肺癌线粒体DNA突变的研究

背景与目的:近年来已经在多种肿瘤中发现了线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)突变,但其意义尚不明确。本研究通过检测肺癌组织中的mtDNA突变,探讨mtDNA突变在人肺癌发生中的作用。方法:提取58例肺癌组织及其相应病灶的远端非癌肺组织和外周血淋巴细胞的总DNA(包括核DNA和mtDNA),用巢式PCR(nestedPCR)方法扩增相互重叠且涵盖mtDNA全长的58个DNA片段。经PCR产物直接测序法测定mtDNA序列,通过与外周血淋巴细胞比较,确定肺癌组织mtDNA突变。结果:在36例(62.1%)肺癌组织中发现66个突变,其中点突变58个,插入突变4个,缺失突变4个。这些突变分散地分布于mtDNA,以D-loop区突变最多,为18个,在多肽编码区没有明显的热点突变区。在多肽编码区检出的43个点突变中,20个突变不改变氨基酸编码序列。在8例病灶远端非癌肺组织中发现了与相应肿瘤相同的突变。结论:肺癌组织中mtDNA突变可能是随机发生的,且大部分突变对肿瘤的发生可能没有影响,但其有望成为一种肿瘤诊断的分子标记。

芳香胺暴露相关性膀胱癌微卫星改变的初步研究

目的分析芳香胺暴露相关性膀胱移行细胞癌(TCC)与散发性膀胱TCC微卫星异常改变的特点,探讨微卫星分析在职业性膀胱TCC诊断中的潜在应用价值。方法选择在散发性膀胱TCC中杂合性缺失(LOH)频率较高的5个微卫星位点(D17S695、D9S162、D3S1295、DBH及D3S1234),盲法检测这5个位点在16例芳香胺暴露相关性膀胱疾病患者病变组织中的LOH频率,比较其组合LOH缺失模式与病理诊断的符合率,检测患者术后尿沉渣中这5个微卫星位点的改变情况。结果16例职业性膀胱疾病患者的DNA在被测的5个位点中至少有1个位点存在多态性;14例膀胱TCC组织中这5个位点中至少有1个发生LOH的频率达62.50%(10/16)。与散发性膀胱TCC相比,D3S1295的LOH频率增高;被检膀胱病变组织DNA至少1个位点发生LOH的病例,与其组织病理学诊断的符合率达81.25%(13/16)。在8例膀胱TCC患者术后尿沉渣中亦发现了至少1个位点的LOH。结论职业暴露相关性膀胱TCC可能存在不同于散发性膀胱TCC的微卫星LOH模式;D3S1295附近可能存在与芳香胺暴露性膀胱TCC发生相关的基因。

食管癌相关基因2对EC9706细胞恶性增殖的抑制作用

目的探讨食管癌相关基因2(esophageal cancer related gene2,ECRG2)对EC9706食管癌细胞恶性增殖的抑制作用及其机制。方法利用DNA重组技术,构建ECRG2真核表达质粒(pcDNA3.1ECRG2),在食管癌EC9706细胞中转染并表达ECRG2蛋白,观察细胞的生长状态,比较平板集落和软琼脂克隆形成能力的改变,分析ECRG2对EC9706恶性表型的影响。进一步采用WesternBlot检测p53、p21的改变。结果转染表达ECRG2后,EC9706细胞的生长受到干扰,细胞的增殖速度受到抑制,实验组细胞平板集落形成率为18%,而对照组为55%,两者间差异显著(P<0.05);肿瘤细胞的停泊非依赖能力降低,实验组软琼脂克隆体积小且形成个数(8±1.88)明显少于对照组(14.3±3.13),差异显著(P<0.05)。WesternBlot分析表明,EC9706细胞转染表达ECRG2后伴随着p53、p21蛋白表达上升。结论转染表达ECRG2蛋白能够部分逆转食管癌EC8706细胞的恶性表型,其过程可能与p53、p21通路密切相关。

annexinⅠ基因在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨annexinⅠ基因在胰腺癌发生过程中的作用。方法通过免疫组化方法确认annexinⅠ基因在胰腺癌组织中的高表达,合成annexinⅠ基因的小分子RNA干扰片断(siRNA)及无关序列,并构建RNA干扰片断的重组真核表达载体,将重组真核载体稳定转染胰腺癌细胞。通过RNA干扰(RNAi)的方法,敲低annexinⅠ基因在mRNA水平的表达。通过逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)、免疫细胞化学、流式细胞技术和二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,证实annexinⅠ基因的表达被敲低后,对胰腺癌细胞的生长速度、细胞形态、细胞周期、凋亡情况进行观察和检测。结果敲低annexinⅠ基因的表达后,胰腺癌细胞形态发生了显著的变化,呈多形性、空泡样变性以及脂滴形成等,G1期明显延长,出现了明显的凋亡,凋亡率分别为29.8%和18.8%,胰腺癌细胞的恶性表型被抑制。结论annexinⅠ基因在胰腺癌的发生过程中起到了调控肿瘤细胞周期、促进肿瘤细胞生长增殖和抑制凋亡的重要作用。

人胃癌侧群细胞的分离鉴定和生物学特性分析

目的检测和分选胃癌细胞系中具有干细胞特性的侧群（sP）细胞，分析其生物学特性。方法制备胃癌细胞株BGC-823悬液，经Hoeehst33342染色后，用荧光激活细胞分选技术分选出人胃癌sP和非SP（NSP）细胞，测定sP细胞亚群所占的比例。通过平板克隆实验检测sP细胞的克隆形成能力，无血清培养检测sP细胞的增殖能力。以不同浓度的氟尿嘧啶（5-Fu）处理BGC．823细胞后，检测sP细胞的耐药性，通过小鼠体内成瘤实验检测sP细胞的致瘤性。结果流式细胞仪分析结果表明，BGC-823细胞中含少量sP细胞，占0．9％～2．1％。SP细胞组克隆形成数量为（217．67±15．50）个／孔，高于NSP细胞组[（147．00±17．58）个／孔，P〈0．01]；SP细胞组克隆形成率为（72．56±5．17）％，高于NSP细胞组[（49．00±5．86）％，P〈0．01]，表明sP细胞较NSP细胞有较强的克隆形成能力。经2．5、5、10和25斗∥ml的5-Fu作用36h后，sP细胞所占比例分别为12．9％、9．9％、4．0％和2．1％，化疗药物对sP细胞的抑制作用随着药物浓度的递增而加强。体内成瘤实验显示，sP细胞组瘤体质量为（0．176±0．034）g，NSP细胞组瘤体质量仅为（0．045±0．046）g，两组细胞所致瘤体质量差异有统计学意义（P〈0．05）。结论人胃癌细胞BGC-823中存在具有干细胞特性的sP细胞，进一彤开展对人冒痛千纲晌毕物学特忡的研容．将百r能棍示冒癌新的诊断和治疗涂释．