细胞焦亡与肺动脉高压的关系及治疗肺动脉高压药物研究进展

细胞焦亡(pyroptosis)是指伴有炎性反应的一种细胞程序性死亡方式,其广泛参与了多种疾病的发生发展,例如感染性疾病、心血管疾病和神经性退行等。研究表明,细胞焦亡参与了心血管疾病中动脉性肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)的发病机制。PAH患者的肺部存在血管周围炎症浸润,肺血管病变存在于极度发炎的微环境里,细胞焦亡中的促炎因子驱动了PAH患者的肺部血管重塑。本文针对细胞焦亡在PAH发病机制中的作用及治疗PAH药物的相关研究进行综述,旨在为临床上治疗PAH提供新思路。

二氢杨梅素神经保护作用研究进展

二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)是广泛存在于葡萄科蛇葡萄属植物中的一种二氢黄酮类化合物,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、调血糖、降血脂、肝保护等多种药理作用。近年的研究表明,DHM具有很好的神经保护作用,对多种神经系统病变包括阿尔茨海默病、抑郁症、帕金森综合征、脑卒中等均能起到一定的药理作用。该文针对近十年国内外对DHM的神经保护作用的相关研究进行综述,旨在为DHM的神经保护作用研究提供思路。

人参皂苷治疗阿尔茨海默病的药理作用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)已成为困扰人类健康的重要疾病之一,严重影响患者生活质量,迄今尚无特效治疗药物,亟待研发。人参是中医方剂中治疗老年痴呆的重要组成药物之一,其活性成分多样,其中皂苷类成分是其主要药效部位之一,人参皂苷治疗AD的作用机制得到了广泛研究,证实多种人参皂苷均具有良好的改善学习记忆和防治AD能力。人参皂苷类成分可通过多靶点、多通道作用治疗AD,多成分协同作用可能会提升其抗AD效应,多靶点多通道的网络药理学研究模式可能是阐明人参皂苷治疗AD作用机制的有效研究方法。

玄参药材等级质量研究

目的建立薄层色谱法、高效液相色谱(HPLC)法对玄参中多种苷类成分进行同时检测,为简便快速评价玄参药材质量提供参考依据。方法建立薄层色谱法对玄参药材的质量进行初步评价;采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PDA)法检测苷类成分含量,WatersSymmetry-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;柱温:25℃;以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长分别为:哈巴苷、桃叶珊瑚苷和麦角甾苷为206 nm,哈巴俄苷为280 nm,安格洛苷C为320 nm。结果供试品的薄层色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。HPLC法测定的20批次玄参药材中,除麦角甾苷外其他主要苷类成分基本能稳定存在,但含量差异较大;通过对几种苷类成分的总量进行对比分析发现,道地药材浙玄参具有较明显优势,湖南新邵基地的玄参药材中苷类成分总量具有较高的一致性,提示作为玄参生产基地,湖南新邵生产的玄参药材质量较稳定。结论所建立的薄层色谱法和HPLC法能快速对玄参中多种苷类成分进行鉴定和含量测定,可为玄参药材等级标准的制定提供参考。

α-Synuclein与MPP^+细胞毒性协同作用的研究

目的模拟与帕金森病发病密切相关的遗传因素与环境因素,研究α-synuclein与MPP+对细胞的毒性作用。方法RT-PCR方法扩增α-synuclein基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染;Western blot,MTT方法,双报告基因检测法和显微镜观察,研究过表达α-synuclein和MPP+对细胞存活率及NFκB信号通路的影响。结果MPP+和α-synuclein均能够显著抑制细胞存活率,二者共同作用时抑制作用更加明显;而且研究发现α-synuclein能够抑制由转录因子NFκB介导的基因表达,MPP+能够进一步增强其抑制作用。结论在遗传背景发生改变时,细胞对外界环境中的毒素更加敏感,提示帕金森病的发病存在某种遗传易患性。

α-突触核蛋白影响BDNF表达机制的研究

目的：研究α-突触核蛋白对BDNF（brain--derivedneurotrophicfactor）表达的影响及作用机制。方法：利用分子克隆技术构建α-突触核蛋白真核表达载体并转染PC12，建立稳定高表达细胞株；MTT法检测细胞存活率；Westernblot法、ELISA法和Confocal检测的蛋白表达及蛋白磷酸化的改变；

帕金森病模型大鼠中脑α-突触核蛋白增加

目的观察鱼藤酮对大鼠中脑α-突触核蛋白(α-SYN)的影响。方法SD大鼠长期低剂量皮下注射1.0mg·kg-1·d-1的鱼藤酮,建立帕金森病(PD)动物模型。采用旷场实验评价动物行为学改变,观察大鼠5min的活动情况。免疫荧光化学方法检测中脑部位TH阳性神经元数目的变化。免疫组织化学和Western blot方法检测中脑部位α-SYN的蛋白水平的改变。结果同对照组相比,鱼藤酮实验组动物5min的正中格停留时间明显延长(P<0.05),方格穿行次数明显减少(P<0.05),竖起时间和次数明显减少(P<0.01);中脑部位TH阳性神经元数目明显减少(P<0.05),α-SYN蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论给予鱼藤酮能够使SD大鼠出现运动障碍,中脑部位TH阳性神经元数目减少,该现象可能与大鼠中脑部位α-SYN蛋白水平增加有关。

