M-FISH在实体肿瘤研究中的应用

本文综述了M-FISH在实体肿瘤研究的最新进展。介绍了M-FISH技术的原理,讨论了M-FISH使用的探针、M-FISH在肿瘤细胞系研究和肿瘤组织标本研究中的应用以及M-FISH技术的优缺点。

c-Jun和c-Fos及其与人类肿瘤

Jun蛋白和Fos蛋白组成的二聚体复合物AP-1是细胞核内重要的转录因子,细胞的外界刺激信号从上游的信号通路传递至AP-1,并激活AP-1的功能,进而调节其下游一系列基因启动子区域含有AP-1结合位点靶基因的转录表达,使细胞对外界刺激作出适应性的反应。本文综述了jun和fos基因的结构及其与细胞增殖、分化、凋亡以及与肿瘤发生发展关系的研究进展。

抗凋亡Bcl-2家族蛋白拮抗分子在肿瘤治疗中的研究进展

Bcl-2家族蛋白是细胞凋亡通路的关键蛋白分子。抗凋亡Bcl-2家族蛋白和促凋亡Bcl-2蛋白家族成员之间的失平衡是肿瘤发生的重要原因和标志性事件。Bcl-2家族蛋白也因此成为肿瘤治疗的重要分子靶点。文章就Bcl-2抗凋亡家族蛋白的拮抗分子研究进展进行综述。

食管癌早期癌变的研究和annexin I表达的意义

目的 检查annexin Ⅰ在食管癌前病变到食管鳞癌不同病变过程中的表达。方法 按照研究食管癌早期病变的病理学取材方法取材,选择含有不同程度癌前病变的食管鳞癌标本11例,经连续取材制片和免疫组化分析,比较同一病例由食管癌前病变发展到食管鳞癌的全过程中annexin Ⅰ的表达改变。结果 Annexin Ⅰ表达水平在食管正常鳞状上皮中呈强阳性(11/11,100％),低度癌前病变(轻度不典型增生和中度不典型增生)减弱(3/8,37.5％),高度癌前病变(重度不典型增生和原位癌)明显减弱(12/14,85.7/％),食管浸润癌和淋巴结转移癌中阴性或显著减弱(15/15和3/3,100％)。Annex.in Ⅰ在食管低度癌前病变中的改变具有显著意义(P=0.002)。结论 Annexin Ⅰ是食管鳞癌早期侯选标志蛋白,在食管低度癌前病变时表达异常。

宫颈癌细胞系中干细胞球样细胞的筛选与鉴定研究

目的探讨从人宫颈癌细胞系Ca Ski中分离培养宫颈癌干细胞球样细胞的可行性,并观察其体外生物学特性。方法采用肿瘤干细胞无血清悬浮培养法富集Ca Ski细胞系球样细胞,通过体外传代培养、添加血清诱导分化等技术鉴定其干性,利用流式细胞技术检测细胞周期,并应用蛋白印记法及细胞免疫荧光等方法从分子水平检测相关因子的表达。结果从Ca Ski细胞系中分离到的干细胞球样细胞可以在无血清培养基中悬浮生长成细胞球,并可在体外稳定传代,具有自我更新能力和分化潜能;肿瘤干细胞球样细胞多处于G0/G1期。与其他分子标志物相比,干细胞球样细胞的CD44明显高表达;与亲本细胞相比,干细胞球样细胞的干性相关因子SOX2、OCT4、β-catenin表达较高。结论利用肿瘤干细胞无血清悬浮培养法可以从Ca Ski细胞系中分离富集到具有稳定肿瘤干细胞性质的细胞群。

R etronectin和CD3mAb联合培养CD56^+细胞用于治疗胰腺癌的研究

目的探讨CD56+细胞体外富集培养的扩增效率和对JF305胰腺癌细胞系的杀伤效果,评价这种MHC非限制性杀伤效应细胞作为新型过继免疫治疗细胞的应用价值。方法通过CD56磁珠富集系统分离出外周血中CD56+细胞,分别验证CD3mAb和Retronectin对细胞增殖作用的影响,并通过流式细胞技术检测细胞的CD3、CD16和CD56表达情况,MTS法检测体外杀伤胰腺癌细胞JF-305的效果。结果磁珠系统能够有效的富集CD56+细胞,CD3mAb和Retronectin联合应用可使细胞的增殖倍数明显提高,且培养后细胞对于JF-305具有较强的杀伤活性。结论 CD3mAb和Retronectin联合培养CD56+细胞的方法能够提高细胞的增殖效率和杀伤活性,具有良好的临床细胞治疗应用前景。

