党参药理作用的研究进展

党参为桔梗科党参属植物,是中医临床应用非常广泛的一味补气类中药,其化学成分主要包括黄酮类、生物碱类、糖类、皂苷类、甾体类、氨基酸类等,主要有增强免疫功能、改善胃肠道功能、抗炎、抗肿瘤、改善学习记忆能力、调节心脑血管系统和延缓衰老等药理作用。该文基于近几年国内外大量党参的研究文献,对其药理作用进行综述,以期对党参的研究及应用提供一定的理论基础和依据。

注射用丹参多酚酸对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探讨注射用丹参多酚酸(SAFI)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及丹参多酚酸低、中、高剂量组(5、10、20 mg·kg^(-1)),每组20只。采用改良线栓法复制大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠模型。于MCAO/R手术前按照上述剂量腹腔注射给药,每日1次,连续给药3 d;末次给药1 h后,进行MCAO/R模型复制。采用Longa五级评分方法进行神经功能缺失评分;采用TTC染色后测量脑梗塞体积;ELISA法检测血清中氧化应激指标NADPH氧化酶(NOX)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及炎症反应指标单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、IL-6、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的水平;HE及尼氏染色法观察脑组织病理损伤情况;TUNEL染色法检测脑组织神经元细胞凋亡情况;免疫荧光法测定大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;Western Blot法检测脑组织中NLRP3、Caspase1蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),脑梗死体积显著增加(P<0.01),脑组织病理损伤明显,神经元密度显著降低(P<0.01),皮层细胞凋亡率显著升高(P<0.01);血清NOX、4-HNE、8-OHd G、MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、ICAM-1水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);脑组织中GFAP、NLRP3、Caspase1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,SAFI中、高剂量组大鼠的神经功能缺失评分显著降低(P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.01),神经元损伤有不同程度好转,神经元密度显著增加(P<0.05,P<0.01),皮层细胞凋亡率显著降低(P<0.01);血清NOX、4-HNE、8-OHd G、MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、ICAM-1水平明显降低(P<0.05,P<0.01);脑组织中GFAP、NLRP3、Caspase1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论SAFI预防性给药可明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的炎症反应和氧化应激水平,改善脑组织病理损伤,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制星型胶质细胞活化及NLRP3/Caspase-1通路激活有关。

灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的有效成分及作用机制网络药理学分析

目的基于网络药理学探讨灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的有效成分及作用机制。方法利用中医药研究综合数据库(TCMID),中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),网络药理学数据分析数据挖掘系统(TCM-Mesh)等收集灯银脑通胶囊的化学成分,利用DrugBank,毒性与基因比较数据库(CTD),STITCH,BindingDB,Swiss Target等数据库收集相关成分的靶点。采用DisGeNET,PharmGKB,CTD数据库收集认知功能障碍相关基因,整合中药化学成分、化学成分靶点、疾病相关基因及蛋白互作数据,利用Cytoscape 3.2.1软件构建灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的药物-活性成分-靶点网络。通过KEGG通路富集分析和GO生物学过程富集分析发现灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的关键信号通路,将MCC和Stress两种算法排名前10的交集作为灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的关键靶点。结果共收集灯盏细辛、银杏叶、三七、满山香4种中药的化学成分133个,涉及靶点588个,筛选出治疗认知功能障碍的成分62个。KEGG通路富集分析和GO生物学过程富集分析结果显示,灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍涉及肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素17(IL-17)及凋亡等25个信号通路及1191条生物过程。基于MCC和Stress 2种算法发现血管内皮生长因子A(VEGFA)、胱天蛋白酶3(CASP3)、胰岛素(INS)、白细胞介素6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、TNF、白蛋白(ALB)和肿瘤蛋白P53(TP53)靶点为灯银脑通胶囊治疗认知功能障碍的关键靶点。结论灯银脑通胶囊通过多成分、多靶点、多通路治疗认知功能障碍。灯银脑通胶囊、活性成分、靶点与认知功能障碍之间的联系可为认知功能障碍的治疗提供参考。

