不同刺激剂对小鼠脾脏淋巴细胞LAG3表达及功能的影响

目的研究不同刺激剂对小鼠脾脏淋巴细胞LAG3表达及功能的影响.方法采用密度离心法分离小鼠脾脏淋巴细胞.流式细胞术检测conA、PMA、PHA和CD3/28抗体刺激24h或72h对T细胞亚群LAG3表达的影响.ELISA法检测刺激剂对细胞上清IFN-7含量的影响.MTT法检测刺激剂对淋巴细胞增殖的影响.结果conA培养24h或72h可剂量依赖性增加LAG3＋CD3＋和LAG3＋CD4＋CD3＋T细胞百分比.CD3/28抗体培养72h显著增加LAG3＋CD3＋和LAG3＋CD4＋CD3＋T细胞百分比.同时,conA和CD3/28抗体可时间依赖性增加淋巴细胞IFN-7的分泌.conA、PMA、PHA和CD3/28抗体培养72h均表现出刺激淋巴细胞增殖的作用.结论conA和CD3/28抗体是T细胞活化的有效刺激剂,并可以促进T细胞LAG3的表达和IFN-7的分泌.

基于小动物超声的小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型的建立

目的建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌胸腔积液的超声检测模型。方法将Lewis肺癌的肿瘤组织制作成单细胞瘤液,接种到C57BL/6小鼠胸腔内,采用小动物超声的检测方法,观察小鼠瘤性胸腔积液的形成,并抽取小鼠胸腔积液,计算瘤液体积及胸腔积液中肿瘤细胞数量。结果将Lewis肺癌细胞接种到小鼠胸腔后,小鼠均可产生肺癌晚期胸腔积液,小动物超声下观察到小鼠胸腔内有明显液性暗区和均匀回声,随时间延长暗区及均匀回声增多,解剖动物胸腔内有大量血样胸腔积液。采用化疗药物环磷酰胺和顺铂可减少肺癌胸腔积液体积。结论基于小动物超声的小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型可用于评价药物对于肺癌胸腔积液的疗效。

采用荧光偏振法建立HSP90抑制剂的高通量筛选模型

目的建立HSP90抑制剂的高通量荧光偏振筛选模型。方法以pET24α（＋）-HSP90α转化E.Coli BL21（DE3）,诱导表达并纯化HSP90α蛋白。Western blot鉴定纯化的HSP90α蛋白。以VER00051001为分子探针,依次变化HSP90α浓度和分子探针浓度,4℃孵育不同时间,检测荧光偏振值,建立HSP90α抑制剂的荧光偏振筛选模型。同时采用该模型检测格尔德霉素（Geldanamycin,CA）和NVP-AUY922对HSP90α的亲和抑制活性。结果成功诱导表达并纯化HSP90α蛋白。选用80 n M分子探针,2.01μg/mL HSP90α蛋白建立荧光偏振筛选模型,其Z因子可达0.83。基于该方法,检测GA和NVP-AUY922对HSP90α的亲和抑制活性,其IC_（50）值分别为55 nM和13 nM。结论成功地建立了HSP90抑制剂的荧光偏振筛选模型。