阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究

用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞，采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞。用间接免疫荧光流式细胞术检测，ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常，而ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。３Ｈ－肌醇标记实验证明，正常红细胞膜区带４．１处有较高的放射活性，而ＰＮＨ红细胞极低，ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞完全无放射活性。用ＡｃｈＥ抗体做免疫印渍实验证明了ＡｃｈＥ存在区带４．１部位。ＤＭＰＣ诱导正常和ＰＮＨ红细胞，检测二者囊泡化的程度，发现ＰＮＨ病人红细胞远比正常人红细胞易于囊泡化。

药物诱导的小鼠红白血病细胞沿红系分化过程中基因表达的差异显示分析

应用mRNA差异显示技术分析了药物诱导MEL细胞沿红系分化过程中基因表达的改变。以六个锚定引物和六个随机引物共36种组合进行差异显示分析，得到67个差异片段。对部分片段进行克隆测序，获20个片段的序列，其中12个新的表达序列标签。以反向斑点杂交检测部分差异显示带的差异性，阳性率为27／39（69％）。

降落聚合酶链反应技术在低密度脂蛋白受体基因点突变研究中的应用

目的 建立降落 (TOUCHDOWN)聚合酶链反应 (PCR)方法 ,快速检测家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体 (LDL R)基因点突变。方法 设计LDL R基因 2 1对引物 ,根据TOUCHDOWN原理设计包括启动子和 18个外显子特异性片段在内的PCR程序 ,通过试验选择PCR最佳反应条件 ,在同一程序中分别对 2 1个片段进行扩增 ,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物 ,纯化后DNA产物测序分析该方法的特异性。结果 编设退火温度范围从 6 8℃降至 5 4℃的PCR程序 ,优化PCR扩增条件 ,电泳检测采用同一程序同时分别扩增的LDL R基因 2 1个片段条带清晰 ,测序证实了此组片段的特异性。结论 成功建立降落PCR方法 ,提示此法为LDL R基因突变筛查提供了快速可靠的手段。

小而密低密度脂蛋白对内皮细胞间黏附分子表达的影响

目的 探讨小而密低密度脂蛋白 (sLDL)致动脉粥样硬化 (AS)的可能机制。方法 两步超速离心法提取人sLDL作为试验组 ,与培养的人脐静脉内皮细胞共同孵育 12h。设置大而轻LDL、氧化sLDL、氧化大而轻LDL对照组。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定各组孵育细胞内皮细胞细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的蛋白表达。同时用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测孵育细胞ICAM 1基因表达 ,以磷酸甘油醛脱氢酶基因 (GAPDH)扩增产物作为内对照。结果 与其他对照组比较 ,sLDL显著诱导培养细胞的ICAM 1信使核糖核酸 (mRNA)和蛋白表达。结论 sLDL对内皮细胞功能的有较强的损伤作用 ,与AS的发生关系密切。

人工耳蜗植入者连接蛋白26基因(GJB2)突变分析

目的研究重点探讨在接受人工耳蜗植入的患者中,连接蛋白26基因(GJB2)突变发生的几率、突变形式。方法取115例中国人接受人工耳蜗植入的患者及健康对照109例。取外周血提取基因组DNA,经聚合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)及直接测序分析。结果36·5%(42/115)的人工耳蜗植入患者发现GJB2基因突变,其中41%(41/100)的非综合征型耳聋患者发现GJB2基因突变,内耳畸形组仅1例(1/15)。研究中共发现突变形式有11种,其中235delC是最常见的突变类型,等位基因频率占全部人工耳蜗植入患者的18·3%(42/230),占非综合征型耳聋组的21·0%(42/200)。187G>T和230G>A突变是首次发现的新突变。结论GJB2基因突变是中国人工耳蜗植入患者主要的致聋基因突变,235delC是其最常见的突变类型。

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因复合纯合突变一例

目的 检测家族性高胆固醇血症 (FH)患者低密度脂蛋白受体 (LDL R)基因点突变 ,分析基因型与临床表型间的关系 ,探讨其分子病理机制。方法 以 1例临床诊断为FH纯合子患儿及其父母的基因组DNA为模板 ,用降落PCR方法 ,在同一程序中分别对LDL R基因的启动子和全部 18个外显子片段进行扩增 ,琼脂糖凝胶电泳检测 ,扩增产物直接进行核苷酸序列分析 ,并检索FH突变数据库 (www ucl ac uk/fh)。此外采用PCR 限制性内切酶技术 ,检测载脂蛋白 (Apo)B10 0 基因Q35 0 0R突变 ,以排除家族性ApoB10 0 缺陷症。结果 该患儿及其父亲第 4外显子发生Cys12 2 →Tyr(C12 2Y)杂合错义突变 ,同时患儿及其母第 9外显子发生Thr3 83 →Ile(T383I)杂合错义突变 ,因此该患儿LDL R基因第 4、9外显子各存在一个杂合突变 ,上述突变尚未在FH突变数据库见到。未检测出患儿及其父母ApoB10 0 Q35 0 0R突变。结论 此患儿为LDL R基因存在C12 2Y、T383I复合纯合突变并分别来自其父母 ;以上两位点突变可引起FH ;是FH患者LDL R基因的一种新突变类型。

变性高效液相色谱技术在家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变检测中的应用

目的以变性高效液相色谱(DHPLC),分析检测家族性高胆固醇血症(FH)一汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变,以明确诊断。方法收集临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族一个家系共37名成员,其中30人为一级和二级亲属,7名为亲属配偶作为对照,提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增LDLR基因包含启动子和全部基因编码区(118外显子)及临近的内含子序列共21个片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物。采用DHPLC技术检测了LDLR基因,对洗脱曲线异常者进行核苷酸序列分析。结果该家系中发现4处变异,其中1处经核苷酸序列测定明确了突变的性质为第3内含子的剪接突变,并在此家系5名成员中得到证实,而对照组中未检出。结论成功地建立了以DHPLC筛查LDLR基因点突变的方法及技术参数,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。