豚鼠早期动脉粥样硬化模型的建立、机制研究及与大鼠模型的比较

目的建立豚鼠早期动脉粥样硬化模型,探讨模型形成机制,并与大鼠模型进行比较,为豚鼠模型优势提供科学依据。方法应用高脂饲料诱导法,观察豚鼠和大鼠是否可形成早期动脉粥样硬化模型,并应用免疫组化和酶联免疫分析技术探讨模型形成机制。结果豚鼠模型组摄入高脂饲料6周后主动脉内膜-中膜明显增厚、内膜单核细胞、巨噬细胞浸润与聚集增多,同时比例为0.40的动物动脉内膜表层进一步发展形成脂纹脂斑病变。而大鼠模型组未见类似病变。机制研究表明,血清脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),LP(a)]、胆固醇酯转运蛋白(Cholesteryl ester transfer protein,CETP)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度,肝脏脂酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase,ACAT)活性和主动脉增殖细胞核抗原(Proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)、分化抗原簇-36(Cluster of differentiation36,CD36)和血管细胞黏附分子(Vascular cell adhesion mole-cule,VCAM-1)表达的变化是动脉病理改变的重要机制。结论豚鼠可能是一种模拟早期动脉粥样硬化的适宜动物模型。

辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用的研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)抗人乳腺癌的作用及可能机制。方法采用MTT法检测ETS对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。Annexin V-FITC双染法和PI单染法检测ETS对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。建立人乳腺癌荷瘤小鼠模型,验证ETS的体内抗肿瘤作用。结果 ETS对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖有明显的抑制。ETS可诱导MCF-7细胞的凋亡,并呈现明显的量效关系。ETS随剂量的增加,周期阻滞作用逐渐由S期阻滞向G0/G1期阻滞转变。ETS对人乳腺癌细胞体内的增长有明显的抑制作用。结论 ETS体内和体外均具有抗人乳腺癌作用,这些作用可能与诱导细胞凋亡、改变细胞周期分布有关。

慢性脑缺血大鼠脑组织线粒体蛋白质组与能量代谢相关性研究

目的探讨慢性脑缺血大鼠脑组织线粒体蛋白质组与能量代谢相关性,以期揭示慢性脑缺血疾病的线粒体机制。方法通过差速离心分离大鼠脑线粒体,检测脑线粒体能量代谢相关的氧化磷酸化指标,应用凝胶电泳技术构建大鼠脑线粒体蛋白质组表达图谱;通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑缺血模型,分析比较慢性脑缺血时脑线粒体蛋白质表达谱的改变,从脑线粒体蛋白质组角度阐述慢性脑缺血与能量代谢的关系。结果实验发现,与正常对照组相比,慢性脑缺血大鼠脑线粒体ADP/O及氧化磷酸化效率明显降低,蛋白质组结果显示慢性脑缺血大鼠NADH脱氢酶复合体亚基、细胞色素C氧化酶亚基、丙酮酸脱氢酶(硫辛酰胺)β、乙酰辅酶A乙酰转移酶、烯醇化酶、醛缩酶C等表达量降低,而3-含氧酸辅酶A转移酶、4-氨基丁酸转氨酶等表达量增加。结论实验表明,慢性脑缺血大鼠能量代谢功能及能量代谢相关酶发生了很大变化,慢性脑缺血疾病机制与线粒体具有密切关系。

