人乳头瘤病毒与中国妇女宫颈癌相关性的研究(Ⅲ.子宫颈增殖性病变中人乳头瘤病毒16型基因组物理状态的分析)

本研究以a—^(32)P—dCTP标记的HPV—16DNA为探针,应用限制性内切酶技术和Southern印迹杂交方法进一步分析了32例HPV—16DNA斑点杂交阳性的宫颈活检标本中HPV—16基因组的物理状态。结果表明:正常宫颈上皮和宫颈良性增殖性病变(宫颈湿疣)中,HPV—16DNA均以染色体外游离基因的形式存在;宫颈癌前病变(宫颈上皮内新生物)中,HPV—16DNA以游离和整合两种状态共存;宫颈恶性增殖性病变(宫颈癌)中,HPV—16DNA完全以整合的形式存在于宿主细胞基因组中。以上结果提示:宫颈上皮中HPV—16基因组的整合在宫颈癌的发生发展过程中可能起着重要作用。

人乳头瘤病毒与中国妇女宫颈癌相关性的研究(Ⅳ.子宫颈癌组织中HPV—16基因组亚基因片段的检测)

本研究以a—^(32)P—dCTP标记的HPV—16基因组中三组亚基因片段为探针,应用制(?)内切酶技术和Southern印迹杂交方法进一步分析了9例HPV—16基因组已发生整合宫颈癌组织DNA中HPV—16基因组各亚基因片段存在的情况。结果表明,在整合状态下,PV—1基因组的部分L1 L2区和大部分E2 E4区是缺失的,而HPV—16基因组的E6 E7区■完整地被保留下来。提示HPV—16基因组的缺失区域很可能是其基因组发生断裂整合部位,而HPV—16基因组的E6 E7区可能是其导致细胞恶性转化的致癌基因。

肺癌中p53基因突变分析及人乳头瘤病毒检测

拟从分子生物学水平探讨肺癌的早期诊断问题。实验采用ｐ５３基因中第６，７，８外显子各设计一对引物，对３４例肺癌手术标本进行聚合酶链反应扩增（ＰＣＲ），产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行单链构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄ－ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｏｒ－ｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ），发现３０例发生突变，突变率为８８．２％，其中鳞癌１０／１２例，腺癌８／１０例，小细胞癌３／３例，大细胞癌１／１例，肺泡细胞癌５／５例，腺鳞癌３／３例。在突变的１例鳞癌中同时伴有杂合性缺失。统计学分析表明，ｐ５３突变与组织分型、分化程度、临床分期及吸烟史无密切相关。提示ｐ５３突变在肺癌发生过程中起某种作用，可能主要影响肺癌发生的早期。本实验还运用多重引物ＰＣＲ方法对３４例肺癌标本进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶＤＮＡ）检测，发现４例阳性，且皆为鳞癌；而其中３例检测出ｐ５３突变。

电子显微镜与聚合酶链反应技术检测阴道及子宫颈人乳头瘤病毒

应用电子显微镜（电镜）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１９９０年４月至７月，因外阴瘙痒、白带多就诊检查发现阴道下１／３或子宫颈有异常突起，病理及核酸分子杂交技术检查证实为人乳头瘤病毒（ＮＰＶ）感染的标本４７份，进行ＨＰＶ检测。ＰＣＲ检测阴道尖锐湿疣ＨＰＶ６，１１的阳性率为９２．６％，ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８混合感染阳性率为３．７％。电镜下未观察到典型的ＨＰＶ颗粒，观察到挖空细胞核内存在着染色质之间颗粒及染色质周围颗粒，在３例斑点杂交ＨＰＶ１１阳性者的标本中观察到核内小体。基底细胞也有改变。