PUMA基因在肿瘤治疗方面的研究进展

p53上调凋亡调控因子（PUMA）是近年发现的Bcl-2家族成员，因其可被p53快速诱导并具有强大促凋亡作用而在生命科学的研究领域受到广泛关注。PUMA不仅能够诱导多种肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，还能增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性，是非常有前景的肿瘤基因治疗靶点。也有新的研究发现PUMA还在肿瘤发生过程中承担着更多的生物学功能。

黑色素瘤分化相关基因-7研究进展

黑色素瘤分化相关基因 7(MDA 7)是一分泌型肿瘤细胞抑制因子。许多肿瘤细胞MDA 7mRNA水平明显高于原发和转移的人黑色素瘤细胞。MDA 7通过抑制血管生成、激活GADD等信号传导途径 ,促进肿瘤细胞的生长抑制和凋亡 ,而对正常细胞无明显影响。MDA 7是第一个被报道的具有白介素作用的肿瘤抑制分子。

PUMA的研究进展

PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是近年发现的可被内外源性p53快速诱导、具有强大促凋亡作用的Bcl-2蛋白家族一员。它通过BH3结构域与其他Bcl-2家族蛋白相互作用,诱导细胞色素c释放,引起凋亡。PUMA引起的凋亡有两种(p53依赖的和p53不依赖的)调控通路,已有研究表明PUMA敲除可显著抑制细胞凋亡。对于该基因的调控机制、作用机制及在肿瘤治疗中的应用等方面的问题,正待深入研究。

中国人群结直肠癌中PIK3CA基因突变分析

目的:PIK3CA基因编码ⅠA型磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3Ks)的p110催化亚基,致癌性的PIK3CA突变可通过激活P13K通路参与结直肠癌的发生发展。PIK3CA在西方结直肠癌患者中有较高的突变频率,但其在中国人结直肠癌中的突变情况尚不明确。本研究旨在探讨中国人结直肠癌中PIK3CA基因的突变频率、分布特点及其与结直肠癌的关系。方法:采用PCR产物直接测序法,对79例中国结直肠癌患者肿瘤标本中PIK3CA基因外显子9和外显子20中的突变进行检测分析。结果:在79例肿瘤标本中检出PIK3CA基因突变率为8.9%(7/79),其中外显子9突变率为6.3%(5/79),外显子20突变率为2.5%(2/79),其突变热点分布与既往文献报道基本相符。结论:中国人结直肠癌中存在一个PIK3CA基因突变的亚群,其E542K、E545K和H1047R突变,与以往报道的该基因的致癌性突变相一致,可能是这部分结直肠癌中PI3K信号通路激活的原因。

肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析

[目的]探讨有效的肿瘤生物治疗新思路,用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能(自我更新、侵袭和耐药)的影响。[方法]采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA在Bel7402-V3亲本及sphere细胞中的表达;甲基纤维素成球实验和Transwell小室侵袭实验分别检测抗体对Bel7402-V3亲本细胞成球能力和侵袭能力的影响;CCK8法及IC50法检测联合抗体对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响。[结果]流式荧光结果显示:标志物ESA、单抗15D2、单抗9A9所识别的细胞比例在Bel7402-V3 sphere细胞中比在亲本细胞中分别富集了2.6倍、4.1倍、2.0倍;在Bel7402-V3亲本和sphere细胞中,联合单抗与标志物共染比例(9A9+15D2与ESA)大于单抗分别与标志物共染比例之和[(9A9+ESA)+(15D2+ESA)];单抗9A9与15D2联合时对Bel7402-V3亲本细胞的成球抑制率和侵袭抑制率均明显高于等浓度的单种单抗对Bel7402-V3亲本细胞的功能抑制;经联合单抗处理的Bel7402-V3亲本细胞耐药能力较经等浓度单种单抗处理的细胞耐药能力显著降低[9A9+15D2:IC50为0.32μg/ml,9A9:IC50为0.58μg/ml,15D2:IC50为0.56μg/ml。[结论]肿瘤干细胞中存在不同亚群,其在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。联合多靶点的抗体治疗能显著提高疗效。