基于ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的四妙勇安汤活性部位配伍规律研究

目的:观察四妙勇安汤活性部位配伍方(N8,N16,N18)对载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法:48只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为6组:四妙勇安汤活性部位配伍方N8、N16、N18(1 g/kg.d)组、辛伐他汀组(15 mg/kg.d)、罗格列酮组(10 mg/kg.d)及模型组,各组同时饲以高脂饲料,对照组采用C57小鼠8只,给药第16周后,采用小动物成像系统观察主动脉弓动脉粥样斑块形成程度;主动脉根部切片、HE染色,测定斑块面积与管腔面积比值(PA/LA);酶法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量。结果:与模型组比较,N16组可显著抑制ApoE-/-小鼠主动脉弓粥样硬化斑块的形成,明显减少PA/LA值;与模型组比较,N8、N16、N18各组均有降低ApoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL水平的作用。结论:四妙勇安汤活性部位配伍方具有较好的抑制动脉粥样硬化形成的作用。

四妙勇安汤活性部位对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的药效学研究

目的观察中药四妙勇安汤活性部位对载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 60只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为6组:四妙勇安汤活性部位高剂量组[1g/(kg.d)]、中剂量组[0.5g/(kg.d)]、低剂量组[0.25g/(kg.d)]及辛伐他汀组[15mg/(kg.d)]、罗格列酮组[10mg/(kg.d)]、模型组,饲以高脂饲料。16周后,观察主动脉弓动脉粥样斑块形成程度;测定斑块面积与管腔面积之比;测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量。结果与模型组比较,四妙勇安汤活性部位高剂量组、辛伐他汀组和罗格列酮组小鼠动脉粥样硬化斑块面积/管腔面积比值明显减小(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,四妙勇安汤活性部位高剂量组和辛伐他汀组TC水平显著降低;四妙勇安汤活性部位高、中剂量组和辛伐他汀组TG水平明显降低(P<0.05)。结论四妙勇安汤活性部位能够抑制动脉粥样硬化形成,推测该作用与其促进脂质代谢和抗炎的机制有关。

微透析与LC-MS^n联用测定脑组织中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其脑内药代特征的研究

目的建立灵敏、快速、准确的LC-MSn方法测定咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其在大鼠脑内的药代动力学过程。方法 SD大鼠股静脉注射CYP3A探针药物咪达唑仑(剂量5 mg·kg-1)。采用微透析技术,在2μl·min-1流速下收集脑微透析液样品2.4 h,收集时间间隔为8 min。以LC-MSn法在线检测微透析样品。选用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为2 mmol·L-1乙酸铵水溶液和乙腈,梯度方式洗脱。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测模式(MRM),咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为0.78~100和0.195~12.5μg·L-1,最低定量下限0.2μg·L-1,批内、批间RSD均<7%,RE值在-1.34^-8%范围内。结论此检测方法快速、灵敏,可用于脑微透析液中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的含量测定,结合微透析技术有助于深入进行脑代谢的相关研究。

小儿热速清糖浆抗流感病毒和抗菌作用研究

目的检测小儿热速清糖浆的抗病毒及抗菌作用。方法采用细胞培养法计算小儿热速清糖浆对病毒的半数抑制率,建立肺炎动物模型计算小儿热速清糖浆对肺炎小鼠肺指数和肺抑制率影响。采用试管二倍稀释法测定小儿热速清糖浆体外对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、乙型溶血性链球菌和表皮葡萄球菌最小抑菌浓度和累积抑菌率;体内实验检测小儿热速清糖浆对金黄色葡萄球菌感染小鼠死亡率的影响。结果小儿热速清糖浆体外抗病毒实验表明在稀释32倍时能完全抑制流感病毒、呼吸道合胞病毒致细胞病变;体内研究表明流行性感冒病毒所致肺炎小鼠20 m L/kg、40 m L/kg给药治疗作用明显(P<0.05)。体外抗菌实验研究表明小儿热速清糖浆2倍稀释对6种细菌抑制率可达90%以上;金黄色葡萄球菌感染小鼠40 m L/kg给药能完全抑制其死亡。结论小儿热速清糖浆在体内外均具有一定的抗病毒及抑菌作用,能同时达到抗病毒及抗菌效果。

