医学遗传学

1993年底,国家自然科学基金委员会通过并启动了《中华民族基因中若干位点基因结构的研究》的重大课题,开始了有组织的中国人类基因组方面的研究,预示我国的科技工作者将为这一跨世纪的世界性重大项目作出自己的贡献,并为分享这方面的科研成果创造了前提.1993年,法国CEPH的D.Cohen博士把人YAC文库赠与我国,目前已在上海第二医科大学上海血液学研究所保存并整理就绪,为我国的人类遗传学工作者筛选大片段DNA提供了极大的方便.分子肿瘤学国家实验室建立了一种直接克隆两个复杂基因组之间微小缺失的方法,为人类基因组分析提供了一种新的可供选择的方法.一些实验室分离和鉴定了人X染色体若干单拷具序列,人1号染色体和3P^(14^21)区域的微克隆,为进一步分析这些区域的基因组成乃至致病基因的克隆,提供了探针.

食管癌及癌旁组织中基因表达的初步研究

目的 了解食管癌的基因表达概况，寻找在食管癌及癌旁组织中差异表达基因。方法 以癌及癌旁组织ｐｏｌｙ Ａ＋ Ｒ Ｎ Ａ 反转录合成的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 为探针，与 Ａｔｌａｓ 微点阵表达分析膜进行差异杂交。结果放射自显影结果显示在所分析的５８８ 种已知基因中，ｃｄｃ２５ Ｂ、 Ｍ Ｍ Ｐ、 Ｍ Ｅ Ｔ 等６１ 个在食管癌组织中表达上调，ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ ４ 、 Ｂ Ａ Ｄ、 Ｉ Ｌ１ Ｒ Ｅ Ｃ Ｅ Ｐ Ｔ Ｏ Ｒ Ａ Ｎ Ｔ Ａ Ｇ Ｏ Ｎ Ｉ Ｓ Ｔ、 Ｉ Ｌ６ 等２２ 个表达下调，参与细胞增殖、凋亡、分化和转移调控的多种基因的表达水平发生了明显改变。结论 这些基因的表达改变组成了一个食管癌特异的基因表达谱，首次为食管癌细胞的恶性表型提供了分子遗传学参考数据，一些与肿瘤发生相关的差异表达基因为发展生物标记物或肿瘤早期诊断和治疗提供了线索。 Ａｔｌａｓ 微点阵表达分析滤膜的差异杂交为初步了解某一组织或细胞的表达状况提供了一个较好的方法。

DPH2L基因在细胞分化/凋亡中的降调节——mRNA差异显示的应用

为鉴定维甲酸诱导的人肺癌细胞分化/凋亡相关基因,采用mRNA差异显示的方法对全反式维甲酸处理前后的人肺腺癌细胞系GLC82的mRNA表达模式进行了分析。6个cDNA片段被分离和克隆。其中1个对应于序列已知而功能未知的人DPH2L基因。该基因的2.3kb全长cDNA最初是从人卵巢癌的关键缺失位点17p13.3上分离出来,并被认为是一个候选的肿瘤抑制基因。结果显示DPH2L是一个广泛表达的基因,除已报道的2.3kb转录本外,还有另外一个1.7kd的主要转录本。在全反式维甲酸和N-（4-羟苯）维甲酰胺4HPR诱导的几种肿瘤细胞的分化/凋亡过程中DPH2L呈降调节,由此提示DPH2L可能并不起肿瘤抑制基因的作用,相反,它的降调节可能参与了从细胞生长到细胞分化或凋亡的转换过程。

维甲酸激活新基因RA28及其编码蛋白的定位

基因ＲＡ２８是用全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，用消减杂交方法分离得到的一个新的 ｃＤＮＡ序列．作为体内报告分子的绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ， ＧＦＰ），在激发光４８８ ｎｍ，不加任何底物时，能发出绿色荧光．构建了真核表达载体 ｐＥＧＦＰ－Ｃ１－ＲＡ２８，转染肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，分析维甲酸激活基因ＲＡ２８表达蛋白的定位；同时利用辐射杂交细胞系（ｒａｄｉａｔｉｏｎｈｙｂｒｉｄ，ＲＨ）技术定位基因ＲＡ２８在染色体上的位置．研究结果表明基因ＲＡ２８定位于１９ｑ１３．１，其编码蛋白存在于细胞膜上．ＧＦＰ与ＲＨ定位具有精确、快速、可重复等优点，是研究基因与蛋白定位的有效方法．