葛根素调节血管平滑肌细胞凋亡相关基因在斑块组织中表达的研究

目的 差异筛选葛根素促进VSMC凋亡相关基因 ,观察其在动脉粥样硬化组织中的表达 ,探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制。方法 葛根素诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡 ,提取总RNA ,荧光标记差异显示反转录 PCR法筛选差异基因片段 ,克隆测序及同源性分析 ,Northern印记杂交鉴定 ,组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平。结果 差异筛选出全长 733bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白 94基因高度同源 ,Northern印记杂交显示该基因表达量随着葛根素浓度而增加 ;兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论 ①证实葡萄糖调节蛋白 94基因在葛根素促进增殖血管平滑肌细胞凋亡过程中表达增高 ,可能是葛根素作用靶点之一 ;②证实该基因片段在动脉斑块细胞质中表达增高 ,提示如能上调该基因促进需管平滑肌细胞凋亡 ,将有可能对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。

硫化氢对低氧性肺动脉高压调节作用的研究

目的 研究硫化氢对低氧性肺动脉高压 (HPH)的调节作用。方法 Wistar大鼠随机分为对照组(n =8)、低氧组 (n =5 )、低氧 +NaHS组 (n =7)。低氧处理采用常压低氧方法 ,控制氧浓度在 (10± 0 .5 ) % ,每天 6h ,共持续 2 1d。低氧 +NaHS组每天低氧前腹腔注射NaHS 14μmol/kg。采用右心导管法测定肺动脉压 ,称量右心室游离壁和左室 +室间隔的湿重比值作为右心室肥厚指标。结果 低氧组大鼠经 3周低氧后形成明显肺动脉高压 (PH) ,伴右心室肥厚。与低氧组相比 ,低氧 +NaHS组大鼠的肺动脉压显著降低 ,右心室肥厚程度明显减轻。

硫化氢对低氧性肺动脉高压中氧化应激的调节作用

目的：探讨硫化氢（H2S）对低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension，HPH）形成中氧化应激的调节作用。方法：选取体重180～200g的健康雄性Wistar大鼠20只，随机分为对照组、低氧组、低氧＋硫氢化钠（NaHS）组。建立低氧模型21d后，监测其血液动力学变化；应用比色法检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶（super．oxidedismutase，SOD）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T—AOC）、氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione，GSSG）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）、丙二醛（malondiadehyde，MDA）、羟自由基（hydroxyradical，·OH）的含量；应用实时荧光定量PCR的方法检测SOD基因转录水平的变化。结果：经3周低氧处理，大鼠形成HPH和肺血管结构重构，表现为平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）明显增加[（23．7±2．2）mmHg vs（16．3±3．7）mmHg，P〈0．01]，右室重量与左室及室间隔重量的比值[RV／（LV＋SP）]升高（P〈0．01）；给予外源性H2S供体NaHS后，可以降低肺动脉压力[（16．3±2．8）mm Hg vs（23．7±2．2）mmHg，P〈0．01]，减少RV／（LV＋SP）（P〈0．01）；H2S供体可以提高T-AOC 18．8％（P〈0．01），减少GSSG的含量23．2％（P〈0．01），但对SOD的活性及基因转录水平无明显影响。结论：H2S在HPH形成中的氧化应激过程中发挥抗氧化作用，其作用机制部分是通过减少GSSG的含量，从而提高机体的抗氧化能力。

内源性硫化氢在大鼠低氧性肺动脉高压中的作用

目的 :观察低氧性肺动脉高压 (HPH)时 ,内源性硫化氢生成的变化以及应用外源性硫化氢处理对HPH的影响 ,探讨气体分子硫化氢在HPH发病中的作用。方法 :Wistar大鼠随机分为对照组 (n =6 )、低氧组 (n =7)和低氧 +NaHS组 (n =6 )。低氧处理采用吸入氧浓度为 10 % (体积分数 )的气体 ,每天低氧 6h ,共持续 3周。低氧 +NaHS组大鼠每天低氧前腹腔注射NaHS (0 78mg·kg-1)。低氧结束后用右心导管法测定肺动脉压 ,测定右心室 /(左心室 +室间隔 ) [RV/ (LV +SP) ]比值 ,弹力纤维染色观察肺小动脉显微结构改变 ,透射电镜观察肺小动脉超微结构 ,酶促反应法测定肺动脉和肺组织中硫化氢合酶活性 ,定量RT PCR方法测定肺组织中胱硫醚 γ 裂解酶(CSE)基因表达水平。结果 :与对照组相比 ,低氧组大鼠平均肺动脉压升高 4 5 .6 % (P <0 .0 1) ,RV/ (LV +SP)比值增加 4 1% (P <0 .0 1) ;光镜下肺小动脉相对中膜厚度 (RMT)和相对中膜面积 (RMA)分别增加 4 1%和 39% (P <0 .0 1) ;电镜下肺小动脉内皮细胞增生 ,平滑肌细胞呈合成表型改变 ;硫化氢合酶活性在肺动脉和肺组织中分别降低 5 2 %和 5 4 % (P <0 .0 1) ,而且与平均肺动脉压均呈明显负相关 ;肺组织中硫化氢合酶基因表达水平下调 5 3%(P <0 .0 1)。与低氧组相比 ,低氧