多药耐药相关ABC转运蛋白信号转导通路研究进展

ATP结合盒(ABC)转运蛋白表达和功能的异常是造成多药耐药(MDR)的重要原因之一,其中P-糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白和MDR相关蛋白在MDR发生中起着重要作用,是ABC转运蛋白家族中研究热点。本文对近几年来这3种转运蛋白相关信号转导通路进行整理分析,如NF-κB信号通路、丝裂原活化蛋白激酶级联信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路和音猬因子(sonic hedgehog)信号通路等,挖掘出信号通路中重要调控节点NF-κB、激活蛋白1、c-Jun和转录因子Gli等,具有成为MDR逆转剂作用靶点的可能性,以期为MDR机制研究及其逆转剂研发提供较系统的参考。

脑缺血性血脑屏障损伤机制与药物保护作用的研究进展

血脑屏障是脑内各种生命活动正常有序进行的重要保障，其主要结构包括血管内皮细胞、基底膜和星形胶质细胞终足。脑缺血时，构成血脑屏障的紧密连接、基底膜以及星形胶质细胞遭到不同程度损伤，伴随着细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等的产生，血脑屏障遭到破坏，通透性增加，继而引起水肿和出血，加重缺血状况，形成恶性循环。明确脑缺血性血脑屏障的损伤机制对新药研发、药物靶点寻找及临床合理用药具有十分重要的意义。

基于网络药理学的灯银脑通胶囊治疗脑卒中的有效成分群及关键靶点预测

目的采用网络药理学的方法探究灯银脑通胶囊(DYNT)治疗脑卒中的有效成分群及关键靶点预测。方法基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药研究综合数据库(TCMID)和TCM-Mesh,收集DYNT的化学成分,并通过DrugBank、毒性与基因比较数据库(CTD)、STITCH、BindingDB和Swiss Target等数据库预测DYNT各化学成分的靶点数据。在DisGeNET、PharmGKB和CTD数据库中检索脑卒中相关靶点,取疾病靶点和DYNT成分相关靶点交集作为DYNT作用脑卒中的潜在靶点。通过STRING数据库建立蛋白质相互作用(PPI)网络,使用MCODE cluster识别DYNT的核心靶点。运用CTD数据库对DYNT治疗脑卒中相关靶点及调控脑卒中相关通路进行GO富集分析和KEGG信号通路富集分析。利用MCC和Stress两种算法识别网络中排名前十的关键靶点,取两者交集作为DYNT治疗脑卒中的关键靶点。结果从DYNT中共收集到133个化学成分,涉及靶点588个,化学成分中木犀草素、山奈酚和芹菜素等59个成分参与了对脑卒中的调控。DYNT治疗脑卒中的靶点共有153个,涉及通路12个,基于MCC和Stress两种算法发现DYNT治疗脑卒中的8个关键靶点。结论 DYNT中的各化学成分可能通过PI3K-Akt、HIF-1和Toll样受体等12条信号通路发挥对脑卒中的调控作用,AKT1、MAPK3、TP53、IL6、VEGFA、TNF、INS和ALB可能为DYNT治疗脑卒中的8个关键靶点。

豚鼠动脉粥样硬化模型的建立及与大鼠模型的比较

目的建立豚鼠动脉粥样硬化模型,并对形成机制进行探讨,同时与大鼠模型进行比较,阐明豚鼠模型特点和优势。方法应用高脂饲料诱导法建立动脉粥样硬化模型,将豚鼠和大鼠分别随机分为正常对照组(饲常规饲料)、模型1组(质量分数分别为0.005的胆固醇、0.1的猪油、0.895基础饲料)和模型2组(质量分数分别为0.01的胆固醇、0.1的猪油、0.89的基础饲料),每组10只,连续饲养10周,苏丹Ⅳ染色观察主动脉壁斑块病灶面积,Masson染色观察动脉内膜胶原纤维的变化。酶联免疫分析法测定血清hs-CRP浓度,实时荧光定量法检测肝脏PPARα相对表达,免疫组化技术检测血管内膜ICAM-1蛋白表达的变化。结果豚鼠模型1组比例为0.8的动物,模型2组比例为0.7的动物的主动脉壁出现较多脂质斑块,内膜和中膜胶原纤维明显增生,与对照组比较,斑块面积和胶原纤维面积百分比均明显增加,肝脏PPARα表达不变,大鼠两个模型组的主动脉壁未出现明显的阳性染色斑块,胶原纤维增生不明显,肝脏PPARα表达明显下调。豚鼠血清hs-CRP浓度升高,动脉内膜ICAM-1蛋白表达上调。结论经高胆固醇饲料诱导10周后,豚鼠两个模型组均可形成典型动脉粥样硬化病变,病变形成可能与血管损伤性炎症反应有关,且其PPARα种属特异性较大鼠更接近人类,豚鼠模型有明显优势。

淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP8脑线粒体的保护作用

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对快速老化小鼠SAMP8脑线粒体功能的影响。方法:将8月龄快速老化小鼠SAMP8随机分为模型组、盐酸多奈哌齐1mg/kg组、吡啦西坦200mg/kg组、ICA75mg/kg组和150mg/kg组,每组6只;8只同月龄抗快速老化小鼠SAMR1作为正常对照组。给药30d后,提取小鼠脑线粒体,测定线粒体呼吸功能、肿胀度、膜电位、活性氧(ROS)和ATP含量。结果:与SAMR1正常对照组相比,SAMP8小鼠脑线粒体呼吸功能显著降低,表现为线粒体Ⅲ态呼吸明显降低,Ⅳ态呼吸改变不明显,呼吸控制指数和磷氧比值降低(P<0.05);线粒体膜肿胀度增高,膜电位降低,线粒体内ROS含量增高,而ATP含量明显降低(P<0.05)。与SAMP8模型组相比,ICA75mg/kg和150mg/kg均可明显改善SAMP8小鼠脑线粒体结构和呼吸功能(P<0.05,P<0.01)。结论:ICA可明显改善SAMP8小鼠脑线粒体结构和功能。

楤木皂苷C对缺血/再灌注原代大鼠心肌细胞兴奋收缩偶联及CaMK Ⅱ的调控作用

目的探讨从龙牙楤木总皂苷中分离得到的楤木皂苷C(aralosdie C,SMC)对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的大鼠心肌细胞收缩功能和钙瞬变的影响,及钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)在其中发挥的作用。方法采用Langendorff心脏灌流系统分离原代大鼠心肌细胞,分为对照组(Control组)、模型组(I/R组)、楤木皂苷C组(I/R+SMC8μmol·L^(-1))、抑制剂组(I/R+KN-93 1μmol·L^(-1)+SMC 8μmol·L^(-1)),采用细胞收缩与离子浓度同步测定系统同步检测SMC通过调控Ca MKⅡ对单个I/R细胞收缩功能和钙瞬变的影响。结果 8μmol·L^(-1)SMC作用5 min和未加入SMC的I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能进行比较,发现SMC处理可明显促进I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能的恢复,SMC改善心肌细胞收缩的同时,其钙瞬变也相应改善,并且SMC使钙瞬变幅度和[Ca2+]i上升/下降的速率明显升高,但加入KN-93抑制Ca MKⅡ后,除稳态钙息值无变化外,SMC对钙瞬变的作用效果降低。结论 SMC可明显改善I/R成年大鼠心肌细胞的收缩功能和钙瞬变,其作用机制可能与Ca MKⅡ有关。

