.本研究联合采用多种策略对HPV 58 L1野生型基因进行改造,获得HPV 58 L1改造基因,命名为HPV 58 mL1,用杆状病毒-昆虫细胞表达系统进行HPV 58 mL1的表达,CsCl密度梯度离心法纯化获得HPV58 mL1重组蛋白,电镜分析结果显示,重组蛋白形成直径约55 nm的VLP.皮下免疫新西兰兔和豚鼠,ELISA检测显示,免疫动物产生高滴度针对HPV 58 mL1 VLP的抗血清,免疫斑点印迹检测显示,抗血清是针对VLP表面表位的.本研究表达了均一性好的HPV 58 mL1 VLP,并获得两个种属的HPV 58 mL1 VLP抗血清,为进一步研究有效预防HPV 58感染的疫苗打下基础.

HPV 18 L1病毒样颗粒的表达纯化及其豚鼠抗血清制备

目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV18L1VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清。结果HPV18L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV18L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50nm的VLP,豚鼠免疫血清中HPV18L1VLP特异性抗体滴度达5.12×105。结论HPV18L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV18L1VLP疫苗的进一步研究打下基础。

HIV-1包膜蛋白疫苗免疫原选择及改造策略研究进展

尽管经过全球研究人员20多年的共同努力，目前仍无有效的HIV-1疫苗面世。由于HIV-1病毒可以通过多种方式逃避机体免疫应答，所以截至目前仍未找到可以有效诱导广谱中和抗体的免疫原或免疫策略，但该方面的研究从未止步。在美国和泰国开展的2个Ⅲ期临床试验显示，gp120亚单位疫苗对HIV-1感染并无保护效果，也不能在HIV-1感染后减缓疾病进展。

HIV-1 AE重组型疫苗构建及免疫原性研究

目的利用AE亚型的膜蛋白,研发抗HI V-1 AE重组型的疫苗并进行免疫原性评价。方法构建表达中国流行株97CNGX2F(HI V-1 AE2F)包膜蛋白gp140的重组痘苗病毒rVVT140AE。使用表达gp140的DNA疫苗和rVVT140AE用初免-加强方式免疫小鼠。免疫结束后第2周处死小鼠,分别检测特异性抗体滴度和特异性T细胞反应。结果本疫苗所活化的特异性抗体滴度在3 200和51 200之间,几何平均值为11 143;总T细胞免疫反应强度为(1 918±442)SFCs/106脾细胞,其中针对env1、env2、env3、env4肽池的免疫反应强度分别为(1 280±330)SFCs/106脾细胞,(66±16)SFCs/106脾细胞,(163±34)SFCs/106脾细胞和(409±96)SFCs/106脾细胞,均显著高于空载体对照组(<10 SFCs/106脾细胞)。结论本实验构建的HI V-1 AE2F株包膜蛋白gp140重组痘苗病毒疫苗可作为针对我国HI V-1流行株的候选疫苗免疫原。