基于指纹图谱结合多指标测定的玄参药材等级质量研究

目的建立玄参药材的HPLC指纹图谱,并同时进行多成分含量测定,为玄参药材等级质量标准的制定提供方法和依据。方法采用HPLC-DAD法,Elipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温25℃,以乙腈(A)-0.03%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,进样量10μL,指纹图谱检测波长207 nm,含量测定的检测波长为哈巴苷210 nm、哈巴俄苷280 nm、肉桂酸264 nm。获取30批不同等级玄参药材的指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析,同时对3种主要化学成分进行含量测定。结果指纹图谱分析共指认7个共有峰,相对保留时间RSD值均小于2.0%,相对峰面积RSD值差异较大,提示玄参药材中的主要化学成分稳定存在,但含量差异较大;相似度分析中,约有5%的指纹图谱与对照药材的相似度低于0.7,12.5%的相似度在0.7～0.8,40%处于0.8～0.9,42.5%大于0.9,提示不同产地玄参药材的质量差异较大;不同批次玄参药材中3种化学成分含量差异较大,质量分数分别为哈巴苷0.18%～2.89%、哈巴俄苷0.01%～0.35%、肉桂酸0.01%～0.24%。结论建议在原有等级划分标准的基础上,增加指纹图谱和主要化学成分的含量测定两项指标。

Cdk5介导的凋亡与自噬交互作用对脑缺血的调控

细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)作为神经元凋亡的关键调控子颇受关注,前期实验亦初步证实了Cdk5信号途径对脑缺血后神经元凋亡调控的重要性。据文献研究,凋亡还与另一细胞死亡的双向调控途径"自噬"发生信号交互作用,且自噬在脑缺血中具有"双刃剑"身份。此外,Cdk5与蛋白激酶B(Akt,又称PKB或RacAkt)之间存在信号传导,且Akt激酶对凋亡和自噬具有双重调控作用,因此,明确凋亡与自噬的关系对脑缺血后神经元的调控具有重要意义。在前期研究基础和充分的文献调研基础上,基于Cdk5对神经元调控的关键性,针对凋亡与自噬的交互作用方式在脑缺血调控中存在的不同观点,该文重点阐述Cdk5介导的凋亡与自噬交互作用方式对脑缺血后神经元损伤的潜在影响,为后续深入研究提供参考。

补阳还五汤类方对氧化应激PC12模型细胞CDK5及凋亡因子的影响

目的观察补阳还五汤类方对氧化应激模型细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及凋亡因子的影响。方法以0.3 mmol·L^-1的H 2O 2与PC12细胞共同作用2 h,成功复制脑缺血体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分成正常组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。酶联免疫法检测胞外培养液中L-LDH的含量和胞内GSH的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量,细胞免疫荧光法检测胞内CDK5、Tau、Bax、Bcl-2蛋白的表达,qPCR法检测胞内凋亡因子caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果补阳还五汤类方能有效降低氧化应激模型细胞培养液中L-LDH的含量,增加胞内GSH、降低胞内ROS、抑制模型细胞内CDK5和Tau蛋白的过表达,下调凋亡因子caspase-3和Bax/Bcl-2。结论补阳还五汤类方可能通过CDK5信号转导途径有效抑制神经细胞凋亡,对脑缺血后神经细胞的损伤发挥保护作用。

糖原合成酶激酶3β转基因细胞模型的建立

目的建立GSK3β(糖原合成酶激酶3β)转基因细胞模型。方法RT-PCR方法扩增GSK3β基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染PC12细胞;Western blot验证稳定株;染色质染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法确定细胞接种条件。结果成功获得GSK3β融合载体;并建立GSK3β转基因细胞株;转基因组中GSK3β蛋白表达量明显高于对照组,染色质明显浓染甚至出现凋亡小体,去血清后该变化更加明显;GSK3β转基因组早期凋亡的细胞含量比对照组明显增多;确立了转基因细胞筛选化合物的接种条件。结论成功建立GSK3β转基因细胞模型。

CKLF1高表达激活NF-κB信号通路导致小鼠肺部炎症

目的有报道表明趋化素样因子1(CKLF1)在哮喘病人肺部高表达,但具体情况和机制尚不明确。本研究拟在动物水平考察CKLF1的致炎作用及相关机制。方法将pCDB-CKLF1质粒或空载体pCDB电转入Balb/C小鼠体内,HE染色观察其肺部病理改变;硝酸酶还原法和ELISA法分别检测小鼠血清中NO和TNF-α的含量;提取小鼠肺部组织的胞质和胞核蛋白,蛋白免疫印迹实验考察胞质和胞核内NF-κB和IκBα表达的改变。结果病理切片结果显示,转染pCDB-CKLF1质粒后,小鼠肺部出现明显的病理改变;小鼠血清中NO和TNF-α含量明显升高;胞质内NF-κB和IκBα表达明显减少,胞核内NF-κB和IκBα表达明显增加。结论趋化因子CKLF1高表达能够导致动物肺部炎症的发生,CKLF1可能通过激活NF-κB信号通路导致炎症。

建立NF-κB核转位的转基因细胞模型

目的建立NF-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)转基因细胞模型。方法 RT-PCR方法扩增p65基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染不同细胞;Western blot验证蛋白表达;利用荧光可视化技术观察p65核转位的情况。结果成功获得与绿色荧光蛋白(GFP)融合的载体;并建立p65转基因细胞模型;转基因组中p65蛋白表达量明显高于对照组,给予LPS刺激BV-2后能够促进p65向细胞核转位;而转染后的PC12细胞,p65的核定位现象则呈现不均一性。结论成功建立p65转基因细胞模型,针对不同细胞建立的模型,可用于相关化合物的筛选。