补骨脂二氢黄酮甲醚诱导HepaRG细胞损伤机制探讨

目的利用HepaRG细胞,探讨补骨脂二氢黄酮甲醚毒性剂量及其毒性作用机制。方法 MTT法确定毒性及剂量。以浓度为6.25、12.5、25μmol·L^(-1)的补骨脂二氢黄酮甲醚作用于细胞24 h后,首先利用Hoechst 33342/PI及LDH的方法检测细胞死亡,并检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3活性。通过检测线粒体膜电位、ATP含量、线粒体膜通道开放孔开放性及细胞色素C的含量,观察其对线粒体损伤的影响。结果补骨脂二氢黄酮甲醚给药24 h后,凋亡蛋白Bax/Bcl-2比例、caspase-3活性随药物浓度增大而增加,在6.25~25μmol·L^(-1)时,其凋亡率呈现明显的剂量依赖性,但在25μmol·L^(-1)时细胞以坏死为主。作用24 h后线粒体损伤相关指标明显加剧。结论补骨脂二氢黄酮甲醚作用于HepaRG细胞后通过损伤线粒体诱导细胞凋亡和坏死。

类叶升麻苷通过诱导血红素加氧酶-1的表达抑制MPP^+诱导的PC12细胞损伤

目的探讨类叶升麻苷(AS)是否在PC12细胞中诱导血红素加氧酶-1(HO-1)的表达进而抑制1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的神经毒性损伤。方法类叶升麻苷(1、20和30μmol/L)处理PC12细胞12 h,利用反转录PCR(RT-PCR)检测HO-1 mRNA表达、Western blot方法和免疫荧光方法检测HO-1蛋白的表达。1mmol/L MPP+单独或与AS处理细胞,或HO-1抑制剂锌原卟啉(Zn PP)预处理细胞1 h,MTT法检测细胞活力。结果与正常对照组相比,AS可在PC12细胞中诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达,AS诱导的HO-1表达主要集中在胞浆内。HO-1抑制剂Zn PP减弱AS对MPP+诱导损伤的抑制作用。结论 AS可在PC12细胞中诱导HO-1的表达,可能参与AS对MPP+诱导损伤的抑制作用。

相思子蛋白P2抗肝癌作用及对端粒酶活性影响

目的研究相思子蛋白P2对肝癌细胞生长的抑制作用及机制。方法体外实验:MTT法检测相思子蛋白P2对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。TRAP-SYBR-Green染色法检测相思子蛋白P2作用前后细胞端粒酶活性的改变。体内实验:相思子蛋白P2 50、75、100μg.kg-1连续灌胃给药10 d,观察对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的生长抑制作用。小鼠口服给药急性毒性观察。结果相思子蛋白P2可明显抑制HepG2细胞增殖,IC50值为5.172×10-3 mg.L-1。在5×10-5～1×10-3 mg.L-1剂量作用下,可引起HepG2细胞凋亡。相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,从而抑制了肿瘤细胞增殖。同时可使细胞端粒酶活性明显降低,其下调端粒酶活性的作用随药物浓度的增加而明显增强。相思子蛋白P2对小鼠H22肝癌细胞生长有明显抑制作用,100μg.kg-1抑瘤率达62.47%,且对胸腺和脾脏指数的影响较环磷酰胺小。小鼠口服给药LD50值为6.77 mg.kg-1。结论相思子蛋白P2体内外均可明显抑制肝癌细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与下调细胞端粒酶活性、改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡有关。

TALEN构建Fndc5基因敲除小鼠及初步分析

目的通过构建Fndc5基因敲除小鼠,为后续的研究提供动物模型。方法运用TALEN技术在Fndc5基因FNIII domain中造成缺失突变,并通过测序进行基因型鉴定。通过配对建立稳定遗传系并在mRNA和DNA水平鉴定出生小鼠基因型;对不同年龄段出生小鼠进行体重、血糖分析;通过q PCR确定Fndc5在肾脏、肝脏、大脑、肌肉、心脏等组织中的表达情况。结果成功构建并鉴定得到4种不同的Fndc5基因敲除小鼠品系;不同年龄段出生小鼠体重、血糖未见显著性差异;确定Fndc5在肌肉、心脏等组织中高表达。结论本实验在国际上成功构建了Fndc5基因敲除小鼠,并进行了初步分析,为深入研究Fndc5基因在体内中的功能提供了动物模型。