抗人BPI_(23)单克隆抗体的制备和鉴定

目的采用杂交瘤技术制备抗人BPI23单克隆抗体,并对其应用进行初步分析。方法免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合;用间接ELISA法和Western-blot筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法亚克隆3次获得稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注入小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单抗并对抗体类型进行鉴定;用Western-blot分析抗体的特异性;用间接ELISA法测抗体效价;将分离纯化的正常人外周血中性粒细胞和单个核细胞制成涂片,用抗人BPI23单克隆抗体进行免疫染色。结果获得3个(1B4、9C12和2H11)稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型分别为κ型IgM、κ型IgG1和κ型IgG1;抗体效价分别为1.28×105、1.28×105和4.1×106,纯化后抗体含量分别为0.208g/L、2.03g/L和3.88g/L;3种纯化抗体均能与本实验制备的人BPI23和市售人BPI55标准品特异性结合,而不能与小鼠BPI25和人LBP结合;在免疫组化实验中,1B4、9C12和2H11单抗均能与人中性粒细胞中的BPI特异性结合。结论成功制备了人BPI23特异性单克隆抗体,为BPI检测试剂盒的研制奠定了基础。

射频消融抑制小鼠乳腺癌肺转移

目的探讨射频消融术对小鼠三阴性乳腺癌肺转移和免疫系统的影响。方法小鼠乳腺癌4T1细胞系皮下接种于雌性Bal B／c小鼠右下肢处，肿瘤直径达到6—8mm时进行射频消融治疗，流式细胞术检测脾脏中各淋巴细胞亚群的变化，观察肺转移的情况。结果射频消融基本上可以消除原位肿瘤，原位肿瘤复发率较低；射频消融后，小鼠脾脏CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、B细胞、自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞数量都有所升高；射频消融治疗4T1肿瘤14d后，脱颈处死对照组和射频消融组小鼠，射频消融组和对照组4T1荷瘤小鼠的肺转移结节分别为（24±18）个和（81±35）个，差异有统计学意义（P=0．012）。射频消融抑制肺转移的机制与脾脏中CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、B细胞和自然杀伤细胞的比例增加及髓系来源抑制细胞比例降低有关。结论射频消融增强了机体内抗肿瘤的免疫反应，抑制了小鼠4T1细胞乳腺癌的肺转移。射频消融术治疗三阴性乳腺癌和控制其远端转移可能会有良好的治疗效果。