多色荧光原位杂交应用于食管鳞状细胞癌早期诊断的探讨

背景与目的:染色体畸变检测已被用作一些癌症的诊断指标,但食管癌迄今尚无染色体水平的标志。本研究旨在分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)及其癌前病变部分染色体畸变情况,探讨多色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)辅助ESCC早期诊断及癌前病变风险预警的可行性。方法:选取文献报道最常发生改变的3、8、10、12、17和20号染色体,用其特异性着丝粒探针,采用M-FISH对来自113个病例的124份食管病变组织间期细胞核进行分析,统计各染色体的畸变情况,并分析其与ESCC染色体增加(增益)与临床病理参数之间的关系。结果:3、8、10、12、17和20号染色体在ESCC中增益畸变率分别为80.9%(93/115)、81.0%(94/116)、70.5%(79/112)、75.9%(85/112)、68.7%(79/115)和82.8%(48/58),与各项临床参数之间的相关性均无统计学意义(均P>0.05)。同时,6个染色体在ESCC癌前病变中的增益畸变率分别为62.5%(5/8)、75.0%(6/8)、62.5%(5/8)、87.5%(7/8)、87.5%(7/8)和100%(3/3);在早期ESCC的增益畸变率分别为80.0%(12/15)、93.8%(15/16)、71.4%(10/14)、64.3%(9/14)、75.0%(12/16)和63.6%(7/11)。结论:3、8、10、12、17及20号染色体在ESCC及其癌前病变组织中均存在较高的染色体数目畸变率;M-FISH检测有助于早期诊断ESCC,并可能作为ESCC癌变风险预警的一种方法。

组织芯片技术检测食管癌前病变相关预警标志物

目的:检测annexin Ⅰ,Grp94,p53,Ki-67四种侯选肿瘤标志物在食管癌及癌前病变中的表达情况,为食管癌的早期检测提供依据. 方法:72例单纯手术切除食管鳞癌及其癌旁伴有的不同程度癌前病变,构建组织芯片;应用免疫组化方法检测annexin Ⅰ,Grp94,突变型p53,Ki-67蛋白在食管鳞癌及不同程度癌前病变中的表达差异. 结果:四种蛋白在食管癌前病变中均有异常表达,与正常鳞状上皮比较存在显著性差异:annexin Ⅰ在低度癌前病变组(轻度不典型增生/中度不典型增生)丢失率为68.3%,(P=0.000);p53和Ki-67的阳性表达率分别为67.6%和71.1%(P=0.000);Grp94在早期浸润性癌呈极显著过度表达,表达增强率62.0%(P=0.000). 结论:Annexin Ⅰ,Ki-67,p53蛋白为食管癌早期预警研究提供了重要线索;Grp94蛋白作为食管鳞癌进展期标志物具有参考价值.

食管鳞癌中clusterin的糖基化修饰和表达定位改变

目的:通过分析clusterin的糖基化翻译后修饰状态和定位改变,探讨clusterin在食管鳞癌发生过程中可能的分子机制。方法:对23例食管鳞癌组织及其配对正常食管上皮标本,采用蛋白去糖基化和免疫印迹方法分析不同clusterin蛋白异构体的糖基化修饰状态;采用免疫组化方法分析食管鳞癌组织clusterin异构体定位改变。结果:通常成熟型clusterin在还原状态下相对分子质量为40 000,是一种糖基化的蛋白质,定位于正常食管上皮基底膜下食管黏膜层的疏松结缔组织中并经食管腺分泌到食管黏膜表面和血浆中。23例食管鳞癌组织中clusterin蛋白糖基化修饰均异常,未成熟的clusterin前体和核型clusterin聚集在癌细胞内,而糖化的成熟型clusterin在食管黏膜基质层减少并消失。结论:食管鳞癌中clusterin蛋白的去糖基化修饰及其定位改变可能与肿瘤发生发展密切相关。

血清PIVKA-Ⅱ在肝癌诊断中的应用

目的检测肝癌患者血清中的人异常凝血酶原即维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白（PIVKA—Ⅱ）的浓度，并评价其对肝癌的诊断价值。方法采用PIVKA—Ⅱ和AFP检测试剂盒，分别对136例治疗前的肝癌患者（包括80例早期肝癌和56例中晚期肝癌），56例肝炎患者和136例健康者血清样本进行检测。运用受试者工作特性曲线（ROC）分析PIVKA—Ⅱ和甲胎蛋白（AFP）的检测效能，并确定PIVKA—Ⅱ检测肝癌的临界值。比较PIVKA—Ⅱ和AFP检测肝癌的灵敏度和准确率。结果健康组、慢性肝炎组、早期肝癌组和中晚期肝癌组的血清PIVKA—Ⅱ的中位浓度分别为18．0（15．0～20．0）mAU／ml、18．0（14，0～23．0）mAU／ml、345．0（31．8～3787．0）mAU／ml和1008．5（30．3～25788．0）mAU／ml，早期肝癌组显著高于健康组（P〈0．001）和慢性肝炎组（P〈0．001），低于中晚期肝癌组（P=0．375）。血清PIVKA—Ⅱ检测肝癌的曲线下面积（AUC）为0．936（95％C10．908—0．964），显著优于AFP的检测能力[VS．0．848（95％c10．800～0．896），z值=3．580，P〈0．001]。PIVKA-Ⅱ检测肝癌的最佳临界值为25．5mAU／ml，此时灵敏度为84．6％，特异度为90．6％。联合PIVKA—Ⅱ和AFP检测，可增加肝癌诊断的灵敏度（VS．PIVKA—Ⅱ，P=0．036；vs．AFP，P〈0．001）。结论血清PIVKA—Ⅱ对于肝癌的诊断效能优于AFP，可作为肝癌早期筛查的血清标志物应甩于临床，为肝癌的早诊早治提供帮助。

