默默耕耘的实验病理学家丁濂教授

中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学家丁濂研究员因病医治无效，于2014年4月13日在北京逝世，享年87岁。

人乳腺癌细胞系中上皮型钙黏连蛋白表达对其黏附和增殖的影响

目的 探讨上皮型钙黏连蛋白（E-cadherin,E-cad）表达对MDA-MB-231人乳腺癌细胞黏附力及增殖的影响.方法 采用脂质体转染方法将携带有E-cad基因的重组真核表达质粒E-cadpcDNA3转染入E-cad阴性MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过G418筛选,Western blot法鉴定出E-cad过表达的阳性单克隆细胞株.分别通过三种不同的黏附试验检测E-cad转染前后细胞自身黏附、与基质黏附及与其他细胞黏附能力的变化：免疫沉淀法检测表达的外源性E-cad能否与内源性连环蛋白（β-catenin,β-cat）发生相互作用.Western blot检测E-cad表达后细胞内β-cat、细胞周期蛋白（cyclin）D1蛋白的表达变化;MTT法检测细胞的生长和增殖能力状况;流式细胞仪检测转染E-cad前后细胞凋亡变化情况.免疫细胞化学直接二步法检测β-cat定位变化.结果 通过稳定转染,获得了稳定表达E-cad的两个细胞株Ecad-231-7和Ecad-231-9.MDA-MB-231细胞在不贴壁培养时大部分呈单细胞状态,而两个表达E-cad的细胞株都形成大细胞团;MDA-MB-231、Ecad-231-7和Ecad231-9与HCT116细胞共孵育30 min后的平均黏附率分别为39.0%、60.0%和59.5%.MDA-MB-231细胞在EDTA作用5 min后的平均脱落率为37.4%,Ecad-231-7和Ecad-231-9细胞分别下降为4.2%和7.2%,即E-cad表达后乳腺癌细胞的自身黏附力、与基质的黏附力及与其他细胞的黏附力均增强;且细胞内过表达的外源性的E-cad与β-cat结合,使细胞内cyclin D1表达下降,细胞增殖受到抑制.常规培养48 h后MDA-MB-231、Ecad-231-7和Ecad-231-9细胞的凋亡率分别为1.9%、2.0%和2.1%,E-cad表达对细胞的凋亡没有明显影响.二步法染色显示胞质内β-cat增加.结论 成功建立了稳定表达E-cad蛋白的单克隆细胞株Ecad-231-7和Ecad-231-9.表达的E-cad通过β-cat-cyclinD1途径增强癌细胞黏附力、抑制癌细胞增殖.

分化抑制蛋白1在小鼠树突状细胞肉瘤细胞分化中的作用

目的 研究降低分化抑制蛋白1（Id-1）的表达在树突状细胞肉瘤（DCS）细胞分化中的作用。方法 通过RNA干扰技术来降低DCS细胞株中Id-1蛋白的表达，Western blot和real-time PCR分别检测该蛋白在蛋白水平和mRNA水平上的变化；倒置显微镜下观察降低Id-1蛋白表达后DCS细胞形态的变化；Casy细胞计数分析仪检测细胞大小的分布情况；流式细胞仪检测细胞周期的变化。通过Westernblot和免疫组织化学检测树突状细胞的分化标志如Id-2、CD86、CD11c、MHC Ⅱ的变化。生长曲线及四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测DCS细胞的增殖情况的变化；通过Transwell和克隆形成率测定分别观察降低Id-1蛋白前后细胞侵袭、成瘤能力的变化。以不加siRNA的空白组和无关对照siRNA作阴性对照，以诱导分化剂丁酸钠作为阳性对照。结果 降低Id-1蛋白表达后DCS细胞分枝增多，细胞体积明显增大，核质比下降，G0／G1期细胞增多，S期细胞减少（P〈0．01），树突状细胞分化标志Id-2、CD86等表达上调，细胞增殖受到抑制，侵袭、成瘤能力减弱（P〈0．01）。结论 通过RNA干扰技术降低Id-1基因的表达，可以促进恶性实体肿瘤细胞的分化，降低恶性程度。