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织硫化氢的变化

本文旨在探讨低氧对大鼠内源性硫化氢体系的变化。采用生化反应方法测定血浆中硫化氢的含量和肺组织中硫化氢合酶的活性 ,采用定量竞争性RT PCR的方法检测肺组织中胱硫醚 γ 裂解酶 (CSE)mRNA的含量。结果显示 ,与对照组相比 ,低氧组大鼠的血浆硫化氢含量明显减少 [(1 92 2± 2 2 1 ) μmol Lvs (30 1 6± 32 4 ) μmol L ,P <0 0 1 ) ],肺组织中硫化氢合酶的活性明显下降 [(0 1 2 7± 0 0 2 3)vs (0 2 78± 0 0 99)nmol mgwettissue·min ,P <0 0 1 ],CSEmR NA的含量明显减少 [(1 0 2± 0 1 5 )× 1 0 - 6 fmolvs (2 1 7± 0 2 2 )× 1 0 - 6 fmol,P <0 0 1 ]。以上研究表明 。

葛根素能诱导血管平滑肌细胞凋亡部分相关基因差异表达

为观察葛根素诱导兔血管平滑肌细胞凋亡过程中相关基因mRNA的差异表达 ,探讨葛根素促进血管平滑肌细胞凋亡的分子机制。应用葛根素体外诱导兔血管平滑肌细胞凋亡模型和mRNA差异显示技术观察葛根素诱导与正常细胞间基因差异表达 ,将葛根素作用后高表达的cDNA片段克隆、测序 ,与GeneBank进行同源性分析 ,并用32 P标记探针 ,再与不同浓度葛根素作用的血管平滑肌细胞总RNA进行Northern印迹分析。结果发现 ,1、差异显示图谱出现一些仅在葛根素组高表达而在对照组无表达的cDNA片断。2、将其序列与GeneBank进行同源性比较 ,证实其中 3个序列均与兔葡萄糖调节蛋白 94基因高度同源。3、Northern杂交证实兔葡萄糖调节蛋白 94基因在葛根素作用的血管平滑肌细胞中高表达 ,与差异显示图谱一致。4、灰度扫描分析 ,兔葡萄糖调节蛋白 94基因在血管平滑肌细胞中表达量与葛根素浓度成正比。上述结果提示 ,葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡过程中上调了兔葡萄糖调节蛋白 94基因表达 。

山茛菪碱与川芎嗪预防肺水肿时大鼠血气及红细胞超氧化物歧化酶的变化

肾上腺素所致肺水肿类似中枢性肺水肿,具有动力性及非动力性双重机制。此时,动脉血中PaO_2、O_2Sat明显下降、PaCO_2明显上升,pH下降,红细胞超氧化物歧化酶含量下降,654-2与川芎嚓能防止上述异常变化,并使之趋于正常。实验显示了654-2及川芎嗪对肺水肿防止作用的部分机理。

高肺血流量及长期雾化吸入硝酸甘油对肺血管舒张反应的影响

目的 以左向右分流的大鼠为对象 ,观察高肺血流量及长期雾化吸入硝酸甘油 (NTG)对肺血管舒张反应的影响。方法 雄性Wistar大鼠 1 7只 ,分为吸入组 (n =5)、分流组 (n =5)和对照组 (n =7)。分流组和吸入组用手术造成腹主动脉和下腔静脉之间左向右分流。手术后饲养 1 2周 ,开始压力喷射雾化吸入。吸入组吸入NTG ,分流组和对照组吸入生理盐水 ,每日吸一次 ,每次吸 1 0min ,共吸 3周。之后取肺动脉环离体灌流 ,观察其对乙酰胆碱 (Ach)、硝普钠、NTG的舒张反应。结果 与对照组相比 ,吸入组和分流组的肺动脉环对Ach舒张反应明显减弱 (P <0 .0 5) ;三组血管环对硝普钠和NTG舒张反应无明显差别。结论 高肺血流量产生的高切应力损伤了肺动脉对Ach的舒张功能 ,长期雾化吸入NTG没有使之改善。

佛波酯对异丙肾上腺素引起的心肌细胞蛋白激酶A激活的影响

心肌细胞经ＰＫＣ激活剂十四酰佛波乙酸酯（ＰＭＡ）处理２０分钟后，心肌细胞浆ＰＫＣ活力下降，同时细胞膜ＰＫＣ增加，提示心肌细胞ＰＫＣ被激活。通过测定ｃＡＭＰ存在及不存在情况下，３２Ｐ由［γ－￣（３２）Ｐ］－ＡＴＰ参入ⅡＡ型组蛋白的放射性强度差值，计算细胞内未激活ＰＫＡ全酶活力。心肌细胞经异丙肾上腺素处理２分钟，细胞浆和细胞膜ＰＫＡ活力明显减少。预先经ＰＭＡ处理２０分钟后，异丙肾上腺素引起的细胞浆和细胞膜ＰＫＡ活力减少幅度明显减少。心肌细胞经ＰＭＡ作用２４小时后，对异丙肾上腺素激活ＰＫＡ的反应性恢复。结果表明ＰＫＣ激活后，在ＰＫＡ水平可以减弱心肌细胞对β受体激动剂异丙肾上腺素的反应性。