YKL-40表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系

目的探讨甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)在子宫内膜癌患者的组织和血清中的表达与其临床病理因素的关系。方法采用SP免疫组织化学方法和ELISA方法检测YKL-40在31例子宫内膜癌、10例子宫内膜不典型增生和10例子宫内膜正常者的组织和血清中的表达,并用SPSS 17.0统计软件包分析YKL-40表达与子宫内膜癌的临床病理危险因素的关系。结果①子宫内膜癌患者的YKL-40血清浓度(中位数102.58 ng/ml)明显高于子宫内膜不典型增生(中位数58.20 ng/ml)和正常对照者(中位数37.04 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05);且血清YKL-40表达水平与肿瘤分期呈正相关(P=0.046),但与组织学分级、淋巴结转移、腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学结果无关(P>0.05)。②YKL-40在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为45.2%(14/31).明显高于子宫内膜不典型增生的10.0%(1/10)和正常对照者的10.0%(1/10).差异有统计学意义(P<0.05),且YKL-40阳性表达与组织学分级呈正相关(P=0.049),但与临床分期和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 YKL-40在子宫内膜癌的组织和血清水平均呈高表达,且组织中的阳性表达与肿瘤的组织学分级呈正相关,血清中表达与肿瘤分期呈正相关提示YKL-40可能与子宫内膜癌的发生、发展有关,有望成为子宫内膜癌的诊断和/或预后相关的分子标志物,但尚需进一步验证。

microRNAs与乳腺癌

microRNAs（miRNAs）是一类长约21～24个核苷酸的小分子非编码RNA，通过与位于靶基因mRNA 3＇UTR 区域的特异性结合位点互补配对结合，促进靶基因mRNA 的降解和/或抑制翻译过程，从而行使调节基因表达的功能。miRNAs广泛存在于真核细胞内，参与了细胞的分化、增殖、凋亡、周期调控、迁移以及肿瘤的发生发展等多种生物学进程。miRNAs表达谱是一类潜在的强有力的评估肿瘤发生、发展、诊断、治疗及预后的生物学指标，在人类肿瘤的不同类型中均存在显著差异。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，不同类型的乳腺癌组织中miRNAs的表达谱也不同。本文对目前为止发现的一些与乳腺癌发生发展、转移及治疗反应等相关的miRNAs及其下游靶基因在乳腺癌中的表达及作用进行综述。

泛素-蛋白酶体途径降解胰腺癌细胞系中凝溶胶蛋白

目的探讨胰腺癌中泛素-蛋白酶体途径对凝溶胶蛋白(gelsolin)的降解作用。方法用特异性蛋白酶体抑制剂lactacystin处理胰腺癌细胞系BxPC-3和PANC-1,经Western blot检测凝溶胶蛋白的表达,免疫沉淀细胞内凝溶胶蛋白,分析沉淀蛋白的泛素化。结果BxPC-3细胞系经lactacystin作用12h后,细胞内凝溶胶蛋白含量较对照组和处理前明显升高(P<0.05),而且细胞内的凝溶胶蛋白表现出与泛素分子的相互作用。结论泛素-蛋白酶体途径对凝溶胶蛋白的降解作用,可能是胰腺癌中凝溶胶蛋白表达降低的原因之一。

MTA1转基因小鼠的构建及鉴定

目的将人的MTA1外源基因整合到C57BL/6J小鼠中,构建稳定高表达MTA1的小鼠模型。方法通过RT-PCR方法克隆人的MTA1编码序列,将MTA1插入真核表达载体pcDNA3.1构建pcDNA3.1-MTA1载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTA1特异性的引物经PCR鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western-blot及免疫组化方法检测MTA1在转基因小鼠全身级织表达情况。结果成功构建了MTA1转基因注射片段。在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100%,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTA1基因,整合率为11.25%。经PCR鉴定MTA1整合阳性的F1代小鼠,再经Western-blot和免疫组化分析检测MTA1表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异。结论成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTA1的转基因小鼠,为进一步MTA1研究奠定了良好的研究模型。